Cytologic, cytogenetic and genomic study of tumor stem cell lines from glioblastoma multiforme and evaluation of antineoplastic drugs effects

Transcript

1 Cytologic, cytogenetic and genomic study of tumor stem cell lines from glioblastoma multiforme and evaluation of antineoplastic drugs effects

2 GLIOBLASTOMA CANCER STEM MULTIFORME CELLS (CSCs) (GBM) Tumore maligno più frequente, aggressivo e letale tra le neoplasie cerebrali Sopravvivenza: 1214 mesi dalla diagnosi Terapie attuali : resezione chirurgica, chemioterapia (Temozolomide) e radioterapia Prognosi infausta Florio T. et al.drug Discovery Today.212 Oct;17(192):1131

3 BACKGROUND CARATTERIZZAZIONE CITOLOGICA, CITOGENETICA E GENOMICA DI SEI LINEE DI CELLULE STAMINALI TUMORALI DA GLIOBLASTOMA MULTIFORME (GSCs): GBM2 e GBM7 (Griffero F. et al., 29. J Biol Chem 284, ) G166, G144, G179 e Glins2 (Pollard et al., 29.Cell Stem Cell 4, ) STUDIO DEGLI EFFETTI ANTINEOPLASTICI DI DUE FARMACI: e

4 CARATTERIZZAZIONE CITOMORFOLOGICA MORFOLOGIA CELLULARE G179 GBM2 GBM7 G144 G166 GLINS2 MORFOLOGIA TIPICA DELLE STAMINALI NEURALI AGGREGATE IN NEUROSFERE IN SOSPENSIONE O ADESIONE

5 CARATTERIZZAZIONE CITOMORFOLOGICA NUCLEI e METAFASI

6 CARATTERIZZAZIONE CITOGENOMICA Figura 1. Frequenza dei cromosomi in acquisizione (Gain) e in perdita (Loss) identificati mediante bandeggio QFQ in 6 linee di CSCs da GBM. Figura 2. Aberrazioni cariotipiche strutturali identificate nelle linee GBM2, G166 e GliNS2. IDENTIFICAZIONE DI ALTERAZIONI NUMERICHE E STRUTTURALI

7 CARATTERIZZAZIONE CITOGENOMICA CARIOTIPO MOLECOLARE TRAMITE arraycgh ANALISI DI SEGREGAZIONE DEI MICROSATELLITI DEL CROMOSOMA Del PTEN 1p Del CDKN2A CDKN2B DMBT1 GAIN LOSS

8 BACKGROUND ACIDO VALPROICO () EPIGENETIC THERAPY inibitore HDACs classe I e IIa CARATTERIZZAZIONE CITOLOGICA, CITOGENETICA E GENOMICA DI SEI LINEE DI GSCs PACLITAXEL () inibitore della depolimerizzazione dei microtubuli STUDIO DEGLI EFFETTI ANTINEOPLASTICI DI DUE FARMACI: e

9 12 1) EFFETTO DI E SULLA VITALITÀ CELLULARE 12 1 G GBM ,5mM 1mM 3mM 6mM 1mM 2mM GliNS2 G144 GBM7 G nM 1nM 1μM 1μM 2μM 5μM ,5mM 1mM 3mM 6mM 1mM 2mM 1nM 1nM 1μM 1μM 2μM 5μM h ,5mM 1mM 3mM 6mM 1mM 2mM 1nM 1nM 1μM 1μM 2μM 5μM

10 Polymorphic nuclei (%) Polymorphic nuclei (%) Polymorphic nuclei (%) GliNS2 GBM7 G144 G166 G179 2) VALUTAZIONE DELLA PERCENTUALE DI NUCLEI POLIMORFICI Untreated 2mM 1 1microM Untreated 2mM 1microM 2 1 s s s s s s s s s s s s GBM2 GBM7 GliNS2 GBM7 GBM2 GLINS2 G144 G166 G179 s s s s s s s s s s s

11 3) VALUTAZIONE DELLA PLOIDIA 15 cromosomi 34 cromosomi 4757 cromosomi 78 cromosomi 9313 cromosomi cromosomi 3546 cromosomi 5869cromosomi 8192 cromosomi cromosomi

