Gli rrnas sono gli RNAs più abbondanti nelle cellule. Nelle cellule in attiva proliferazione rappresentano l 80% dell RNA totale
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3 Gli rrnas sono gli RNAs più abbondanti nelle cellule. Nelle cellule in attiva proliferazione rappresentano l 80% dell RNA totale
4 I geni che codificano gli rrna sono presenti in copia multipla nel genoma di tutti gli organismi (7 copie in E. coli 200 copie nell uomo)
5 NTS = sequenza spaziatrice non trascritta ETS = spaziatore esterno trascritto ITS = spaziatore interno trascritto
6 Gli RNA 28S, 18S e 5,8S sono trascritti contemporaneamente sotto forma di un grande precursore (rrna 45S) dalla RNA polimerasi I L rrna 5S è trascritto dalla RNA polimerasi III
7 Maturazione degli rrna L rrna 45S, nel nucleolo, viene prima modificato chimicamente e successivamente tagliato per dare origine agli rrna maturi
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9 Le modificazioni chimiche consistono nella metilazione del ribosio e nella modificazione dell uridina a pseudouridina ad opera di complessi enzimatici (snornp)
10 snornp snornas + proteine snorna = small nucleolar RNAs
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12 L inizio della trascrizione da parte dell RNA pol I è controllato: da un promotore che coincide con il sito d inizio della trascrizione; da una sequenza posta a 5 del promotore UCE (upstream control element).
13 GTF1 L RNA pol I richiede due Fattori Generali SL1 e UBF. SL1 è costituito da TBP e da 3 TAF1
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15 Importanza della sintesi dell rrnas nelle cellule in attiva proliferazione Controllo della sintesi degli rrna nei processi neoplastici
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19 trna
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21 Nell uomo troviamo 48 differenti trna codificati da circa 500 geni 61 codoni 20 aminoacidi 48 trna
22 Alcuni trnas richiedono l appaiamento accurato delle basi soltanto nelle prime due basi del codone e possono tollerare un appaiamento errato in terza posizione (tentennamento o wobble)
23 La trascrizione (RNA pol III) e la maturazione dei trnas avviene nel nucleoplasma
24 Modificazioni post-trascrizionali dei trna Eliminazione della sequenza al 5 Aggiunta di CCA al 3 Modificazione di alcune basi azotate In alcuni trna eliminazione di un piccolo introne
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26 I geni della III classe (trascritti dalla RNA pol III) sono spesso caratterizzati da promotori interni al gene. Per i geni codificanti i trnas sono necessari 2 fattori generali di trascrizione TFIIIB e TFIIIC. TFIIIB è costituito da TBP e da almeno un TAF3.
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28 Nella trascrizione dell rrna 5S interviene un terzo fattore TFIIIA.
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31 Le sequenze nucleotidiche dei mirna si sono conservate nel corso dell evoluzione; I loro geni possono essere localizzati sia in regioni intergeniche che all interno di geni di seconda classe (di solito in introni o in esoni non tradotti; Molte volte troviamo cluster di geni; Vengono trascritti (RNA pol II) quindi in modo indipendente o contemporaneamente al gene che li ospita; Subiscono un processo di maturazione sia nucleare che citoplasmatico.
32 mirna GENOMICS: INTERGENIC; INTRONIC; EXONIC AND Zhao Y and Srivastava D, 2007
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34 microrna BIOGENESIS Il processo di maturazione dei mirna è estremamente complesso TRASCRIZIONE Pri-miRNA MATURAZIONE NUCLEARE Pre-miRNA TRASPORTO NEL CITOPLASMA MATURAZIONE CITOPLASMATICA mirna maturo
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36 Generalmente i geni codificanti per mirna sono trascritti nel nucleo dalla RNA-polimerasi II che dà vita a lunghi trascritti, i pri-mirna, che presentano il cap e la poliadenilazione. Questi ultimi vengono processati da un RNasi III, Drosha,e dal suo cofattore, Pasha. Si ottengono così trascritti di circa 70 nucleotidi, detti pre-mirna Successivamente le proteine RAN-GTP ed exportin 5 trasportano i pre-mirna dal nucleo al citoplasma. Un altra RNasi III, Dicer, li processa per generare molecole di RNA duplex di circa 22 nucleotidi. Queste molecole vengono caricate nel complesso mirisc (mirna-associated multiprotein RNA-induced silencing complex). I mirna maturi a singolo filamento vengono poi mantenuti all interno del complesso. I mirna possono avere due modi diversi d agire a seconda della complementarietà che vi è tra il mirna e il suo target. Complementarità perfetta: degradazione dell mrna. Complementarità imperfetta: blocco della traduzione.
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