Sensibilità e valore predittivo di HPV-mRNA e di p16/ki67: studio NTCC2
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- Eloisa Milani
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1 Sensibilità e valore predittivo di HPV-mRNA e di p16/ki67: studio NTCC2 Giovedì 30 Maggio - Venerdì 31 Maggio 2019 Centro Congressi Hotel Nautico Riccione Mercoledì 29 Elena Allia Centro Unificato Screening Cervicovaginale Torino
2 Razionale dello studio NTCC2 (New Technologies for Cervical Cancer 2) Trial multicentrico randomizzato all interno di programmi di screening con test HPV-DNA primario identificare BIOMARCATORI di rischio di progressione tumorale che, migliorando la bassa specificità del test HPV-DNA, possano distinguere la popolazione non a rischio (no colposcopia) da quella a rischio maggiore (colposcopia) limitare il tasso di invio in colposcopia limitare sovra-diagnosi / sovra-trattamento
3 QUALI BIOMARCATORI? CRITERI DI SCELTA identificare le alterazioni molecolari connesse alla TRASFORMAZIONE piuttosto che alla rilevazione dell infezione virale monitorare direttamente o indirettamente l'espressione degli oncogeni virali trasformanti E6/E7 documentata sensibilità/specificità commercialmente disponibili e certificati automazione (riproducibili)
4 MONITORAGGIO DIRETTO = mrna Il test rileva l espressione degli oncogeni virali codificanti per le proteine E6/E7 prodotte esclusivamente quando il DNA virale è INTEGRATO e la cui aumentata espressione è maggiormente predittiva di una possibile PROGRESSIONE TEST APTIMA (HOLOGIC) - test qualitativo - amplificazione mediata da trascrizione di 14 tipi di HR-HPV (16,18,31,33,35,39,45,51,52,56,58,59,66,68); no genotipizzazione - segnale misurato in unità di luce relativa (Relative Light Units, RLU) - risultati espressi come rapporto segnale/cutoff dell analita (S/CO); pos se > 0,5 - automatizzato su piattaforma Panther (Hologic)
5 MONITORAGGIO INDIRETTO = p16 ink4a /Ki-67 p16 ink4a = marcatore anti-proliferativo controlla, insieme a prb, l arresto del ciclo cellulare nei processi di differenziazione; overespressione in cell HPV+ Ki67= marcatore proliferativo Scarsa (o assente) espressione in cell normali mature La simultanea espressione dei due biomarcatori nelle stessa cellula dell epitelio cervicale è un marker di DEREGOLAZIONE del ciclo cellulare TEST CINtec Plus Cytology (ROCHE DIAGNOSTICS) - doppia incubazione con Ab monoclonali diversi, doppio sistema di rilevazione (p16 ink4a = DAB e Ki67= Fast Red) - test morfologia-indipendente, positivo se 1 sola presenta doppia colorazione - automatizzato su piattaforma BenchMark Ventana (Roche Diagnostics)
6 OBIETTIVI NTCC2 Confrontare la performance di mrna E6-E7 e p16/ki67 come test di triage nello screening della cervice uterina rispetto alla citologia in donne HPV-DNA + Misurare detection rate cumulativa di CIN2+ nei 5aa a seguito di un test HPV-DNA pos e di un biomarcatore (p16/ki67 o mrna) neg. Misurare la riduzione della sovra-diagnosi con l introduzione di un triage citologico o con mrna o p16/ki67 rispetto all invio diretto alla colposcopia per le donne HPV-DNA+
7 DISEGNO DELLO STUDIO HPV-DNA POS mrna/p16/ki67 NEG 1000 samples CITOLOGIA TRIAGE mrna ASCUS+ NEG - + COLPO Randomizzazione COLPO COLPO 12m HPV-DNA mrna/p16/ki67 ROUND SUCCESSIVO (5aa) + - COLPO ROUND SUCCESSIVO (4aa)
8 CENTRI PARTECIPANTI RECLUTAMENTO E TEST HPV-DNA Torino, Trento, Padova, Firenze, Perugia TEST mrna Torino, Firenze ALLESTIMENTO ICC p16/ki67 Torino, Firenze, Perugia, Roma LETTURE ICC p16/ki67 Torino, Trento, Este, Reggio Emilia, Firenze, Perugia, Roma ELABORAZIONE DATI Reggio Emilia
