ASPETTI DIAGNOSTICI DEL LINFOMA E DELLE LEUCEMIE NEL CANE

Transcript

1 . ASPETTI DIAGNOSTICI DEL LINFOMA E DELLE LEUCEMIE NEL CANE Roberta Guglielmino Dipartimento di Patologia Animale Università degli Studi di Torino Gennaio 2003

2 NEOPLASIE EMOLINFOPOIETICHE Hanno origine dai precursori delle cellule del sangue La malattia neoplastica comporta: alterata proliferazione cellulare: mancanza di controllo del processo di maturazione e differenziazione cellulare ridotta capacità delle cellule neoplastiche di lasciare il luogo di produzione Quindi: progressiva sostituzione della normale struttura del midollo osseo e dei linfonodi da parte delle cellule neoplastiche

3 NEOPLASIE EMOLINFOPOIETICHE FORME LEUCEMICHE Numero totale dei leucociti nel sangue molto elevato Numero di cellule anormali o primitive elevato tanto da permettere facilmente una diagnosi FORME ALEUCEMICHE Numero totale di leucociti nel sangue normale Cellule neoplastiche assenti o in numero così basso da non permettere una diagnosi FORME SUBLEUCEMICHE Numero totale di leucociti normale o leggermente aumentato Cellule neoplastiche in numero basso ma sufficiente a suggerire la diagnosi

4 NEOPLASIE EMOLINFOPOIETICHE NEOPLASIE LINFOPROLIFERATIVE Anormale proliferazione di tessuto linfoide NEOPLASIE MIELOPROLIFERATIVE Proliferazioni maligne di una o più linee cellulari midollari, raramente associate a formazione di tumori Possono colpire tutte le linee cellulari ematiche

5 NEOPLASIE LINFOPROLIFERATIVE Si suddividono in: LINFOMA si manifesta con formazione di tumori negli organi colpiti (la proliferazione coinvolge soprattutto il tessuto linfoide) LEUCEMIA la proliferazione ha inizio e predomina nel midollo osseo e nel sangue

6 NEOPLASIE LINFOPROLIFERATIVE CLASSIFICAZIONI ANATOMICA (in base alla localizzazione delle masse tumorali: multicentrica, alimentare, timica, extranodali) CITOLOGICA (in base al tipo cellulare) ISTOLOGICA (in base alla distribuzione delle cellule neoplastiche nel tessuto linfoide) IMMUNOLOGICA (in base al fenotipo immunologico: T, B o nont-nonb)

7 LINFOMA CANINO L ESAME DEL SANGUE PERIFERICO NORMALMENTE NON È DIAGNOSTICO

8 ESAME EMATOLOGICO Schalm Nostri dati n= 72 n=48 LEUCOCITOSI (>18.000/mmc) 40% 33% LEUCOPENIA (>6.000/mmc) 13% 10% LINFOCITOSI (>5.000/mmc) 20% 19% LINFOPENIA (<1.000/mmc) 25% 25% NEUTROFILIA (>11.500/mmc) 42% 35% LINFOBLASTI (da rari a molti) 54% 25% ANEMIA 30% 46%

9 Linfociti atipici

10 TEST BIOCHIMICI Possono riflettere le alterazioni del sito anatomico coinvolto (es. fegato aumento enzimi epatici e/o bilirubinemia) Ipercalcemia nel 15% dei casi con linfoma (40% dei quali con coinvolgimento mediastinico)

11 Linfonodo normale 90-95% linfociti 5-10% linfoblasti plasmacellule Altre cellule (neutrofili, macrofagi ecc.)

12 Linfonodo reattivo

13 Linfoma

14 LINFOMA CANINO CLASSIFICAZIONE CITOLOGICA Linfomi a piccole cellule (o a basso grado di malignità) linfocitico: piccoli linfociti, anche LGL linfo-plasmocitico: cellule simili a plasmacellule centrocitico: linfociti con nucleo clivato centroblastico - centrocitico Linfomi a grandi cellule (o ad alto grado di malignità) centroblastico: blasti con 2 o più nucleoli alla periferia immunoblastico: blasti con un nucleolo centrale

15 Linfoma a piccole cellule (linfocitico)

16 Linfoma a piccole cellule (centrocitico)

17 Linfoma a piccole cellule (linfoplasmocitoide)

18 Linfoma a grandi cellule (centroblastico)

19 Linfoma a grandi cellule (immunoblastico)

20 ???

