Ac. TRICLOROACETICO (TCA) Urinario in GC/ECD o GC/MS spazio di testa Codice GC17010
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- Virginia Antonelli
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1 Ac. TRICLOROACETICO (TCA) Urinario in GC/ECD o GC/MS spazio di testa Codice GC170 BIOCHIMICA L'Acido tricloroacetico (TCA) è il metabolita urinario più significativo del tricloroetilene. E un solvente fumigante utilizzato per il lavaggio a secco e come sgrassante. Viene assorbito per inalazione e per via cutanea determinando a dosi elevate un azione cutanea irritante ed un effetto nefrotossico. Si ritrova nelle urine di soggetti esposti professionalmente a vapori di trielina e ad altri solventi clorurati oppure nelle urine di tossicodipendenti abituati a sniffare solventi o in casi di ingestione volontaria o accidentale di trielina o derivati. La determinazione analitica si basa sulla reazione di Fujiwara che prevede lo sviluppo di colore rosso facendo reagire l'acido tricloroacetico con piridina in ambiente alcalino, ma tale metodologia è aspecifica. Il metodo proposto determina l acido tricloroacetico, previa decarbossilazione, iniettando in GC-MS o GC-ECD/spazio di testa un aliquota di campione urinario precedentemente trattata in opportuno solvente. I livelli del TCA vengono determinati su un campione urinario di inizio e fine turno. EUREKA srl LAB DIVISION VAT N info@eurekaone.com Head Quarter: Via Enrico Fermi Chiaravalle (AN) ITALY Tel Fax Release N 002 Ac. Tricloroacetico urinario in GC/ECD o MS-spazio di testa Maggio 20 1
2 CARATTERISTICHE DEL KIT Principio del metodo : Il presente metodo consente di determinare l Acido tricloroacetico urinario in GC/ECD e/o in GC/MS spazio di testa. Il TCA, previa diluizione, viene trattato con uno stabilizzante ed un derivatizzante per 1 ora a 0 C; la soluzione viene direttamente iniettata in GC. Recupero del Metodo : 98% Sensibilità del Metodo : Range dinamico : Valori di riferimento : Contenuto della Confezione : 0,001mg/l in ECD 0,01mg/l in MS 0, mg/l in ECD 0,01-120mg/l in MS < 0,06 mg/l in soggetti non esposti < 0 mg/l in urine di fine turno Tutti i reagenti sono pronti all uso e stabili 3 anni a temperatura ambiente ( < 20 C) Reagente A Soluzione Diluente, 1 x 0 ml Reagente B Soluzione Stabilizzante, 1 x 80 ml Reagente C Soluzione Derivatizzante, 1 x 3 ml Reagente L Soluzione Test, 1 x 3 ml Reagente N Calibratore liofilo urinario, 1 x ml Vedi Avvertenze Dotazione strumentale minima richiesta : Strumento GC/ECD o GC/MS Computer gestionale Dotazione opzionale : Autocampionatore Modalità di prelievo : Alla fine del turno lavorativo, raccogliere ml di urine in una provetta idonea. Stabile circa 60 giorni a 20 C. 2
3 PROCEDURA PREANALITICA Preparazione della Soluzione Test a 1700 mg/l Dispensare in una vial da ml per spazio di testa: 1950µl di Reagente A Soluzione Diluente 50µl di Reagente L Soluzione Test Chiudere ermeticamente le vials IMPORTANTE: Tale soluzione Test va preparata di volta in volta e non va assolutamente usata per calibrare i campioni Iniettare 00 µl della soluzione nel gascromatografo GC ed attendere la stampa del cromatogramma. Verificare che il tempo di ritenzione della soluzione sia simile a quello riportato in figura 1 e 9. Se l esito è positivo si puo procedere alla seduta analitica. Se cosi non fosse verificare la funzionalità del sistema analitico. PROCEDURA ANALITICA FASE 1 : Preparazione del Campione Dispensare nelle vials da ml: Calibratore Controllo Campione Reagente N Calibratore 200 µl Controllo 200 µl Campione 200 µl Reagente A Soluzione Diluente 00 µl 00 µl 00 µl Reagente B Sol. Stabilizzante 800 µl 800 µl 800 µl Reagente C Sol. Derivatizzante 25 µl 25 µl 25 µl Chiudere ermeticamente le vials FASE 2 : Porre le vials in forno a 0 C per 1h. Lasciar raffreddare 30 minuti a temperatura ambiente Inserirle nel Campionatore FASE 3 : Iniettare 00 µl nel GC Preparare la lista di lavoro e avviare la serie secondo le specifiche del sistema Release N 002 Ac. Tricloroacetico urinario in GC/ECD o MS-spazio di testa Maggio 20 3
