HBCon. ISTRUZIONI PER L USO VITROS Immunodiagnostic Products Kit di conferma dell HBsAg

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1 ISTRUZIONI PER L USO VITROS Immunodiagnostic Products Kit di conferma dell HBsAg HBCon Impiego Uso in vitro per la conferma della presenza dell antigene di superficie dell epatite B (HBsAg) in siero e plasma umano (EDTA, eparina o citrato) risultato ripetutamente reattivo al dosaggio HBsAg per prodotti immunodiagnostici VITROS. Compendio e spiegazione del dosaggio La presenza di HBsAg nei campioni riscontrati ripetutamente reattivi al dosaggio HBsAg VITROS può essere confermata mediante reazione di neutralizzazione con anticorpo umano HBsAg (anti-hbs). I campioni neutralizzabili vengono considerati positivi all HBsAg. Principi della procedura Il dosaggio di conferma HBsAg VITROS si fonda sul principio della neutralizzazione di uno specifico anticorpo ai fini della conferma della presenza dell HBsAg. Il campione viene analizzato due volte: un aliquota viene incubata con un reagente neutralizzante contenente un titolo elevato di anti-hbs (anticorpo di conferma); mentre la seconda aliquota viene incubata con un reagente di controllo non-neutralizzante (diluente per campioni). L anticorpo di conferma si lega all HBsAg nel campione inibendone la reazione nel dosaggio HBsAg VITROS, con risultati ridotti in confronto a quelli del campione di controllo nonneutralizzato. Per la descrizione dei principi del dosaggio vedere il foglietto illustrativo contenuto nella confezione dei reagenti HBsAg VITROS. Avvertenze e precauzioni Solo per uso diagnostico in vitro AVVERTENZA: Materiale potenzialmente infettivo Gli emoderivati utilizzati nella confezione sono stati ottenuti da donatori umani sottoposti a test individuali usando metodi approvati (immunodosaggi enzimatici, EIA) e risultati negativi per quanto concerne la presenza dell HBsAg, di anticorpi del virus dell immunodeficienza umana (HIV 1+2) e del virus dell epatite C (HCV). Trattare come materiali in grado di trasmettere infezioni. Si raccomanda di usare la dovuta cautela nella manipolazione di materiali di origine umana. Tutti i campioni devono essere considerati come potenziale fonte di infezione. Nessun metodo sperimentale è in grado di garantire con assoluta certezza l assenza del virus dell epatite B, dell HCV, dell HIV 1+2 e di altri agenti infettivi. Campioni e componenti del dosaggio devono essere manipolati, conservati ed eliminati in forma solida o liquida in conformità alle procedure dettate dalle relative direttive e normative nazionali in materia di sicurezza biologica (per es. Direttiva M29 del NCCLS 1 ). AVVERTENZA: Contiene Kathon Il reagente anticorpo contiene del Kathon. R43: Può provocare sensibilizzazione per contatto con la pelle. R52/53: Nocivo per gli organismi acquatici, può provocare a lungo termine effetti negativi per l ambiente acquatico. S24: Evitare il contatto con la pelle. S37: Usare guanti adatti. Materiali forniti 1 confezione contenente: 2 fiale di reagente anticorpo di conferma liofilizzato (siero umano positivo anti-hbs), leganti cad. 1 µg HBsAg, con agente antimicrobico. Volume di ricostituzione 1,5 ml. 2 flaconi di diluente per campioni (siero umano, non-reattivo all HBsAg, negativo all anti-hbs), con agente antimicrobico (27 ml). scheda del protocollo per il test di conferma dell HBsAg. Versione 1.0 Pubb. n. GEM4200_IT 1

