Diphtheria-Ab ELISA. Saggio immunoenzimatico per la determinazione quantitativa degli anticorpi anti-difterite nel siero e plasma umani.
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- Agostino Costantini
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1 Istruzioni per l Uso Diphtheria-Ab ELISA Saggio immunoenzimatico per la determinazione quantitativa degli anticorpi anti-difterite nel siero e plasma umani. RE C I B L I N T E R N A T I O N A L G M B H Flughafenstrasse 52a Phone: +49 (0) IBL@IBL-International.com D Hamburg, Germany Fax: +49 (0)
2 1. USO PREVISTO Il saggio immunoenzimatico IBL è sviluppato per la determinazione quantitativa degli anticorpi anti-difterite nel siero umano, nel plasma citrato, nel plasma-edta o nel plasma-eparina. Quando è da chiarire lo status della vaccinazione o quando la sua efficacia dev essere verificata. 2. SOMMARIO E SPIEGAZIONI La difterite non è ancora stata eradicata dall Europe [6] e molte manifestazioni sporadiche della malattia si sono verificate in Germania [4, 6, 13], con un tasso di letalità pari al 30%. La maggior parte dei casi di difterite in Germania sono originati da oltre confine, per quanto si siano riscontrati anche alcuni casi autoctoni. Anche le infezioni rare da difterite non devono ingannare riguardo all aumento del rischio potenziale di un infezione con questa patologia. Essendo le infezioni da difterite rare, l immunità naturale è poco significativa. Inoltre, i bassi tassi d immunizzazione nel passato hanno ridotto il numero d individui, adulti e bambini, che godono di una protezione immunitaria[1, 5, 6, 9]. I mutamenti di tipo politico hanno aumentato notevolmente la mobilità della popolazione dell Europa occidentale, dove la patologia è molto diffusa. Questo può portare a diffusioni endemiche. La patologia si trasmette attraverso gocce di liquido organico di piccole dimensioni [15] e individui a stretto contatto con altri (asili, scuole, personale militare, pendolarismo, ospedali, personale medico, etc.) sono particolarmente a rischio. Una vaccinazione attiva contro la difterite riduce il tasso di morbosità e di mortalità [12] e previene la diffusione della malattia. Con l uso dell IBL Diphteria ELISA la concentrazione di anticorpi anti-difterite si può determinare e quindi si può confermare lo status della vaccinazione (gestione della vaccinazione). Questo permette l identificazione degli individui non immunizzati. Inoltre si prò applicare la vaccinazione corretta (immunizzazione base o dose supplementare). Questo darà la garanzia di scongiurare la nuova insorgenza di questa malattia ormai perlopiù dimenticata. 3. PRINCIPIO DEL TEST L IBL Diphtheria-Ab ELISA è un test ELISA in due fasi. I pozzetti delle strip nel test ELISA sono rivestiti di toxoide difterico. Campioni diluiti di siero o di plasma vengono incubati nei pozzetti delle strip del test (incubazione dei campioni) Durante il periodo d incubazione anticorpi specifici contro il toxoide della difterite sono legati alla fase solida. Componenti non-specifiche vengono lavate via. Una reazione coniugata agisce da marcatore per gli anticorpi anti-difterite legati (incubazione coniugato). Il coniugato con perossidasi del toxoide difterico agisce da marcatore degli anticorpi anti-difterite legati. Il coniugato libero viene rimosso da una seconda fase di lavaggio. Nella terza fase d incubazione ha luogo la reazione del substrato. La perossidasi è parte del coniugato e, usando la tetrametilbenzidina TMB-Substrato (perossido di idrogeno), si ossida prendendo una colorazione blu. Si aggiunge acido solforico per arrestare la reazione e il colore cambia in giallo. L intensità del colore è direttamente proporzionale alla concentrazione di anticorpi antidifterite. La densità ottica si misura su una lunghezza d onda di 450 nm usando un lettore ELISA. Usando la curva di riferimento o la Calibrazione IBL One Point si può calcolare quantitativamente la concentrazione di anticorpi specifici contro il toxoide della difterite. 