4 REAGENTE L : SOLUZIONE TEST ACIDO TRICLOROACETICO - Avvertenze Acido Tricloroacetico Circa mg/l REAGENTE N : CALIBRATORE LIOFILO Lotto n ZUR637 Acido Tricloroacetico Modalità d uso: i Calibratori devono essere usati per calibrare il sistema GC/ECD o GC/MS. Aggiungere esattamente ml di H 2 O di grado HPLC e agitare delicatamente per 15 min. fino a quando tutto il materiale non è dissolto. Prima del campionamento rimescolare gentilmente per assicurarne l omogeneità. Conservazione e stabilità: i Calibratori liofili sono stabili 48 mesi dalla data di preparazione se conservati a 2 8 C. Almeno 12 ore a temperatura ambiente, 15 giorni se conservati a 2 8 C e 2 mesi a 20 C una volta ricostituiti. Non usarli dopo la data di scadenza. Dopo l uso richiudere immediatamente il flacone. Confezionamento: 1 x ml Precauzioni: questo calibratore in matrice umana deve essere trattato con cura e considerato come potenzialmente infettivo. 53 mg/l SETTAGGIO DEL GAS-CROMATOGRAFO : Colonna VF-5 ms 30m x 0,25mm, 0,25µm Temperatura siringa: 40 C Temperatura agitatore: 40 C (1minuto) no agitazione Temperatura iniettore 200 C Rapporto di Splittaggio circa 1:20 Flusso Gas Elio 1 ml/min Temperatura forno colonna 40 C x 5 minuti SETTAGGIO DETECTOR DI MASSA : Temperatura della Massa 180 C Temperatura Manifold: 80 C Temperatura Transfer Line: 270 C Modo operativo in Impatto Elettronico (EI) Range di Massa Filamento on: 1 minuto SETTAGGIO DETECTOR ECD : Temperatura 260 C isoterma Sensibilità alta () CONDIZIONAMENTO DELLA COLONNA VF-5 MS Seguire le prescrizioni del costruttore. All inizio di ogni seduta analitica effettuare la calibrazione delle masse e delle RF. PULIZIA DELLA COLONNA Al termine di ogni seduta analitica portare il gradiente alla massima temperatura della colonna (consigliata dal costruttore) con una velocità di 30 C/minuto. Vedere istruzioni del costruttore. PARAMETRI COMPUTER GESTIONALE SECONDO LE SPECIFICHE DEL SOFTWARE GESTIONALE 4
5 (Cromatogrammi/spettri di riferimento GC-MS / Spazio di Testa) M C o u n ts 40 45:200 Soluzione Test.SM S 45:200 Filtered 0% Spectrum 1A B P : min, Scan: 236, 45:300, Ion: 885 us, RIC: , BC Chloroform min 75% % 25% % m in u te s m /z Fig. 1 : Soluzione Test Fig. 2 : Spettro di Massa di Test R.T TCA Ione Molecolare 83 5
6 (Cromatogrammi/spettri di riferimento GC-MS / Spazio di Testa) M C o u n ts 45: Calibratore U rinario.sm S 45:200 Filtered 0% Spectrum 1A BP: m in, Scan: 236, 45:300, Ion: 885 us, RIC: , BC % % 1.0 Chloroform min 25% % m in u te s m /z Fig. 3 : Calibratore urinario Fig. 4 : Spettro di Massa di Calibratore R.T TCA 53 mg/l Ione Molecolare 83 6
7 (Cromatogrammi/spettri di riferimento GC-MS / Spazio di Testa) M C o u n ts :200 Controllo Urinario Livello-1.SM S 45:200 Filtered 0% Spectrum 1A B P : min, Scan: 236, 45:300, Ion: 885 us, RIC: , B C % % Chloroform min 25% % m in u te s m /z Fig. 5 : Controllo urinario livello 1 Fig. 6 : Spettro di Massa di Controllo livello 1 R.T TCA 22 mg/l Ione Molecolare 83 7
8 (Cromatogrammi/spettri di riferimento GC-MS / Spazio di Testa) M C o u n ts 45: Controllo Urinario Livello-2.SM S 45:200 Filtered 0% Spectrum 1A BP: min, Scan: 236, 45:300, Ion: 885 us, RIC: , B C Chloroform min % % % % m in u te s m /z Fig. 7 : Controllo urinario livello 2 Fig. 8 : Spettro di Massa di Controllo livello 2 R.T TCA 119 mg/l Ione Molecolare 83 8
9 (Cromatogrammi/spettri di riferimento GC-ECD / Spazio di Testa) mvolts WI:2 mvolts WI: TCA (3.441) TCA TCA TCA (3.440) Minutes Minutes Fig. 9 : Soluzione Test Fig. : Calibratore urinario R.T TCA R.T TCA 53 mg/l 9
10 (Cromatogrammi/spettri di riferimento GC-ECD / Spazio di Testa) WI:2 WI:2 mvolts mvolts 50 TCA TCA (3.442) TCA (3.441) TCA Minutes Minutes Fig. 11 : Controllo urinario livello 1 Fig. 12 : Controllo urinario livello 2 R.T TCA 18 mg/l R.T TCA 94 mg/l
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