2 HBCon ISTRUZIONI PER L USO Materiali richiesti, ma non forniti Materiali richiesti, ma non forniti Sistema VITROS immunodiagnostica, oltre ai seguenti prodotti immunodiagnostici VITROS: confezione di reagenti HBsAg, calibratori per HBsAg (comprese scheda dei protocolli per il kit HBsAg e scheda di calibrazione lotti), controlli HBsAg, Reagente di segnale, Reagente di lavaggio universale, contenitore per la conservazione delle confezioni di reattivi (opzionale) con essiccante, pipette ed acqua distillata. Preparazione e conservazione dei reagenti La confezione di reagente anticorpo di conferma viene fornita liofilizzata. Conservare in condizioni integre a 2-8 C. Non usare oltre la data di scadenza. Ricostituire con 1,5 ml di acqua distillata. Dopo la ricostituzione, conservare per un massimo di 8 settimane a 2-8 C o di 12 settimane a -20 C (è ammesso un solo ciclo di congelamento-scongelamento). Il diluente per campioni viene fornito pronto per l uso. Conservare i reagenti in condizioni integre a 2-8 C. Non usare oltre la data di scadenza. Dopo l apertura conservare per un massimo di 12 settimane a 2-8 C o di 12 settimane a -20 C (è ammesso un solo ciclo di congelamento-scongelamento). Preparazione del paziente Non è necessaria alcuna preparazione specifica del paziente. Raccolta, preparazione e conservazione dei campioni Siero o plasma (EDTA, eparina o citrato) possono essere utilizzati. I risultati di campioni non neutralizzati provenienti da campioni citrati saranno proporzionalmente inferiori a motivo della diluizione ad opera del liquido anticoagulante. Per la raccolta dei campioni ematici attenersi a procedure standard. I campioni devono essere accuratamente separati da tutto il materiale cellulare. I campioni di siero e plasma possono essere conservati per un massimo di 5 giorni a 2-8 C o per 4 settimane a -20 C. Evitare congelamento e scongelamento ripetuti. Si è riscontrato che alcuni dispositivi di prelievo del campione biologico hanno determinato alterazioni all integrità di determinati analiti provocando interferenze nella determinazione analitica 2. Considerata la varietà di dispositivi per la raccolta dei campioni disponibili in commercio, la Ortho-Clinical Diagnostics non è in grado di definire con assoluta certezza le prestazioni dei propri prodotti con tutti i diversi dispositivi. Si raccomanda pertanto che i singoli utilizzatori verifichino che il sistema di prelievo da loro adottato venga usato nel rispetto delle istruzioni della Casa produttrice e sia compatibile con questo dosaggio VITROS. Note sul controllo di qualità e sulla procedura Mescolare perfettamente l anticorpo di conferma ricostituito per capovolgimento e portarlo a C prima dell uso. Mescolare perfettamente il diluente per campioni per capovolgimento e portarlo a C prima dell uso. Manipolare i campioni in contenitori chiusi al fine di evitare contaminazione ed evaporazione. Per evitare l evaporazione, limitare il numero di campioni presenti sul sistema VITROS. Per maggiori informazioni vedere la Guida dell operatore del sistema VITROS. Dopo l uso riportare tempestivamente i reagenti a 2-8 C. I campioni con risultati >500 nel dosaggio HBsAg VITROS devono essere diluiti in rapporto 1 a 151 con il diluente per campioni. Per diluire il campione, aggiungere 1,5 ml di diluente per campioni a 10 µl di campione. I campioni con risultati 500 nel dosaggio HBsAg VITROS devono essere analizzati senza diluizione. La buona prassi di laboratorio prevede l esecuzione di controlli ai fini della verifica delle prestazioni del dosaggio eseguito. Si raccomanda di eseguire i controlli ogni volta che si usa il Kit di conferma VITROS HBsAg e dopo aver svolto specifiche procedure di servizio (vedere la Guida dell operatore del sistema VITROS). Se le procedure di controllo qualità interne richiedono un uso più frequente dei controlli, è opportuno attenersi alle procedure previste. Per maggiori informazioni vedere la Guida dell operatore del sistema VITROS. Il controllo positivo HBsAg VITROS (C1) (cfr. foglietto illustrativo contenuto nella confezione dei controlli HBsAg VITROS) deve essere analizzato con il kit di conferma come campione neutralizzato e non-neutralizzata mediante la procedura sottodescritta. Il nome predefinito del dosaggio che appare sul referto del paziente è HBsAgConfirm. L abbreviazione predefinita che appare sui menu di selezione dei dosaggi e sui referti di laboratorio è HBCon. Se necessario è possibile riconfigurare questi valori predefiniti dalla videata di configurazione degli analiti nelle Opzioni e Configurazioni. 2 Pubb. n. GEM4200_IT Versione 1.0