9 POPOLAZIONE IN STUDIO CRITERI DI INCLUSIONE / ESCLUSIONE aa (previo consenso informato); HPV-DNA+ no in gravidanza no intervento per CIN2+ nei 5aa precedenti FOLLOW UP L'inserimento in programmi di screening permette di avere un naturale follow-up fino al round di screening successivo (5aa) e di utilizzare sistemi informatici e gestionali già attivi PERIODO ARRUOLAMENTO maggio 2013 (PG) - febbraio 2017 (TO)
10 METODI TEST HPV-DNA (HC2, Qiagen / Cobas 4800, Roche) BIOBANCA
11 RISULTATI 3147 HPV-DNA+ / donne arruolate 7,8% ADESIONE COLPOSCOPIA > 88% % 88,5% 92% HPV+/CITO+ RANDOMIZZAZIONE HPV+ RIP A 1AA
12 COLPOSCOPY REFERRAL 3147 donne HPV+ al reclutamento Immediate % 1y follow up % TOT % Cytology 26,4 39,3 65,7 mrna 66,5 11,6 78,0 p16/ki67 28,2 30,6 58,8 p16/ki67 + n.v 38,2 30,6 68,8 n.v.= non valutabili
13 SENSITIVITY, SPECIFICITY, PPV FOR CIN2+ SENSIBILITA raw% (95%CI) SENSIBILITA raw% (95%CI) SPECIFICITA raw% (95%CI) SPECIFICITA raw% (95%CI) VPP CYTOLOGY 66,1% 64,2% 75,6% 71,7% 15% (58,5-73,1) (56,8-71,3) (74,0-77,1) (70,0-73,3) mrna 96,0% 96,1% 34,7% 34,8% 10% (91,9-98,4) (92,1-98,4) (33,0-36,5) (33,1-36,5) p16/ki67 82,6% (75,9-88,1) 82,4% (75,7-87,9) 68,8% (67,0-70,6) 68,9% (67,1-70,7) 17% p16/ki67 +n.v. 83,9% (77,6-89,0) 83,8% (77,6-88,9) 69,2% (67,4-70,9) 61,9% (60,1-63,6) 14% n.v.= non valutabili
14 CONCLUSIONI Buona adesione al protocollo La positività di mrna è troppo alta per un uso efficiente come test di triage
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16 CONCLUSIONI Buona adesione al protocollo La positività ad mrna è troppo alta per un uso efficiente come test di triage La p16/ki-67 ha un tasso di positività più alto della citologia, MA ha una migliore sensibilità e PPV a parità di specificità Potrebbe permettere intervalli più lunghi in donne HPV-positive ma negative al test di triage, rendendo più efficiente l algoritmo Valutazione detection rate, regressività e costi
17 NTCC2 WORKING GROUP The following are members of the New Technologies for Cervical Cancer 2 Working Group: from Regione Lazio, Alessandra Barca and Francesco Quadrino; from Regina Elena National Cancer Institute, Rome, Italy, Maria Benevolo, Amina Vocaturo, and Francesca Rollo; from Reggio Emilia, Paolo Giorgi Rossi and Laura Bonvicini, Pamela Mancuso, Francesco Venturelli; from ISPRO Firenze, Francesca Maria Carozzi, Karin Andersson, Simonetta Bisanzi, Stefania Capassoni, Massimo Confortini, Carmelina Di Pierro, Giulia Fantacci, Anna Iossa, Marzia Matucci, Paola Mantellini, Alessandra Mongia, Giampaolo Pompeo, Donella Puliti, and Andrea Baldini; from CPO Torino, Guglielmo Ronco, Raffaella Rizzolo, Anna Gillio Tos, Laura DeMarco, Elena Allia, and Bruno Ghiringhello; from Trento, Mattia Barbareschi, Paolo Dalla Palma, Salvatore Girlando, Enzo Polla, Teresa Pusiol, Sara Condini, and Emma Bragantini; from Umbria, Basilio Passamonti, Daniela Gustinucci, Simonetta Bulletti, Elena Cesarini, Nadia Martinelli, Gabriella Vinti, Graziella Principi, Arturo Fabra, Antonella Lucaccioni, Angela Carlani, and Maria Donata Giaimo; from Veneto, ULSS 17 Este, Maria Gabriella Penon, Natalina Marchi, Angelo Farruggio, and Alessandra Bertazzo; from IOV, Annarosa Del Mistro, Helena Frayle, Martina Rizzi, and Silvia Gori; from Registro Tumori del Veneto, Manuel Zorzi; and from Coordinamento Regionale Screening Oncologici, Chiara Fedato and Adriana Montaguti. Grazie dell attenzione
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