DIAGNOSI di LABORATORIO dell' INFEZIONE da HIV :

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Daniele Corsi
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1 Pievesestina di Cesena - 29 febbraio 2012 DIAGNOSI di LABORATORIO dell' INFEZIONE da HIV : il percorso analitico in Area Vasta Romagna Simona Semprini. U.O. Microbiologia - Laboratorio Unico AVR

2 Human Immunodeficiency Virus Famiglia Genere Retroviridae Lentivirus Tipi HIV-1, HIV-2 Europa, America, Africa Cellule Bersaglio Africa Occidentale Linfociti T CD4 +, macrofagi-monociti, cellule della microglia, cellule dendritiche

3 Struttura del Virus p24

4 Genoma Virale Molecola a polarità positiva di circa 9.7 kb Proteine del Capside e Matrice Glicoproteine dell envelope Proteasi, Integrasi, Transcriptasi inversa

5 Recettori Cellulari

6 Ciclo replicativo

7 Ciclo Replicativo Inibitori della fusione Inibitori dell integrasi Provirus HIV RNA DNA CD4+ T-Cell Inibitori della trascriptasi inversa Inibitori della proteasi

8 STORIA NATURALE dell INFEZIONE da HIV Possibile sindrome acuta Ampia diffusione del virus Insediamento negli organi linfoidi Infezione primaria Latenza clinica Sieroconversione Cellule attivate : replicazione virale Cellule bersaglio non attivate: virus latente Fase sintomatica

9 Diagnosi di Infezione da HIV Ricerca RNA virale Ricerca DNA virale Ricerca antigeni Ricerca anticorpi specifici

10 Diagnosi di infezione da HIV Conta di cellule CD4+ (cellule/mm 3 ) ( ) Infezione Primaria Possibile sindrome acuta da HIV-1 Ampia diffusione del virus Insediamento negli organi linfoidi settimane Latenza Clinica anni Death Morte Infezioni Opportunistiche Sintomi Constituzionali Carica virale plasmatica (HIV-1 RNA, c/ml) ( )

11 Diagnosi di Infezione da HIV Ricerca RNA virale Ricerca DNA virale Ricerca antigeni Ricerca anticorpi specifici

12 Profilo sierologico dei markers di infezione

13 Profilo sierologico dei markers di infezione HIV-RNA anti-hiv Esposizione HIVAg (p24) Giorni pre/post infettività dall esposizione

14 Evoluzione test sierologici di screening

16 Tempi di rilevazione dell infezione German Red Cross. Valutazione su 31 milioni di donazioni di sangue Hourfar etal.transfusion, 2008

17 Diagnosi di Infezione Ricerca RNA virale Ricerca DNA virale Ricerca antigeni + Sierologica Ricerca anticorpi specifici

18 Diagnosi di Infezione Test di Screening IV generazione Test di conferma NO Negativo? SI Refertazione Anticorpi Ag p24 VPP : 100%

19 WESTERN BLOT e IMMUNOBLOT Criteri di Positività o WHO almeno 2 bande env o CDC almeno 2 bande tra gp160/120, gp41, p24 o FDA almeno 1 banda env con p31 e p24

20 Percorso Diagnostico in AVR ADVIA CENTAUR HIV Ag/Ab Combo Negativo? SI Refertazione NO Noto? SI Refertazione NO VIDAS HIV DUO Vironostika HIV Ag/Ab SI Negativo? NO Negativo? NO CHIRON RIBA HIV-1/ HIV-2 Positivo? NO VIDAS HIV P24 SI SI Refertazione Refertazione SI Positivo? NO

21 TEST di SCREENING ADVIA Centaur HIV Ag/Ab Combo Metodo : CLIA automatizzato inserito in catena Fase solida : Ag ricombinanti proteine core ed envelope HIV-1 e HIV-2, peptide sintetico per HIV-1 gruppo 0, 2 Ab monoclonali per p24 Sensibilità HIV-1 : 100 % ( 99, ) Sensibilità HIV-2 : 100% ( ) Sensibilità p24 : 1.15 IU/ml

22 TEST di SCREENING VIDAS HIV DUO Metodo : ELFA semi-automatizzato Fase solida : gp160 per HIV-1, peptidi sintetici per HIV-1 gruppo 0 e HIV-2, Ab monoclonali per p24 Sensibilità HIV-1/HIV-2 : 100% ( 99, ) Sensibilità p24 : 4.52 pg/ml

23 HIV Centaur : Positivo se Indice > 1.00 HIV Vidas : Positivo se T.V. > 0.25 Pool 1 Pool 2 Identif Centaur Vidas Identif Centaur Vidas 41 6, ,866 8, ,678 6, ,900 7, ,016 5, ,729 6, ,660 5, ,523 6, ,590 4, ,779 5, ,403 3, ,572 4, ,898 2, ,428 3, ,231 1, ,878 2, , ,570 1, ,734 0, ,836 0, ,322 0, ,350 0, ,218 0, ,153 0, ,064 0,26 73 < 0,050 0,11

24 TEST di SCREENING Vironostika HIV Ag/Ab Validato per SCREENING UNITÀ TRASFUSIONALI Metodo : ELISA automatizzato Fase solida : gp160 per HIV-1, peptidi sintetici per HIV-1 gruppo 0 e HIV-2, anti-hiv 1 p24 Sensibilità anti-hiv-1/hiv-2 : 100% Sensibilità p24 : 100%

25 TEST di CONFERMA 1. RIBA HIV-1/HIV 1/HIV-22 SIA Test immunoenzimatico semi-automatico Evidenzia la presenza di anticorpi specifici rivolti verso singoli antigeni virali

26 Criteri per l interpretazione l dei Risultati

27 Positivo per HIV-1 Negativo Positivo per HIV-1 1 ( sieroconversione recente ) Controllo positivo ( HIV-1 e HIV-2 )

28 TEST di CONFERMA 2. Ricerca Ag p 24 ( VIDAS HIV P24 II ) Metodo : ELFA semi-automatizzato Fase solida : Ab monoclonali per p24 Sensibilità p24 : 3.00 pg/ml Test di NEUTRALIZZAZIONE

29 ADVIA Centaur HIV Ag/Ab Combo Negativo? SI Refertazione Refertazione NO 1 Screening Noto? SI Refertazione NO 2 Screen

30 Centaur NON negativo Pz NON noto VIDAS HIV DUO 2 Screening Vironostika HIV Ag/Ab SI Negativo? 3 Screening NO Negativo? SI NO Test di Conferma Refertazione

31 Screening NON negativo Pz NON noto RIBA HIV-1/HIV-2 Positivo? NO VIDAS Ag p24 SI Refertazione

32 Screening NON negativo RIBA Negativo Si consiglia prelievo di controllo VIDAS Ag p24 Positivo? SI NO Refertazione Refertazione

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