INTRAOPERATIVE ANALYSIS OF SENTINEL NODE IN BREAST CANCER BY OSNA (ONE STEP NUCLEIC ACID AMPLIFICATION).

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1 INTRAOPERATIVE ANALYSIS OF SENTINEL NODE IN BREAST CANCER BY OSNA (ONE STEP NUCLEIC ACID AMPLIFICATION). R. Scamarcio*, C. Caporusso*, G. Ingravallo*, G. Arborea*, T. Montrone*, G. Opinto*, A. Cirilli, G.Rubini^, A.M.Guerrieri, C. Giardina* *Anatomia Patologica Universitaria - Policlinico di Bari ^U.O. Medicina Nucleare - Policlinico di Bari Chirurgia Generale Balestrazzi - Policlinico di Bari SARIS - Policlinico di Bari

2 Il test OSNA (Sysmex) è una indagine molecolare che permette l esame intraoperatorio di tutto il linfonodo sentinella (LS) nelle pazienti con carcinoma della mammella. La diagnosi, introperatoria, si basa sulla valutazione quantitativa delle copie di mrna della citocheratina-19 (CK19) usualmente assente nei linfonodi normali E una analisi rapida (circa 30 ), con sensibilità del 95.3% e specificità del 94% altamente standardizzata rispetto alla procedura classica istologica, che consente di distinguere in base a stretti criteri quantitativi le micrometastasi dalle macrometastasi e di concludere la fase chirurgica in un unica seduta.

3 Refertazione dei LNS esaminati con OSNA Negativi per metastasi: numero di copie di mrna di CK 19 < a 250; Positivi per micrometastasi: numero di copie compreso tra 250 e 5000 Positivi per metastasi:numero di copie >di 5000

4 SCOPO DELLO STUDIO Da Settembre 2012 presso l Anatomia Patologica del Policlinico di Bari i LS delle pazienti con carcinoma mammario sono stati analizzati in toto mediante test OSNA. In precedenza dal 1999 al 2012 i LS erano stati esaminati applicando il protocollo IEO ai LS, effettuando sezioni subseriate dopo inclusione in paraffina Obiettivo del nostro studio è di: -correlare i risultati del test OSNA con lo stato dei linfonodi ascellari e con le caratteristiche del tumore, in particolare con il diametro (T) - confrontare il test OSNA con il metodo istologico usato in precedenza

5 CASISTICA (settembre 2012-giugno 2013) METODICA OSNA Pazienti:152 LNS: 225 Media:1.4 LNS/paziente ESAMI PREOPERATORI Core Biopsy:107. FNAC: 29 ESAME INTRAOPERATORIO: 16 ISTOTIPO Duttale infiltrante 118 Lobulare infiltrante 15 Duttale + Lobulare inf. 3 Duttale in situ 15 ADH 3 In 2 pz. lesione bilaterale ETA MEDIA: 56 anni (29-78)

6 CASISTICA (settembre 2012-giugno 2013) Tutte le pazienti erano clinicamente N0 In tutti i casi i LS sono stati identificati mediante iniezione di radiocolloide La ricerca IIC della CK19 fatta su agobiopsia o sul tumore dopo intervento, è sempre risultata positiva. In ogni caso è stata effettuata una citologia da apposizione del linfonodo sentinella esaminato con metodica OSNA, non a scopo diagnostico ma medico legale.

7 Risultati LNS positivi per metastasi 59/225 (26%) Riscontrati in 52/152 pz (34%) Micrometastasi: 29/225 LNS(12.8%) 27 PZ(17.7%) Macrometastasi: 28/225 LNS(12.4%) 25 pz (16.4%);

8 Correlazione tra T e metastasi nel LNS Micro M. Macro M. LS neg. TOT. Tis 1(3.7%) - 14 (9%) 15 T1a-b 10(6.5%) 2 (1.3%) 47(31%) 59 T1c 11(7.2%) 17(11%) 29(19%) 57 T2 5 (3%) 6 (4%) 10(6.5%) 21 TOT pz. 27(18%) 25(16%) 100(66%) 152

9 RISULTATI La percentuale di pazienti con metastasi nel gruppo OSNA è stato il 34% contro il 21.5% delle paziente studiate con metodo tradizionale. Le pazienti con macrometastasi, sottoposte a dissezione ascellare, sono state il 16.4% nella casistica OSNA contro il 15 % nella casistica tradizionale. Le pazienti con micrometastasi sono state il 18% nella casistica OSNA contro il 6.5% nella casistica tradizionale.