21 LINFOMA CANINO CLASSIFICAZIONE CITOLOGICA Linfomi a piccole cellule (o a basso grado di malignità) più rari in maggioranza a cellule T a lenta crescita scarsa risposta alla terapia Linfomi a grandi cellule (o ad alto grado di malignità) più frequenti in maggioranza a cellule B a rapida crescita buona risposta alla terapia

22 Analisi immunofenotipica. Anticorpi monoclonali utilizzati per il cane. Linfociti T Linfociti B Panleucocitari CD5 CD3 TCR TCR CD4 CD8 Linfociti T Linfociti T maturi T-cell receptor T-cell receptor Linfociti T-helper T-suppressor/cit. CD21 SIgG SIgM Linfocit B LinfocitiB LinfocitiB CD49d CD45RA CD45 CD11b CD11c CD18 MHC II CD14 T, granulociti e monociti B e sottopopolazioni T Panleucocitario Granulociti e monociti Granulociti e monociti Panleucocitario Panleucocitario Granulociti e monociti

23 LEUCEMIE ACUTE Proliferazione incontrollata Arresto di maturazione Accumulo di cellule indifferenziate Decorso clinico rapido CRONICHE Proliferazione incontrollata Maturazione normale Accumulo di cellule ben differenziate Decorso clinico prolungato (mesi o anni)

24 LEUCEMIE LINFOIDI Hanno origine dal midollo osseo Classificazione: LEUCEMIA LINFOIDE ACUTA LEUCEMIA LINFOIDE CRONICA

25 LEUCEMIA LINFOIDE ACUTA Età: è prevalente in cani giovani, anche se è stata descritta in cani di tutte le età (da 1 a 12 anni) Sesso: rapporto maschi:femmine = 3:2

26 LEUCEMIA LINFOIDE ACUTA Sangue: Leucocitosi per aumento di cellule immature Midollo osseo: il numero di blasti è elevato e sostituisce il normale tessuto midollare (mieloftisi) anemia, granulocitopenia e piastrinopenia Linfonodi, milza e fegato: possono essere infiltrati dalle stesse cellule

27 LEUCEMIA LINFOIDE ACUTA Morfologia: la differenziazione dalla leucemia mieloide acuta può essere impossibile senza l uso di anticorpi monoclonali o di colorazioni speciali (citochimiche) Immunofenotipo: può essere B, T e non-t non-b

28 LEUCEMIA LINFOIDE ACUTA MGG

29 REAZIONI CITOCHIMICHE Serie linfoide -Glucuronidasi ( G) N-Acetil -Glucosaminidasi (NABG) Fosfatasi Acida (ACP) -Naftil Acetato Esterasi Acida (ANAE) Queste colorazioni sono normalmente positive nei linfociti T ma possono diventare positive anche nei linfociti B attivati delle CLL.

30 LEUCEMIA LINFOIDE ACUTA -G NABG

31 LEUCEMIA LINFOIDE ACUTA ANAE

32 LEUCEMIA LINFOIDE CRONICA Età: è prevalente in cani anziani: oltre 10 anni Sesso: rapporto maschi:femmine = 2:1

33 LEUCEMIA LINFOIDE CRONICA Sangue: Leucocitosi per aumento di piccoli linfociti moderata anemia non rigenerativa Midollo osseo: il numero di linfociti è elevato (>30%) e aumenta con il progredire della malattia Linfonodi: Se coinvolti, in fase precoce mostrano iperplasia reattiva, in fase avanzata popolazione monomorfa di piccoli linfociti Immunofenotipo: prevalentemente da linfociti T

34 LEUCEMIA LINFOIDE CRONICA FATTORI PROGNOSTICI Sembra che le T CLL abbiano peggior prognosi, ma la casistica di letteratura è ancora insufficiente

35 LEUCEMIA LINFOIDE CRONICA MGG

36 Linfoma a grandi linfociti granulari (LGL)

37 LEUCEMIE MIELOPROLIFERATIVE Sono molto meno comuni delle neoplasie linfoproliferative Classificazione: LEUCEMIE MIELOIDI ACUTE LEUCEMIE MIELOIDI CRONICHE

38 LEUCEMIE MIELOIDI ACUTE Non c è prevalenza di età: da 1 a 15 anni Accumulo di blasti: nel sangue (anche forme aleucemiche) nel midollo osseo citopenie anche in milza, fegato, LN

