Criteri e Contenuti nella valutazione scientifica. FOCUS Oncologia
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1 Criteri e Contenuti nella valutazione scientifica FOCUS Oncologia Eleonora Petrucci Ematologia, Oncologia e Medicina Molecolare ISS - Roma, Aprile 2016
2 ARTICOLO 31 ALLEGATO VI d) analisi dei danni e dei benefici derivanti dal progetto Punto 20 par d) Punto 21 Punto 22 Punto 24 Punto 25 24) Effetti avversi e misure per ridurre, evitare ed attenuare qualsiasi forma di sofferenza per l animale, dalla nascita alla morte Descrivere i potenziali effetti negativi che la procedura può determinare sull animale, per esempio dolore, stress, perdita di peso, febbre, anemia, deficit neurologici, comportamenti anomali o altri sintomi clinici di stress acuto o cronico o deficienze nutrizionali; indicare se questi effetti possono essere ridotti e/o annullati con la somministrazione di analgesici o altri farmaci e, in caso contrario, indicare perché ciò non è possibile
3 Tipologia, frequenza e durata degli effetti avversi: esame delle sofferenze indotte dalle singole procedure e dalle loro conseguenze in oncologia. Inoculi di cellule o frammenti tumorali (sottocute, ortotopici, ectopici) Metastasi Ceppi murini a sviluppo spontaneo di tumori già noti Modelli di tumorigenesi chimica Trapianto endovena dopo irradiazione Trattamenti con agenti farmacologici: Chemioterapici Inibitori di pathway sirna Generazione di nuovi ceppi mutanti, mediante modifica genetica e/o incrocio.
4 Tipologia, frequenza e durata degli effetti avversi: esame delle sofferenze indotte dalle singole procedure e dalle loro conseguenze. Per ogni effetto avverso indicare: Probabilità dell incidenza Come verrà individuato l effetto avverso Misure e altri controlli per minimizzare l effetto avverso Endpoint umanitari praticabili
5 Tipologia, frequenza e durata degli effetti avversi: Esame delle sofferenze indotte dalle singole procedure: esempio. a. deperimento dello stato generale di salute (vedi score clinico nella sezione seguente). Questo effetto è atteso con penetranza del 100% nei topi dopo un periodo medio di 1-2 mesi dall'impianto. L effetto è incompatibile con una sperimentazione humane e pertanto sarà indicazione per l eutanasia. b. sviluppo di metastasi spontanee in fegato, milza, linfonodi periferici, polmone; l effetto ha una penetranza molto variabile, è incompatibile con una sperimentazione humane e pertanto sarà indicazione per l eutanasia. c. comparsa di masse tumorali sottocutanee. Questo effetto è la conseguenza diretta dell iniezione a livello sottocutaneo di cellule tumorali. Ha una penetranza del 100% e dura per 30 giorni al massimo (termine ultimo per l eutanasia dell animale secondo la nostra esperienza). d. comparsa di ascite. Questo effetto è la conseguenza diretta dell iniezione a livello intraperitoneale di cellule tumorali. Ha una penetranza del 100% e dura per 60 giorni al massimo (termine ultimo per l eutanasia dell animale secondo la nostra esperienza). e. comparsa di metastasi spleniche ed epatiche dopo inoculo intrasplenico. Questo effetto è la conseguenza diretta dell iniezione a livello splenico di cellule tumorali. Ha una penetranza del 100% e dura per 30 giorni al massimo (termine ultimo per l eutanasia dell animale secondo la nostra esperienza). Griffin G et al., Scientific uses of animals: harm-benefit analysis and complementary approaches to implementing the three Rs Rev Sci Tech., 33:
6 Score clinico della salute generale dell animale Per una valutazione maggiormente obiettiva dello stato generale di salute del topo, è stato sviluppato uno score clinico calcolato utilizzando i seguenti parametri: 1. Aspetto: lucentezza del pelo, humping, grunting. 1 (pessimo)-5 (ottimale) 2. Movimento: esplorazione volontaria della gabbia, tentativo di esplorare l esterno. 1 (pessimo)-5 (ottimale) 3. Peso: 1 (pessimo, perdita di peso >10%)-5 (ottimale, peso stabile o in crescita) 4. Frequenza respiratoria: 1 (pessimo, runting e frequenza accelerata>230/min irregolare)-5 (ottimale, frequenza regolare e attorno a 160/min) 5. Masse palpabili o ascite: 1 (pessimo, masse palpabili e visibili>500 mm 3 ; ascite chiaramente presente)-5 (ottimale, nessuna massa palpabile, nessun segno di ascite) Endpoint: Quando lo score è inferiore a 14, il topo viene sottoposto ad eutanasia per overdose di CO 2. Lo score clinico consente di ridurre al massimo il tempo sperimentale. Clinical Scores to promote continuity of good care. Morton. ILAR J 41:80-86;2000 Body Condition Scoring. Ullman-Culleré and Foltz. LAS 49:319-23;1999
7 Metodi per controllare gli effetti avversi: esempi Modelli altamente dettagliati da letteratura. Durata massima dell esperimento Tecniche non invasive di imaging (permettono di identificare precocemente e di seguire la crescita della neoplasia). Anestesia e analgesia. Score clinico della salute generale dell animale. Art. 14: [ ] sono consentite le procedure condotte in assenza di anestesia [ ] qualora si ritiene che l anestesia è per l animale più traumatica della stessa procedura [ ]. Eutanasia.
8 Modalità di terminazione dell'esperimento, ovvero identificazione di un "end-point umano Art. 5, 2b: Non possono essere autorizzate le procedure per i test tossicologici con i protocolli LD50, tranne i casi obbligatori per legislazioni e farmacopee Il problema della Kaplan Meier 25) La morte dell animale è l evento finale (endpoint) della procedura? SI NO
9 Analisi dei benefici 1. Natura dei benefici: a. aumento delle conoscenze scientifiche (es. nuovi inibitori ) b. innovatività della sperimentazione e compatibilità con il trasferimento in ambito terapeutico, clinico (traslazionalità della ricerca); 2. Probabilità di successo. a. competenze (attività del proponente, qualifica dei membri del team qualificati ) b. risorse (condizioni di allevamento spf, IVC etc.) c. finanziamenti disponibili (Airc, Finalizzata etc.) d. record di successo di precedenti esperimenti simili (pubblicazioni del gruppo proponente che attestino esperienza e competenza sui modelli e sul monitoraggio degli animali in sperimentazione) 3. Chi e come userà i risultati della sperimentazione (originalità dello studio, rilevanza a livello della comunità scientifica etc.)
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