12 WORK IN PROGRESS. CARATTERIZZAZIONE DEL METILOMA TUMORALE LINEA GBM2 Chr 1 1 CTRL 1 1 2mM 1 1 Sonda metilata Chr 3 CTRL 1 1 Sonda non metilata 2mM Chr 12 1 CTRL 1 1 2mM 1

13 CONCLUSIONI Significatività p<,5 Significatività p<,1 Significatività p<,1 Non statisticamente significativo MTT assay PLOIDIA NUCLEI POLIMORFICI SCORE di SENSIBILITÀ GBM GBM7 1 G144 1 G G179 1 GLINS Validità del modello in vitro presentato Efficacia dell utilizzo di e nell ambito di una terapia CSCstargeted del GBM

14 Grazie a tutti della cortese attenzione!

15

16 MeDIP on Chip (MetilDNA ImmunoPrecipitation on Chip)

17 Chromosome Chromosome Chromosomal abnormalities Cell line GBM 2 GBM 7 G166 GliNS2 G179 G179* G144 <ploidy> 62~83<3n>,XXY 67~96<4n>,XXY 48~59<2n>,XXXXY 41~47<2n>,XY 64~79<3n>,X 11~117<5n>,XX 63~95<4n>,XXYY X Y / der(1)t(1;9)t(p36.3;q13) del(1)(p34),, del(1)(p36.1),del(1)(p34) add(1)(p36.3) del(2)(q?),del(3)(q13) 4, der(4)t(3;4)(p21;p16) 5 del(5)(q12;q13), 6 del(6)(q1416) der(6)t(6;7)(q27;?) 7 del(7)(q31) del(4)(p12) der(1)t(1;21)(q11;?) rea(del(1)(p11)) rea(del(2)(p11)) rea(3)(p?) inv(del(1)(p34.3)) der(2)t(2;2) del(x)(p11.22) rea(y) del(1)(p33) del(x)(p11.2), rea(y) del(1)(p33) der(1)t(1;?)(p13;?) del(1)(q21) del(2)(p11.2) del(3)(p22?p25?), der(5)t(5;11)(p11;?) del(6)(q16.1) der(5)t(2;5) (?;q35.3) / der(6)t(3;6)(?;q27) der(6)t(del(6)(q25.1);21) (p21?;p13), rea(5), del(7)(q11.21) 8, 9 1 del(9)(q11) dic(9;del(9)(p11)) (q34;q34), / / del(1)(q21.3), rea(9)(p?), Cell line GBM 2 GBM 7 G166 GliNS2 G179 G179* G144 11, add(del(11)(p11))(p11) 12, del(12)(p12) , rea(16) 17 del(17)(p12) add(del(17)(p12))(q25) 18, add(18)(q23) 19 2, der(2)t(12;2) (q13;p11.2) rea(11) rea(del(11)(q13)) /, del(12)(p12) der(13;14)(q1;q1) der(12)t(12;?), der(12)t(12;?), / rea(11) del(11)(p15), del(12)(q?) der(12)t(12;?)(q11;?),,,,,,,,, i(17)(q1), der(18)t(7;18)(?;p11), der(19)t(19;22)(q13;?) rea(16), /, del(18)(p11.2) / / / / / der(21)t(6;21),,

18 DETERMINAZIONE DELL INDICE MITOTICO

19 CONCLUSIONI Significatività p<,5 Significatività p<,1 Significatività p<,1 Non statisticamente significativo INDICE MITOTICO PLOIDIA NUCLEI POLIMORFICI MTT assay SCORE di SENSIBILITÀ GBM GBM G G G GLINS

20 CONCLUSIONI Significatività p<,5 Significatività p<,1 Significatività p<,1 Non statisticamente significativo MTT assay PLOIDIA NUCLEI POLIMORFICI SCORE di SENSIBILITÀ GBM GBM7 1 G144 1 G G179 1 GLINS Validità del modello in vitro presentato Efficacia dell utilizzo di e nell ambito di una terapia CSCstargeted del GBM