3 ISTRUZIONI PER L USO Procedura HBCon Procedura Eseguire la scansione della scheda del protocollo del Kit VITROS di conferma dell HBsAg per caricare il nuovo protocollo di analisi sul sistema. A questo punto verra visualizzato il pulsante relativo sulla videata di programmazione dei campioni. Il protocollo per il kit di conferma dell HBsAg e subordinato al protocollo per il dosaggio VITROS dell HBsAg e utilizza la calibrazione lotto specifica dell HBsAg presente nel Sistema. Il dosaggio per HBsAg VITROS dev essere calibrato anche dopo l esecuzione di alcune procedure di controllo oppure se i risultati del controllo qualità differiscono molto dal range accettabile. NOTA: Non utilizzare prodotti danneggiati o non sigillati perfettamente. Il dosaggio di neutralizzazione viene eseguito manualmente, fuori dal sistema. E possibile variare il volume del campione neutralizzato, prevedendo un volume minimo di 200 µl. Il rapporto campioneanticorpo di conferma (o diluente per campioni) deve rimanere costante a 4:1. 1. Prelevare due aliquote da 200 µl di controllo positivo HBsAg (C1), o di campione (o campione diluito) che risulti ripetutamente reattivo all HBsAg e che necessiti conferma, e aggiungere un aliquota ad ognuno dei due contenitori del campione (p. es. cuvette per campioni VITROS). 2. Aggiungere 50 µl (cioè 0,25 x volume di campione) di anticorpo di conferma ad un aliquota. Aggiungere 50 µl (cioè 0,25 x volume di campione) di diluente per campioni all altra aliquota. 3. Il dosaggio di conferma HBsAg VITROS richiede come minimo 400 µl di campione o di controllo per ogni determinazione (200 µl cad. per il test neutralizzato e non neutralizzato). Tale valore non tiene contro del volume di riempimento minimo del contenitore del campione. 4. Incubare per almeno 15 minuti a C (fino al massimo di 8 ore, comprese 2 ore sul sistema VITROS). Se necessario, trasferire in una cuvetta o contenitore per campioni compatibile con il sistema VITROS. Per informazioni sulla preparazione e il trattamento dei campioni, cfr. la Guida dell operatore, capitolo 6, Preparazione dei campioni. 5. Analizzare i campioni selezionando la targhetta HBCon nella videata della programmazione campioni. Per informazioni sulla calibrazione del dosaggio HBsAg VITROS vedere il foglietto illustrativo contenuto nella confezione dei reagenti HBsAg VITROS. 6. Ai fini della programmazione del campione, assegnare un identificativo univoco ai campioni neutralizzati e non neutralizzati per la conferma in modo da garantire una chiara identificazione sui referti di laboratorio rispetto ai risultati positivi ottenuti precedentemente per HBsAg. Risultati Verranno generati risultati per i campioni non-neutralizzati e neutralizzati. I risultati vengono calcolati automaticamente dal Sistema VITROS. Per il calcolo della percentuale di neutralizzazione, procedere nel modo seguente: % di neutralizzazione = (risultato A - risultato B) x 100% risultato A Dove: A = risultato non -neutralizzato B = risultato neutralizzato Controllo di qualità Cfr. il foglietto illustrativo contenuto nella confezione di reagenti HBsAg VITROS per i particolari sulla calibrazione e sul controllo di qualità del dosaggio HBsAg VITROS. La buona prassi di laboratorio richiede l esecuzione di controlli ai fini della verifica delle prestazioni del dosaggio. Il controllo positivo all HBsAg VITROS (C1) (cfr. foglietto illustrativo contenuto nella confezione del controllo HBsAg VITROS) deve essere analizzato con il kit di conferma come campione neutralizzato e non-neutralizzato attenendosi alla procedura suindicata. Il controllo deve indicare una neutralizzazione 80%. Se i risultati di controllo differiscono di molto dal range accettabile, indagarne