FARMACI INNOVATIVI INIBITORI DI PI3K
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1 DIPARTIMENTO DI MEDICINA DIAGNOSTICA, CLINICA E DI SANITA PUBBLICA FARMACI INNOVATIVI INIBITORI DI PI3K Monica Civallero BKM- 120 BEZ 235 RAPAMICINA ENZASTAURI N CAL101
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4 CICLO CELLULARE fosfoinosi'de 3- chinasi PI3K TRASDUZIONE DIFFERENZIAZIONE TRASCRIZIONE APOPTOSI PROLIFERAZIONE TUMORALE
5 Enzastaurin Lylli Phase I/II/III Everolimus Novartis Phase I/II/III
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7 Linee cellulari: Granta-519, Jeko-1, HMSCs Farmaci: NVP-BEZ235 (Novartis Pharma); enzastaurin, perifosina e everolimus (Sellek Chemical). Studio della proliferazione cellulare Studio dell'apoptosi con citofluorimetro a flusso Western blot Co-colture di linee cellulari con cellule stromali Studio del ciclo cellulare Combinazioni
8 Attività antiproliferativa di NVP-BEZ235 nelle linee di linfoma mantellare. Le cellule Granta-519 e Jeko-1 sono state trattate con NVP-BEZ235 (0.5-50nM) per 24h, 48h e 72h. I valori riportati in tabella rappresentano la IC50. GRANTA h 48h 72h IC50 (nm) 46,3 29,1 10,6 IC95% 45,8-46,8 28,8-29,3 10,3-10,8 JEKO- 1 24h 48h 72h IC50 (nm) 47,9 28,6 11,6 IC95% 47, ,4-28,8 11,4-11,9
9 Figura 3 a-b e Figure 4 Western blots ottenuti dagli estratti cellulari di cellule Granta-519 trattate con NVP-BEZ235 a dosi crescenti (0-50nM) per 48h.
10 Figure 5 Western blots ottenuti dagli estratti cellulari di cellule Granta-519 trattate con NVP-BEZ235 a dosi crescenti (0-50nM) per 48h. Figure 6 a-b Profilo del ciclo cellulare di cellule Granta-519 (a) e Jeko-1 (b) dopo 24h, 48h e 72 h di trattamento con NVP-BEZ235.
11 Figura 8 e 9 Western blots ottenuti dagli estratti cellulari di cellule Granta-519 trattate con NVP-BEZ235 a dosi crescenti (0-50nM) per 48h.
12 Figura 10a-b-c Western blots ottenuti dagli estratti cellulari di cellule Granta-519 trattate con NVP-BEZ235 a dosi crescenti (0-50nM) per 48h.
13 Tabella 2 Analisi degli effetti delle combinazioni CI<0.9 indica sinergismo. Tab. 2 GRANTA- 519 JEKO- 1 NVP- BEZ235(nM) E (mm) CI CI95% low CI95% up NVP- BEZ235(nM) E (mm) CI CI95% low CI95% up 5 2,5 0,402 0,278 0, ,5 0,53 0,347 0, ,292 0,165 0, ,278 0,138 0, ,101 0,039 0, ,084 0,024 0,294 NVP- BEZ235(nM) EV (nm) CI NVP- BEZ235(nM) EV (nm) CI 5 1 0,76 0,615 0, ,389 0,264 0, ,691 0,544 0, ,587 0,359 0, ,262 0,193 0, ,096 0,036 0,253 NVP- BEZ235(nM) P (mm) CI NVP- BEZ235(nM) P (mm) CI 5 2,5 0,548 0,391 0, ,5 0,542 0,393 0, ,269 0,157 0, ,258 0,155 0, ,041 0,014 0, ,056 0,024 0,128
14 In conclusione, l'asse PI3k/Akt/mTOR è un obiettivo importante nei linfomi mantellari perché regola la sopravvivenza delle cellule, la traduzione delle proteine e la produzione di citochine. Qui, abbiamo dimostrato l'efficacia di NVP-BEZ235 in linee cellulari e cellule tumorali, evidenziando la sua potenziale utilità nel LM. Inoltre, NVP-BEZ235 ha mostrato un evidente effetto sinergico in combinazione con enzastaurin, everolimus e perifosine. Questi risultati potrebbero favorire lo sviluppo clinico di NVP-BEZ235 in combinazione e la possibile inclusione di pazienti con linfoma mantellare in fase I / II studi.
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16 Study Proposal (PREclinical) Project Title: Preclinical model of NVP- BKM120 alone and combining with Romidepsin and Lenalidomide on T cell malignancies.
17 Farmaco immunomodulatore, con effe^o pleiotropico a^raverso l'aavità sul microambiente e un effe^o dire^o sulla cellula con conseguente azione and- angiogenica e Lenalidomide andproliferadva.
18 Romidepsina (pepdde ciclico) è un prodo^o naturale o^enuto da un ba^erio Chromobacterium violaceum. Inibisce l'aavità di enzimi denominad istone deacedlasi (HDAC), coinvold nell'"accensione" o nello "spegnimento" di geni che regolano la proliferazione e la morte cellulare. Nel 2009 ha avuto l approvazione dal FDA per il tra^amento del linfoma cutaneo a cellule T (CTCL), e nel giugno scorso, anche quella nel PTCL. L'esa^o meccanismo d'azione di romidepsina nel linfoma a cellule T non è noto. Studi in vitro dimostrano che romidepsina induce arresto del ciclo cellulare, apoptosi e accumulo di istoni acedlad.
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20 Isobologram analysis of combinadon of Romidepsin (0.5, 1, 2.5 nm) combined with Lenalidomide (2, 4, 10 µm) T - cell lines Romidepsin Lenalidomide CI (nm) (µm) HUT KARPAS Combina(on index (CI): CI < 1, synergism; CI = 1, addi(ve effect; CI> 1, antagonism.
21 HUT h Apoptosis (%) Late apoptosis Early apoptosis Ctr R L R+L Ctr R L R+L HUT- 78 Karpas- 299 PI HUT h Ctr R L R+L Caspasi 9 Caspasi 3 Bcl- xl Bcl- 2 Annexina- V tubulina
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23 Effea di Romidepsina e Lenalidomide in combinazione sulla via di segnale PI3K/AKT/mTOR e acetyl- α tubulina HUT h Ctr R L R+L p-akt HUT h AKT p-gsk GSK Ctr R L R+L acetil-α tubulina p-p 70 P-70 p-mtor m-tor tubulina
24 Mouse model: sc xenograo of human lymphoma cell lines Valutazione di efficacia (volume del tumore e curva Kaplan- Mayer) Topi NOD- SCID (T, B and nk depleted) Inoculo sowocutaneo di linee umane di linfoma follicolare/ mantellare Valutazione di tossicità (peso corporeao)
25 Studio di combinazione (es. bortezomib + enzastaurin) Placebo (5 topi x 2) Bortezomib (5 topi x 2) Enzastaurin (5 topi x 2) 20 topi/esperimento Bortezomib + enzastaurin ( 5 topi x 2)
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