39 LEUCEMIE MIELOIDI ACUTE La classificazione FAB (sistema French American British) si basa: - sulle caratteristiche morfologiche - sulla percentuale dei blasti midollari - sulla risposta delle cellule ad alcune reazioni citochimiche

40 LEUCEMIE MIELOIDI ACUTE Caratteristiche morfologiche: non sempre possibile identificare i blasti con le normali colorazioni (MGG)

41 LEUCEMIE MIELOIDI ACUTE Caratteristiche morfologiche: non sempre possibile identificare i blasti con le normali colorazioni (MGG)

42 LEUCEMIE MIELOIDI ACUTE Percentuale dei blasti midollari leucemie acute: blasti > 30% leucemie croniche e SMD blasti <30% iperplasia granulocitica: blasti < 5%

43 LEUCEMIE MIELOIDI ACUTE MIDOLLO OSSEO (MGG)

44 LEUCEMIE MIELOIDI ACUTE Reazioni citochimiche: evidenziano enzimi o componenti presenti nel citoplasma dei diversi tipi cellulari

45 REAZIONI CITOCHIMICHE Serie mieloide Perossidasi (PX) granulociti, monociti Sudan Nero B (SBB) granulociti, monociti Cloro Acetato Esterasi (CAE) granulociti -Naftil Acetato Esterasi (NAE) monociti, linfociti Fosfatasi Alcalina (ALP) neutrofili, linfociti

46 LEUCEMIE MIELOIDI ACUTE reazioni citochimiche Perossidasi (Px)

47 LEUCEMIE MIELOIDI ACUTE (AML) INDIFFERENZIATA (AUL) MIELOBLASTICA INDIFFERENZIATA (M0) MIELOBLASTICA (M1-M2-M3) MIELO-MONOCITICA (M4) MONOCITICA (M5) ERITROLEUCEMIA (M6) MEGACARIOBLASTICA (M7)

48 LEUCEMIE MIELOIDI CRONICHE (CML) Graduale aumento del numero di cellule ben differenziate Leucemia mieloide o granulocitica (neutrofila, eosinofila, basofila) Leucemia monocitica Leucemia mielomonocitica Policitemia rubra vera Trombocitemia essenziale Leucemia delle mast-cellule

49 LEUCEMIE MIELOIDI CRONICHE (CML) LEUCEMIA GRANULOCITICA Neutrofili e precursori si accumulano in: midollo osseo (blasti < 30%) sangue: deviazione a sinistra ordinata, fino al mielocita milza, fegato e talvolta LN

50 LEUCEMIE MIELOIDI CRONICHE (CML) Difficile la diagnosi differenziale con la leucocitosi neutrofila infiammatoria. CRISI BLASTICA forte aumento di blasti nel sangue e nel midollo osseo (> 30%)

51 LEUCEMIE MIELOIDI CRONICHE (CML) SANGUE MGG

52 MIDOLLO OSSEO MGG Blasti< 30%

53 RIASSUMENDO Citologia Diagnostica per CLL e LGL. Importante, ma non sufficiente, per le leucemie acute a causa della scarsa differenziazione dei blasti. Immunofenotipo Fornisce indicazioni aggiuntive per CLL, LGL e ALL. Scarso numero di Ac per la serie mieloide limite nella tipizzazione delle AML. Reazioni citochimiche Conferma dell appartenenza alla serie linfoide per le CLL, LGL e ALL. Importanti nella classificazione delle AML.

54 ASPETTI DIAGNOSTICI DEL LINFOMA E DELLE LEUCEMIE NEL CANE.alcuni casi clinici

55 Cane Pastore Tedesco femmina 4 anni Linfoadenopatia generalizzata RBC 6.3 x10 6 HCT 40.3% Hb 14.0 g/dl Plt 230 x10 3 WBC 6.6 x10 3 Neutrofili. 75% Eosinofili 5% Linfociti 14% Monociti 6%

56 Cane Pastore Tedesco femmina 4 anni Linfonodo MGG

57 Cane Pastore Tedesco femmina 4 anni Anticorpi monoclonali % Linfonodo CD5 (cell. T) 1.3 CD3 (cell. T) 1.3 CD4 (cell. T) 0.5 CD8 (cell. T) 0.7 CD21 (cell. B) 98.0 CD45 (panleucocitario) 99.1