4. AVVERTENZE E PRECAUZIONI 1. Solo per uso diagnostico in-vitro. Solo per uso professionale. 2. Leggere attentamente le istruzioni prima di iniziare il test. Utilizzare il manuale fornito nel kit. Assicurarsi di aver compreso tutte le indicazioni. 3. In caso di danneggiamento del kit contattare IBL o il Vostro fornitore entro 1 settimana dal ricevimento della merce. Non utilizzare i componenti danneggiati ma conservarli per fornire prove del danno assieme al reclamo che inoltrerete al produttore/fornitore. 4. Rispettare lotto e scadenze. Non scambiare o mescolare tra loro reagenti di lotti diversi. Non usare i reagenti scaduti. 5. Attenersi alle Buone Pratiche di Laboratorio e alle direttive di sicurezza. Indossare camici, guanti in lattice e occhiali protettivi se necessario. 6. Alcuni reagenti del kit contengono sostanze pericolose che potrebbero causare irritazioni a pelle ed occhi. Consultare la sezione MATERIALE FORNITO e le etichette per i dettagli precisi. Schede di sicurezza del prodotto sono disponibili sul sito web IBL o su richiesta specifica ad IBL/fornitore. 7. I reagenti preparati e usati e le sostanze chimiche del kit devono essere trattati come rifiuti pericolosi secondo le normative di sicurezza e la legislazione vigente nel Paese in cui il prodotto viene usato. Version / 7
3 8. Il personale delle pulizie dev essere informato dal personale specializzato sui possibili rischi e sulle procedure da adottare. 9. Evitare il contatto con la soluzione stop. Può causare irritazioni e ustioni della pelle. 10. Tutti i reagenti del kit contenenti siero umano o plasma sono risultati negativi rispetto a HIV I/II, HBsAg e HCV. Si raccomanda tuttavia di trattarli come potenzialmente pericolosi poiché non si può escludere in maniera assoluta la presenza di questi o di altri agenti infettivi. 5. CONSERVAZIONE E STABILITÀ Il kit viene spedito e trasportato a temperatura ambiente e deve essere conservato a 2-8 C. Non esporre a luce solare diretta e ad alte temperature. I reagenti non aperti sono stabili fino alla data di scadenza indicata La piastra microtitrata aperta è stabile fino a scadenza del kit se conservata nel suo involucro ben chiuso riposta a 2 8 C. Le informazioni relative a conservazione e stabilità di tutti i reagenti e dei campioni sono riportate nel capitolo corrispondente. 6. PRELIEVO E CONSERVAZIONE DEI CAMPIONI Siero, Plasma Osservare le classiche precauzioni durante il prelievo venoso. Conservare l integrità del campione di sangue dal momento del prelievo al momento dell esecuzione del test. Non usare campioni emolizzati, itterici o lipemici. I campioni torbidi devono essere centrifugati per rimuovere il materiale particolato al loro interno. Conservazione: 2-8 C -20 C (Aliquote) Non esporre alla luce solare diretta e al calore. Stabilità: 5 giorni 12 mesi Evitare la ripetizione di cicli di congelamento/scongelamento. 