la causa prima di decidere se validare i risultati del paziente. Limiti della procedura I risultati ottenuti con questo o altri kit diagnostici devono essere utilizzati ed interpretati esclusivamente nel contesto del quadro clinico generale. Un risultato negativo non esclude la possibilità di esposizione al virus dell epatite B. Nei primi e negli ultimi stadi dell infezione i livelli di HBsAg possono non essere rilevati. Anticorpi eterofili presenti nei campioni di siero o plasma possono dar luogo ad interferenze nei saggi immunologici 3. Questi anticorpi possono essere presenti nei campioni di sangue provenienti da individui a contatto con animali o che sono stati curati con prodotti derivati da siero animale. In caso di risultati non congrui con le osservazioni cliniche è opportuno effettuare ulteriori indagini. La presenza nei campioni di trioleina (<33,9 mmol/l), emoglobina (<5 g/l) o bilirubina (<0,342 mmol/l) non interferisce con l interpretazione clinica di questi risultati. Non usare campioni torbidi. Versione 1.0 Pubb. n. GEM4200_IT 3

4 HBCon ISTRUZIONI PER L USO Interpretazione dei risultati Interpretazione dei risultati NOTA: Nel dosaggio di conferma HBsAg, i risultati neutralizzati e non-neutralizzati vengono utilizzati per il calcolo della percentuale di neutralizzazione. Un campione viene considerato confermato se il risultato del campione non-neutralizzato è 0,80 s/c e la percentuale di neutralizzazione è 50% (Cf. Tabella 1). Un campione che risulti ripetutamente reattivo al dosaggio HBsAg VITROS e che sia confermato con il kit di conferma HBsAg VITROS, è considerato positivo all HBsAg. Tabella 1: Interpretazione dei risultati iniziali, ottenuti prima di qualunque nuova analisi o diluizione Risultati non neutralizzati (s/c) Tutti i campioni Percentuale di neutralizzazione Risultato test di conferma Classificazione o azione da intraprendere 0,80 50% Confermato (positivo all HBsAg) 0,80 <50% Diluire ulteriormente e ri-analizzare <0,80 Qualsiasi valore Ri-analizzare Se il risultato del campione non-neutralizzato è <0,80 s/c, il campione deve essere ri-analizzato con il kit di conferma HBsAg VITROS. Se il nuovo risultato del campione non neutralizzato è <0,80 s/c e: se la percentuale di neutralizzazione è <50%, il campione non è confermato ed è negativo all HBsAg (Cf. Tabella 2). se la percentuale di neutralizzazione è 50%, lo stato HBsAg del campione è indeterminato. Si raccomanda di eseguire i test di follow-up (Cf. Tabella 2). Nel caso in cui il risultato del campione non-neutralizzato sia 0,80 s/c e la percentuale di neutralizzazione sia <50%, i campioni devono essere diluiti nel diluente per campioni in rapporto 1 a 151 e rianalizzati. Per quanto riguarda i campioni che sono stati diluiti, a prescindere dalla percentuale di neutralizzazione, se il risultato del campione non neutralizzato è <0,8, ignorare la diluizione ed interpretare in base ai risultati non diluiti, con l ausilio della Tabella 2. Per quanto riguarda i campioni che sono stati diluiti, se il risultato del campione non neutralizzato è 0,80 s/c e la percentuale di neutralizzazione è 50%, il campione è confermato ed è positivo all HBsAg (Cf. Tabella 2). Nel caso in cui la percentuale di neutralizzazione dei campioni diluiti sia <50%, i risultati devono essere interpretati nel modo seguente: Se il risultato del campione non neutralizzato è >100 s/c, anche quando sia stata effettuata la diluizione 1 a 151, è probabile che il campione contenga elevati livelli di HBsAg e deve quindi essere ulteriormente diluito con diluente in rapporto 1 a 1500 o superiore, quindi ri-analizzato. Interpretare i risultati delle ulteriori diluizioni con l ausilio della Tabella 2. Se il risultato del campione non neutralizzato è 0,8-100 s/c, il campione è considerato negativo all HBsAg (Cf. Tabella 2). Il valore di cut-off per i risultati positivi con il kit di conferma HBsAg VITROS è