58 Cane Pastore Tedesco femmina 4 anni LINFOMA MULTICENTRICO A GRANDI CELLULE B CD21+ (STADIO III)

59 Cane Cocker maschio 6 anni Linfoadenopatia generalizzata RBC 6.39 x10 6 HCT 44% Hb 15.2 g/dl Plt 190 x10 3 WBC 5.4 x10 3 Neutrofili. 66% Eosinofili 4% Linfociti 24% Monociti 6%

60 Cane Cocker maschio 6 anni Linfonodo

61 Cane Cocker maschio 6 anni Anticorpi monoclonali % Linfonodo CD5 (cell. T) 6.9 CD3 (cell. T) 6.8 CD4 (cell. T) 4.2 CD8 (cell. T) 2.2 CD21 (cell. B) 88.0 CD45 (panleucocitario) 97.8 Blasti CD21+ = 70%

62 Cane Cocker maschio 6 anni LINFOMA MULTICENTRICO A GRANDI CELLULE B CD21+ (STADIO III)

63 Cane San Bernardo maschio 4 anni Febbre, anemia, epato-splenomegalia RBC 2,5x10 6 HCT 16% Hb 5,6 g/dl Anemia non rigenerativa

64 Cane San Bernardo maschio 4 anni Giorno 0 WBC 18,1 x10 3 Giorno 3 WBC 35,4 x10 3 Giorno 9 WBC 78,9 x10 3 numerose cellule immature

65 Cane San Bernardo maschio 4 anni Midollo osseo M:E = 33:1 34% blasti

66 Cane San Bernardo maschio 4 anni Anticorpi monoclonali % SANGUE CD5 (cell. T) 0.8 CD3 (cell. T) 0.6 CD4 (cell. T e granulociti) 38.5 CD8 (cell. T) 0.5 CD21 (cell. B) 0.4 CD49D (cell. T, granulociti e monociti) 92.2 CD45 (panleucocitario) 94.1

67 Cane San Bernardo maschio 4 anni Fosfatasi Alcalina Perossidasi

68 Cane San Bernardo maschio 4 anni NAE-CAE

69 Cane San Bernardo maschio 4 anni LEUCEMIA ACUTA MIELO-MONOCITICA AML M4

70 Cane Labrador femmina 7 anni Abbattimento, difficoltà respiratorie Massa mediastinica, versamento pleurico RBC 7.76 x10 6 /mmc HCT 52% Hb 18.0 g/dl Plt 204 x10 3 /mmc WBC 20.4 x10 3 /mmc Neutrofili. 36% Linfociti 62% Monociti 2%

71 Cane Labrador femmina 7 anni Versamento MGG

72 Cane Labrador femmina 7 anni Anticorpi monoclonali % Liquido di versamento CD5 (cell. T) 93.8 CD3 (cell. T) 95.6 CD4 (cell. T) 6.8 CD8 (cell. T) 2.5 CD21 (cell. B) 2.7 CD45 (panleucocitario) 99.1

73 Cane Labrador femmina 7 anni LINFOMA MEDIASTINICO T CD3+ CD5+ CD4- CD8-

74 Cane meticcio maschio 7 anni Abbattimento, linfoadenopatia generalizzata RBC 4.34 x10 6 /mmc HCT 31% Hb 10.7 g/dl Reticolociti 1% WBC 54.9 x10 3 /mmc Neutrofili. 8% Linfoblasti 90% Monociti 2%

75 Cane meticcio maschio 7 anni Sangue MGG 40x 100x

76 Cane meticcio maschio 7 anni LN MGG

77 Cane meticcio maschio 7 anni Midollo osseo MGG

78 Cane meticcio maschio 7 anni Anticorpi monoclonali % SANGUE CD5 (cell. T) 8.8 CD4 (cell. T) 5.0 CD8 (cell. T) 3.5 CD21 (cell. B) 86.1 CD45 (panleucocitario) 99.1

79 Cane meticcio maschio 7 anni LINFOMA MULTICENTRICO A GRANDI CELLULE B CD21+ (STADIO V)

80 Cane Pastore Tedesco maschio 6 anni Grave abbattimento, anoressia RBC 2,79 x10 6 /mmc HCT 18,2 % WBC 237 x10 3 /mmc Hb 7,7 g/dl PLT 9.0 x10 3 /mmc Anemia non rigenerativa