7. MATERIALE FORNITO Quantità Simbolo Componente 1 x 12 x 8 MTP 1 x 0.6 ml ENZCONJ CONC 5 x 0.35 ml CAL x 0.35 ml Control LL Control HL 2 x 75 ml DILBUF 1 x 100 ml WASHBUF CONC 2 x 15 ml TMB SUBS 1 x 15 ml TMB STOP Micropiastra Pronto/a all uso. Strisce separabili. Rivestito con toxoide della Difterite. Coniugato Enzimatico Concentrato (100x) Di colore blu. toxoide della Difterite coniugato a perossidase. Calibratore 1-5 Concentrato Contiene: Siero umano, stabilizzatori, conservativos. Le concentrazioni sono lotto-specifiche come indicato sulle etichette del flacone. Calibrato/a contro WHO Standard (NIBSC 00/496). Controllo LL+HL Concentrato Controllo Positivo Siero, LL, Low Level, HL, High Level. Contiene: Siero umano, stabilizzatori, conservativos. Le concentrazioni sono lotto-specifiche come indicato sulle etichette del flacone. Tampone Diluente Pronto/a all uso. Di colore rosso. Contiene: detergenti, % (w/v) Thimerosal, 0.01 M Tris/HCl; ph 7.4. Tampone Lavaggio, Concentrato (10x) Contiene: tampone fosfato. Soluzione Substrato TMB Pronto/a all uso. Contiene: TMB (Tetramethylbenzidine). Soluzione Stop TMB Pronto/a all uso. Contiene: 0.5 M H 2 SO 4. 2 x FOIL Pellicola Adesiva Nota: Tampone Lavaggio, Tampone Diluente, Soluzione Substrato TMB, Soluzione Stop può essere sostituito dai seguenti prodotti :: TBE virus IgG (RE57401), TBE virus IgM (RE57411) e Tetanus-Ab (RE57441). Version / 7
4 8. MATERIALI NECESSARI MA NON FORNITI 1. Micropipette (Multipette Eppendorf o similari, < 3 % CV). Volumi: 5, 20, 100, 500, 1000 µl 2. Vortex mixer 3. Tubi per diluizione dei campioni 4. Micropipetta 8-Canali con contenitori per reagenti 5. Spruzzetta per lavaggi, lavatore per micropiastre automatico o semi automatico 6. Lettore per micropiastre in grado di leggere ad assorbanza di 450 nm (lunghezza d onda di riferimento nm) 7. Acqua bidistillata o deionizzata 8. Carta assorbente, puntali per pipette e timer 9. Il software "IBL One Point Calibration per la valutazione, che usa la versione Microsoft Excel 5.0 o superiori (il software verrà fornito gratuito su richiesta). 9. NOTE PER LA PROCEDURA 1. Qualsiasi manipolazione impropria dei campioni o modifica alla procedura può compromettere i risultati. Rispettare rigorosamente i volumi, i tempi e le temperature di incubazione e i passaggi di pretrattamento dei campioni indicati in metodica. Utilizzare pipette calibrate. 2. Una volta iniziato il test completare tutti i passaggi senza interruzioni. Assicurarsi che tutti i reagenti siano stati precedentemente preparati in tempo utile. Far raggiungere la temperatura ambiente ai campioni e ai componenti del kit (18-25 C) e mescolare delicatamente ciascun reattivo liquido e campione prima dell uso. Non creare schiuma durante il mescolamento. 3. Evitare la contaminazione di reagenti, pipette, pozzetti o provette. Usare puntali di plastica nuovi per ogni reagente, standard e campione. Non scambiare i tappi tra loro. Tappare sempre i flaconi non utilizzati. Non riutilizzare pozzetti/provette o reagenti. 4. Si consiglia di saggiare i campioni in doppio per poter identificare eventuali errori di pipettamento. 5. Usare uno schema di pipettamento per realizzare un appropriata distribuzione sulla piastra. 6. Il tempo di incubazione influisce sui risultati. Tutti i pozzetti dovrebbero essere dispensati nello stesso ordine e sequenza temporale. Si raccomanda una pipetta multicanale a 8 canali per pipettare le soluzioni in tutti i pozzetti. 7. Il lavaggio della micropiastra è importante. Pozzetti lavati in modo inappropriato possono portare a risultati erronei. Si raccomanda una pipetta multicanale o un lavatore automatico per piastre. Non far asciugare i pozzetti tra le varie incubazioni. Non graffiare i pozzetti rivestiti durante risciacqui e aspirazioni. Risciacquare e versare i reagenti con cura. Durante i risciacqui assicurarsi che i pozzetti siano ben riempiti con la soluzione di lavaggio e che non ci siano residui nei pozzetti. 