10 RISULTATI LNS vs DISSEZIONE ASCELLARE LS MACROMETASTASI: Dissezione ascellare in 25/25 pazienti Metastasi in NSL (Non Sentinel Lymphnodes): 11/25 (44%) LS MICROMETASTASI: Dissezione in 22/27 pazienti Delle 22 pazienti in 4 pz. solo asportazione 1 o 2 linfonodi Metastasi in NSL in: 4/27 (14.8%)

11 Confronto tra stato dei linfonodi ascellari nelle due metodiche DISSEZIONE ASCELLARE Pazienti con micrometastasi nel LNS: Casistica OSNA: metastasi nel 14. 8% dei NSL Casistica tradizionale: metastasi nel 23% dei NSL Pazienti con macrometastasi nel LNS: Casistica OSNA: metastasi nel 44% dei NSL Casistica tradizionale: metastasi nel 59% dei NSL

12 Discussione Questo studio costituisce una conferma alla validità della metodica biomolecolare OSNA per la diagnosi del LS nel carcinoma mammario Ci è sembrato più corretto confrontare i risultati ottenuti applicando le due metodiche su due casistiche simili piuttosto che applicarle entrambe allo stesso linfonodo. Noi abbiamo confrontato un gruppo di casi (260) studiati nel periodo precedente il 2012 con i casi sottoposti alla metodica OSNA (152). Le due casistiche erano simili per caratteristiche delle pazienti e dei tumori.

13 Discussione Lo studio del LS con il metodo Osna ha confermato la correlazione diretta tra T e incidenza delle micro e delle macrometastasi. -la percentuale di metastatizzazione del LNS nel gruppo OSNA (34%) è risultata superiore a quella riscontrata nella casistica tradizionale (21.5%). Mentre erano molto vicine le percentuali di macrometastasi riscontrate con le due metodiche, le micrometastasi con Osna erano circa 3 volte superiori a quelle riscontrate con il metodo tradizionale. La metodica OSNA quindi dimostra una sensibilità maggiore nella identificazione delle metastasi linfonodali rispetto alla metodica istologica, soprattutto nel riconoscimento della micrometastasi come già segnalato da altri AA (Castellano I. 2011)

14 Discussione La valutazione degli altri linfonodi ascellari ha evidenziato una maggiore incidenza di metastatizzazione nei casi studiati con la metodica tradizionale E probabile che con la metodica tradizionale molte metastasi siano state sottostimate e considerate come micrometastasi spesso poi associate a coinvolgimento ascellare D altra parte la metodica OSNA mostra una maggiore sensibilità nel rilevare anche piccoli depositi di cellule epiteliali nel LNS facendo innalzare la percentuale di micrometastasi. A ciò sicuramente si aggiunge, almeno per il gruppo delle micrometastasi il maggior numero di dissezioni ascellari effettuato in precedenza rispetto alla tendenza attuale che tende a risparmiare i linfonodi ascellari

15 Discussione Nel caso del CDIS con micrometastasi (420 copie) questa potrebbe essere una pseudometastasi, causata da disseminazione attraverso i linfatici di cellule epiteliali dopo la core-biopsy. Questo meccanismo è ovviamente possibile anche nei casi di carcinomi invasivi. In tutti questi casi il chirurgo deve considerare il valore della micrometastasi unitamente alle caratteristiche del tumore e al dato di una precedente biopsia per decidere se asportare o meno altri linfonodi ed evitare un overtreatment. La metodica OSNA dimostra una indiscutibile affidabilità da un punto di vista diagnostico oltre ad offrire un indubbio vantaggio per la paziente (unico tempo operatorio) ed anche un grosso risparmio di tempo per il laboratorio e per il patologo.

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