definito a 0,80. I campioni vengono diluiti al 20% nel dosaggio di conferma mediante aggiunta dell anticorpo di conferma (neutralizzato) o del diluente per campioni (non neutralizzato). I campioni che nel dosaggio HBsAg VITROS presentano risultati iniziali pari al valore di cut-off di 1,00 (risultato classificato come reattivo ) devono fornire un risultato di 0,80 alla successiva analisi con il kit di conferma HBsAg VITROS. Tabella 2. Interpretazione dei risultati dopo la ri-analisi o la diluizione (Cf. testo) Risultati non neutralizzati (s/c) Campioni dopo diluizione e/o rianalisi Percentuale di neutralizzazione Risultato test di conferma Classificazione o azione da intraprendere <0,80 <50% Non confermato (negativo all HBsAg) <0,80 50% Indeterminato* 0,80 50% Confermato (positivo all HBsAg) >100 <50% Diluire ulteriormente e ri-analizzare da 0,8 to 100 <50% Non confermato (negativo all HBsAg) *Si raccomanda l'esecuzione di analisi di controllo. Le analisi di controllo non sono necessarie per campioni diluiti. 4 Pubb. n. GEM4200_IT Versione 1.0

5 ISTRUZIONI PER L USO Interpretazione dei risultati HBCon I risultati finali devono essere interpretati manualmente, utilizzando il seguente algoritmo. Algoritmo di analisi Scenario 1 s/c 0,8 neutralizzazione 50% neutralizzazione <50% Confermato positivo diluire, ripetere il test s/c <0,8 s/c 0,8* neutralizzazione 50% s/c <100 neutralizzazione <50% Non confermato Confermato positivo Non confermato Versione 1.0 Pubb. n. GEM4200_IT 5

6 HBCon ISTRUZIONI PER L USO Valori attesi Scenario 2 s/c <0,8 repetere il test s/c 0,8 s/c <0,8 Andare allo Scenario 1 neutralizzazione 50% neutralizzazione <50% Indeterminato** Non Confermato s/c = risultato di segnale/cut-off per il campione non neutralizzato * Se il risultato non neutralizzato dopo la diluizione è >100, diluire ulteriormente in rapporto 1 a 1500 o superiore e ri-analizzare fino ad ottenere un valore 100. ** Si raccomanda di eseguire i testi di follow-up. Valori attesi In una popolazione di campioni ripetutamente reattivi al dosaggio HBsAg VITROS e riconosciuti positivi all HBsAg, il 100% (342/342) è stato confermato positivo con il kit di conferma HBsAg VITROS. Bibliografia 1. NCCLS. Protection of Laboratory workers from Instrument Biohazards and Infectious Diseases Transmitted by Blood, Body Fluids and tissue; Approved guideline. NCCLS Document M29-A (ISBN ). NCCLS, Wayne, PA 19087; Calam RR. Specimen Processing Separator Gels: An Update, J Clin Immunoassay 11: (1988). 3. Levinson SS. The Nature of Heterophilic Antibodies and Their Role in Immunoassay Interference, J Clin Immunoassay 15: (1992). 6 Pubb. n. GEM4200_IT Versione 1.0

7 ISTRUZIONI PER L USO Glossario dei simboli HBCon Glossario dei simboli Versione 1.0 Pubb. n. GEM4200_IT 7

8 HBCon ISTRUZIONI PER L USO Revisioni Revisioni Data revisione Versione Modifiche tecniche apportate* Nuovo formato, tecnicamente equivalente a PIGEM4200/103.0 con le seguenti variazioni minori: Sezione Simboli usati sostituita dalla tabella Glossario dei simboli Aggiunta la casella per la firma della sezione Revisioni * Le barre delle modifiche indicano la posizione del testo aggiornato rispetto alla versione precedente del documento. Quando le presenti Istruzioni per l uso saranno sostituite da quelle aggiornate, apporre la propria firma e la data e conservare in base alle direttive locali o ai regolamenti del laboratorio. Firma Data Condizioni di fornitura: tutte le forniture sono soggette ai termini e alle condizioni di vendita della ditta Ortho-Clinical Diagnostics e dei suoi distributori. Copie di tali condizioni saranno disponibili su richiesta. CHIRON Corporation Emeryville, CA Ortho-Clinical Diagnostics Johnson & Johnson Holmers Farm Way High Wycombe Buckinghamshire HP12 4DP United Kingdom VITROS è un marchio di Ortho-Clinical Diagnostics, Inc. Ortho-Clinical Diagnostics, Inc., 2005, Pubb. n. GEM4200_IT Versione 1.0