8. L umidità influisce sui pozzetti/tubi rivestiti. Non aprire l involucro finché non ha raggiunto la temperatura ambiente. Riporre immediatamente i tubi/pozzetti non utilizzati nell involucro con il disseccante. 10. ISTRUZIONI PRE-TEST Preparazione di componenti concentrati (Esempio per 32 pozzetti) Diluire / dissolvere Componente con Diluente Rapporto Note Conserva Stabilità zione ENZCONJ Mischiare delicatamente. 80 µl 8 ml DILBUF 1:101 (Preparare immediatamente prima C 1 ora CONC dell uso.) 10 ml WASHBUF CONC 90 ml acqua bidist. 1:10 Mischiare delicatamente. 2-8 C 8 settimane Version / 7
5 10.2. Diluizione dei Standard, Controlli e Campioni CAL 1-5 CONTROL LL CONTROL HL da diluire con Rapport o Note sempre DILBUF 1:101 p.e. 10 µl CAL/Control µl Siero / Plasma sempre DILBUF 1:101 p.e. 10 µl Campione µl Per la determinazione con curva standard calibratori 1-5 e sieri di controllo sono necessari. Per la determinazione per mezzo di una calibratura ad un punto invece dei calibratori 1-5, usare solo il calibratore 4 ed i sieri di controllo. Campioni con concentrazioni superiori allo standard più alto devono essere ulteriormente diluiti. 11. PROCEDURA DEL TEST 1. Pipettare 200 µl di Calibratore, Controllo e campione diluiti nei rispettivi pozzetti del vassoio per Microprovette (i Calibratori devono essere messi nelle strip 1 e 2). 2. Coprire la piastra con pellicola adesiva. Incubare 60 min a TA (18-25 C). 3. Rimuovere la pellicola adesiva. Eliminare la soluzione d incubazione. Lavare la piastra 3 x con 250 µl di Tampone Lavaggio diluito. Rimuovere l eccesso di soluzione picchiettando la piastra capovolta su una salvietta di carta. 4. Pipettare in ogni pozzetto 200 µl di Conjugato Enzimatico diluito. 5. Coprire la piastra con pellicola adesiva. Incubare 60 min a TA (18-25 C). 6. Rimuovere la pellicola adesiva. Eliminare la soluzione d incubazione. Lavare la piastra 3 x con 250 µl di Tampone Lavaggio diluito. Rimuovere l eccesso di soluzione picchiettando la piastra capovolta su una salvietta di carta. 7. Per aggiungere le Soluzioni Substrato e Stop usare, possibilmente, una micropipetta 8-canali. Pipettare con intervalli di tempo costanti per le Soluzioni Stop e Substrato. Usare uno spostamento positivo ed evitare la formazione di bolle d aria. 8. Pipettare 200 µl di Soluzione Substrato TMB in ogni pozzetto. 9. Incubare 30 min a TA (18-25 C). 10. Fermare la reazione substrato aggiungendo 100 µl di Soluzione Stop TMB in ogni pozzetto. Mescolare delicatamente il contenuto agitando leggermente la piastra. 11. Misurare la densità ottica con un fotometro a 450 nm entro 10 min dopo aver pipettato la Soluzione Stop (Lunghezza d onda di riferimento: nm). 12. CONTROLLO DI QUALITA I risultati del test sono validi solo se il test è stato eseguito seguendo le istruzioni per l uso. L utente deve inoltre attenersi rigorosamente ai principi della BPL (Buona Pratica di Laboratorio) o a norme equivalenti. Gli utenti e il laboratorio devono avere un sistema di formulazione della diagnosi conforme alle Buone Pratiche di Laboratorio. Tutti i controlli devono risultare compresi entro gli intervalli accettabili indicati sulle etichette e il Certificato QC. Se i criteri non sono soddisfatti il test non è valido e dovrebbe essere ripetuto. Ogni laboratorio dovrebbe usare campioni noti come ulteriori controlli. Si consiglia la partecipazione a programmi di controllo qualità periodici. In caso di deviazioni devono essere forniti i seguenti dati: Scadenza dei reagenti (preparati), condizioni di conservazione, pipette, strumenti, condizioni d incubazione e metodi di lavaggio. Version / 7