81 Cane Pastore Tedesco maschio 6 anni SANGUE WBC 237 x10 3 /mmc MGG

82 Cane Pastore Tedesco maschio 6 anni Anticorpi monoclonali % CD5 (cell. T) 4.1 CD3 (cell. T) 4.3 CD4 (cell. T) 2.4 CD8 (cell. T) 1.6 CD21 (cell. B) 95.0 CD45RA (cell. B e sottopopolazioni T) 95.5 CD49D (cell. T, granulociti e monociti) 4.5 CD45 (panleucocitario) 99.2 SANGUE

83 Cane Pastore Tedesco maschio 6 anni LEUCEMIA LINFOBLASTICA ACUTA B CD21+ (B ALL)

84 Cane meticcio maschio 15 anni Buone condizioni cliniche portato alla visita per dermatosi furfuracea RBC 3.9 x10 6 /mmc HCT 35 % WBC 149 x10 3 /mmc linfociti 95% Hb 11.7 g/dl reticolociti 1.6 %

85 Cane meticcio maschio 15 anni SANGUE WBC 149 x10 3 /mmc MGG

86 Cane meticcio maschio 15 anni Anticorpi monoclonali % SANGUE CD5 (cell. T) 96.3 CD3 (cell. T) 96.8 CD4 (cell. T) 1.8 CD8 (cell. T) 91.2 CD21 (cell. B) 1.3 CD45 (panleucocitario) 99.6

87 Cane meticcio maschio 15 anni LEUCEMIA LINFOCITICA CRONICA T CD5+ CD3+ CD8+ (T CLL)

88 Cane Schnautzer nano maschio 9 anni Linfoadenopatia generalizzata Piccoli noduli cutanei multipli su collo, dorso, cosce e regione lombare Alopecia sui padiglioni auricolari Rx torace e addome: nessuna anomalia

89 Cane Schnautzer nano maschio 9 anni Esame emocromocitometrico RBC 4.7 x10 6 /mmc HCT 38% Hb 12 g/dl WBC 78,2x10 3 Linfociti 95% reticolociti 0.6 % PLT 620 x10 3 /mmc

90 Cane Schnautzer nano maschio 9 anni SANGUE MGG

91 Cane Schnautzer nano maschio 9 anni LINFONODO MGG CUTE MGG

92 Cane Schnautzer nano maschio 9 anni Midollo osseo MGG

93 Cane Schnautzer nano maschio 9 anni Anticorpi monoclonali % Cereda SANGUE CD5 (cell. T) 97.7 CD4 (cell. T) 2.6 CD8 (cell. T) 0.6 CD21 (cell. B) 1.8 CD45RA (cell. B e sottopopolazioni T) 2.5 CD49D (cell. T, granulociti e monociti) 99.7 CD45 (panleucocitario) 99.2

94 Cane Schnautzer nano maschio 9 anni Cute - esame istologico - epiteliotropismo 20x 40x

95 Cane Schnautzer nano maschio 9 anni Micosi Fungoide con leucemia Sindrome di Sézary

96 Cane Breton maschio 2 anni Abbattimento, anoressia linfoadenopatia generalizzata RBC 1.64 x10 6 HCT 13% Hb 4.2 g/dl Reticolociti 0.8% Plt 80 x10 3 WBC 1.1 x10 3 Neutrofili. 24% Linfociti 72% Monociti 4%

97 Cane Breton maschio 2 anni Linfonodo 40x MGG Linfonodo 40x MGG

98 Cane Breton maschio 2 anni Midollo osseo MGG

99 Cane Breton maschio 2 anni Anticorpi monoclonali % Midollo osseo CD5 (cell. T) 6.0 CD4 (cell. T) 5.0 CD8 (cell. T) 5.0 CD21 (cell. B) 3.5 CD45RA (cell. B e sottopopolazioni T) 2.0 CD49D (cell. T, granulociti e monociti) 84.0 CD45 (panleucocitario) 94.6

100 Cane Breton maschio 2 anni Linfonodo: Perossidasi neg. Sudan Nero neg. NAE/CAE neg. ALP.

101 Cane Breton maschio 2 anni MO ALP LN ALP

102 Cane Breton maschio 2 anni LEUCEMIA ACUTA INDIFFERENZIATA AML M1

103 grazie per l attenzione..e la paziena