6 13. CALCOLO DEI RISULTATI La determinazione di anticorpi specifici contro il toxoide della difterite si può eseguire sia con la curva standard, sia con la Calibrazione Ad Un Punto (One Point Calibration) Determinazione della curva standard La DO ottenute per gli standard (asse y, lineare) sono messe in grafico rispetto alla loro concentrazione (asse x, logaritmico) sia su carta per grafico semilogaritmico che con metodo automatico. Buoni risultati si ottengono con grafici cubic spline, 4 Parametri Logistica o Logit-Log. Per il calcolo della curva standard utilizzare ogni segnale degli standard (omettere ovviamente i valori dei duplicati molto al di fuori dei risultati attesi e impiegare il valore singolo più plausibile). La concentrazione dei campioni può essere ricavata dalla curva standard. La diluizione iniziale consigliata in queste istruzioni è stata tenuta in considerazione per l evaluazione descritta sopra. I risultati dei campioni con prediluizioni superiori devono essere moltiplicati per il fattore di diluizione. I campioni con concentrazioni superiori al più alto degli standard devono essere diluiti come descritto nel paragrafo ISTRUZIONI PRE-TEST e ritestati Determinazione con Calibrazione One Point Il software "IBL One Point Calibration per la valutazione, che usa la versione Microsoft Excel 5.0 o superiori, verrà fornito su richiesta. Dopo aver aperto il file Excel IBL One Point Calibration, premere enter - il valore nominale dell assorbanza del calibratore 4, - l assorbanza misurata del calibratore 4 (valori medi) - il range di assorbanza del calibratore 4 e - i coefficienti A, B, C e D della curva di riferimento nelle celle preparate. L assorbanza del calibratore 4 deve rientrare nel range indicato (vedi certificato QC) Collocare i valori medi d identificazione ed assorbanza dei sieri e dei campioni di controllo nel foglio di calcolo preparato. La correzione dell assorbanza e il calcolo delle concentrazioni verrà eseguito automaticamente. Criteri di validazione Il saggio è valido se l assorbanza del calibratore 4 rientra nel range indicato e se le concentrazioni nei sieri di controllo vengono letti all interno del range stabilito Controllo delle Concentrazioni di Campioni Calcolate Campioni con un assorbanza superiore a quella della curva di standard devono essere prediluiti (1+4) con tampone da incubazione. Le concentrazioni così ottenute devono essere moltiplicate per il fattore 5. La conversione del plasma citrato in valori sierologici si ottiene moltiplicando le concentrazioni registrate per il fattore INTERPRETAZIONE DEI RISULTATI Nella letteratura [1, 2, 3, 5, 6, 7, 10, 13, 14] sono indicati i seguenti valori sui gradi di protezione dalla difterite "nessuna protezione" con concentrazioni di anticorpi anti-difterite inferiori a 0.01 IU/mL, "protezione incerta" da 0.01 a 0.09 IU/mL. e "protezione individuale sicura" con concentrazioni superiori a 0.1 IU/mL. Poiché le concentrazioni di anticorpi anti-difterite diminuiscono col tempo [2], secondo la letteratura specifica nella tabella qui di seguito si fanno le seguenti raccomandazioni per la valutazione del test [8,11]. Il risultato del test dev essere valutato dal medico in ogni singolo caso, tendo conto della precisione specifica del test. < 0.1 IU/mL immunizzazione di base immediata IU/mL dose supplementare immediata >1.0.5 IU/mL dose supplementare dopo 5 anni > IU/mL dose supplementare dopo 7 anni >2.0 IU/mL dose supplementare dopo 10 anni Si raccomanda un controllo dell immunizzazione di base o della dose supplementare con un test sierologico 4-8 settimane dopo l immunizzazione ed una registrazione della concentrazione degli anticorpi anti-difterite nel libretto di vaccinazione. Version / 7
7 15. PERFORMANCE Gli standard sono calibrati in base allo standard WHO (NIBSC 00/496). Precisione: Recupero: La deviazione dal valore teorico è <20%. Variazione intradosaggio basata sulla concentrazione: <10%. Variazione interdosaggio basata sulla concentrazione: <12%. Il valore più besso di rilevamento è: 0.08 IU/mL. Range di misurazione : IU/mL. Linearità di diluizione: <10%. Correlazione con un test di neutralizzazione (Bablok&Passing): 88%. 16. RIFERIMENTI BIBLIOGRAFICI SUL PRODOTTO 1. Allerdist, H.: Die Immunitätslage gegenüber Diphtherie. Dtsch. med. Wschr., 106, 1737 (1981) 2. Christenson, B. und Böttiger, M.: Serological immunity to diphtheria in Sweden in 1978 and Scand. J. Infect Dis. 18, 227 (1986) 3. Kjeldsen, K. et al.: Immunity against diphtheria years after primary vaccination in childhood. Lancet, 1, 900 (1985) 4. Müller, T.: Diphtherieausbruch in Reutlingen. Dtsch. Ärzteb. 86, 39 (1989) 5. Naumann, P. et al.: Diphtherie-Immunität und ihre epidemiologische Bedeutung. Dtsch. med. Wschr., 108, 1090 (1983) 6. Naumann, P. und Weber, H.-G.: Diphtherie-Immunität bei Schulanfängern und nach Wiederimpfung mit d-impfstoff. Dtsch. med. Wschr., 117, 1308 (1992) 7. Nelson, L. A. et al.: Immunity to diphtheria in an urban population. Pediatrics, 61, 703 (1978) 8. Pietsch, M.: Impfserologie zur Ergänzung von Impfungen. Allgemeinarzt, 18, 1155 (1993) 9. Pietsch, M. et al.: Immunitätslücken gegen Diphtherie und Tetanus bei Kindern und Jugendlichen.Sozialpädiatrie, 15 (7), 410 (1993), 10. Pilars de Pilar, C. E. und Spiess, H.: Diphtherie- und Tetanusantikörper bei Kindern und jungen Erwachsenen. Dtsch. med. Wschr., 106, 1341 (1981) 11. Scheibel, I. et al.: Duration of Immunity to Diphtheria and Tetanus after Active Immunization. Acta path. microbiol. scand., 67, 380 (1966) 12. Spiess, H.: Diphtherieschutzimpfung. In: Impfkompendium, Thieme Verlag, Stuttgart, New York, 3. Auflage (1987) 13. Thilo, W. et al.: Serologische Immunität gegen Diphtherie Z. klin. Med., 42, 1807 (1987) 14. Wagner, G. und Schumann, H.: Die Diphtherie eine fast vergessene und doch aktuelle Krankheit. Wehrmed. Mschr., 35, 199 (1991) 15. Diphtheria Outbreak Russian Federation, : Morb. Mortal. Wkly. Rep. 42 (43), 840 (1993) 16. Naumann, P. und Nemes, G.: Die Diphtherie und ihre aktuelle Bedeutung. Dtsch Ärzteb., 79 (51/52), 21 (1982) 17. Togni, G. u. a.: Präanalytik. Schweiz. Med. Forum (2002) Version / 7
8 17. PROTOCOLLO CORTO ISTRUZIONI PRE-TEST DILUZIONE Volume DILBUF acqua bidist. Rapporto Note WASHBUF CONC 10 ml 90 ml 1:10 Esempio per 32 pozzetti ENZCONJ CONC 80 µl 8 ml 1:101 CAL 1-5, Control LL, Control HL 10 µl ogni 1000 µl ogni 1:101 DILUZIONE DI CAMPIONI Volume DILBUF Rapporto Note Soro/ Plasma 10 µl 1000 µl 1:101 PROCEDURA DI DOSAGGIO CAL 1-5, Control LL, Control HL (diluiti) / Campioni (diluiti) 200 µl Incubare 60 min. a C. Aspirare il contenuto di ogni pozzetto. Lavare 3 volte con 0.25 ml de Tampone Lavaggio (diluito) ed aspirare. Coniugato Enzimatico (diluito) 200 µl Incube 60 min. a C. Aspirare il contenuto di ogni pozzetto. Lavare 3 volte con 0.25 ml de Tampone Lavaggio (diluito) ed aspirare. TMB SUBS 200 µl Incubare 30 min. a C. TMB STOP 50 µl Misurare la densità óttica con un fotometro a 450 nm (lunghezza d onda di riferimento: nm). Version / 7
9 Symbols / Symbole / Symbôles / Símbolos / Símbolos / Σύµβολα REF LOT Cat.-No.: / Kat.-Nr.: / No.- Cat.: / Cat.-No.: / N.º Cat.: / N. Cat.: / Αριθµός-Κατ.: Lot-No.: / Chargen-Bez.: / No. Lot: / Lot-No.: / Lote N.º: / Lotto n.: / Αριθµός -Παραγωγή: Use by: / Verwendbar bis: / Utiliser à: / Usado por: / Usar até: / Da utilizzare entro: / Χρησιµοποιείται από: No. of Tests: / Kitgröße: / Nb. de Tests: / No. de Determ.: / N.º de Testes: / Quantità dei tests: / Αριθµός εξετάσεων: CONC Concentrate / Konzentrat / Concentré / Concentrar / Concentrado / Concentrato / Συµπύκνωµα LYO IVD Lyophilized / Lyophilisat / Lyophilisé / Liofilizado / Liofilizado / Liofilizzato / Λυοφιλιασµένο In Vitro Diagnostic Medical Device. / In-vitro-Diagnostikum. / Appareil Médical pour Diagnostics In Vitro. / Dispositivo Médico para Diagnóstico In Vitro. / Equipamento Médico de Diagnóstico In Vitro. / Dispositivo Medico Diagnostico In vitro. / Ιατρική συσκευή για In-Vitro ιάγνωση. Evaluation kit. / Nur für Leistungsbewertungszwecke. / Kit pour évaluation. / Juego de Reactivos para Evaluació. / Kit de avaliação. / Kit di evaluazione. / Κιτ Αξιολόγησης. Read instructions before use. / Arbeitsanleitung lesen. / Lire la fiche technique avant emploi. / Lea las instrucciones antes de usar. / Ler as instruções antes de usar. / Leggere le istruzioni prima dell uso. / ιαβάστε τις οδηγίες πριν την χρήση. Keep away from heat or direct sun light. / Vor Hitze und direkter Sonneneinstrahlung schützen. / Garder à l abri de la chaleur et de toute exposition lumineuse. / Manténgase alejado del calor o la luz solar directa. / Manter longe do calor ou luz solar directa. / Non esporre ai raggi solari. / Να φυλάσσεται µακριά από θερµότητα και άµεση επαφή µε το φως του ηλίου. Store at: / Lagern bei: / Stocker à: / Almacene a: / Armazenar a: / Conservare a: / Αποθήκευση στους: Manufacturer: / Hersteller: / Fabricant: / Productor: / Fabricante: / Fabbricante: / Παραγωγός: Caution! / Vorsicht! / Attention! / Precaución! / Cuidado! / Attenzione! / Προσοχή! Symbols of the kit components see MATERIALS SUPPLIED. Die Symbole der Komponenten sind im Kapitel KOMPONENTEN DES KITS beschrieben. Voir MATERIEL FOURNI pour les symbôles des composants du kit. Símbolos de los componentes del juego de reactivos, vea MATERIALES SUMINISTRADOS. Para símbolos dos componentes do kit ver MATERIAIS FORNECIDOS. Per i simboli dei componenti del kit si veda COMPONENTI DEL KIT. Για τα σύµβολα των συστατικών του κιτ συµβουλευτείτε το ΠΑΡΕΧΟΜΕΝΑ ΥΛΙΚΑ. IBL AFFILIATES WORLDWIDE IBL International GmbH Flughafenstr. 52A, Hamburg, Germany IBL International Corp. 194 Wildcat Road, Toronto, Ontario M3J 2N5, Canada Tel.: + 49 (0) Fax: IBL@IBL-International.com WEB: Tel.: +1 (416) Fax: Sales@IBL-International.com WEB: LIABILITY: Complaints will be accepted in each mode written or vocal. Preferred is that the complaint is accompanied with the test performance and results. Any modification of the test procedure or exchange or mixing of components of different lots could negatively affect the results. These cases invalidate any claim for replacement. Regardless, in the event of any claim, the manufacturer s liability is not to exceed the value of the test kit. Any damage caused to the kit during transportation is not subject to the liability of the manufacturer Symbols Version 3.5 /
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