LM Sc.Biosanitarie Ricerca Diagnostica Citogenetica I. La citogenetica e` lo studio dei fenomeni genetici attraverso l analisi citologica dei

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1 Citogenetica I La citogenetica e` lo studio dei fenomeni genetici attraverso l analisi citologica dei cromosomi al microscopio. Ferguson-Smith Lezione 13

2 Cariotipi a confronto 1-3 gruppo A 4-5 gruppo B X-6-12 gruppo C gruppo D gruppo E gruppo F Y gruppo G

3 G-bande

4 Selezione delle metafasi J Ottima ma..

5 Selezione delle metafasi L Puo essere anche cosi... M Cromosomi non ben riconoscibili, difficili anche da contare. Scartare! (potendo)

6 L.. O cosi Selezione delle metafasi M Troppo contratti pero si puo usare per contarli. Scartare! (potendo)

7 Selezione delle metafasi K Sufficiente M Si possono contare Puo essere utile per analizzare i cromosomi non sovrapposti

8 Selezione delle metafasi K Discreta M Si possono contare, e anche se ci sono alcune sovrapposizioni, si possono analizzare

9 Selezione delle metafasi K Buona M Si possono contare, e anche se ci sono alcune sovrapposizioni, la morfologia dei cromosomi e buona

10 Come si fa il cariotipo? 1. SI CONTANO I CROMOSOMI : IMPORTANTE PER SOSPETTARE LA PRESENZA DI ALTERAZIONI NEL NUMERO CROMOSOMICO 2. SI APPAIANO GLI OMOLOGHI PER SIMILARITA 3. SI METTONO IN ORDINE SECONDO LA CONVENZIONE

11 Fare il cariotipo

12 Cariotipo ordinato CARIOTIPO IN QM (indicare il bandeggio)

13 Diagramma

14 Diagramma

15 46,XX - cariotipo normale Femminile 46,XY - cariotipo normale Maschile Terminologia Questo modo di scrivere ci da due informazioni: - numero totale dei cromosomi (46) - sesso dell organismo 47,XY,+21 Maschio con 47 cromosomi (invece di 46) ed un cromosoma 21 in piu (sindrome di Down) 46,XX,del(14)(q23) 46,XY,dup(14)(q22q25) 46,XX,r(7)(p22q36) del=delezione dup= duplicazione r=ring (cromosoma ad anello)

16 FISH

17 cromosoma sul vetrino FISH sintesi di una sonda complementare marcata con un fluorocromo denaturazione A T C G G T A T C C T A T A G G C A T A G G A T doppia elica di DNA A T C G G T A T C C T A T A G G C A T A G G A T A T C G G T A T C C T A T A G G C A T A G G A T denaturazione ibridazione della sonda sui cromosomi denaturati sul vetrino A T C G G T A T C C T A T A G G C A T A G G A T A T C T C G G T A C T A T A G G C A T A G G A T A T C G G T A T C C T A T A G G C A T A G G A T osservazione del vetrino

18 Principio della fluorescenza

19 filtro di eccitazione FISH : microscopio a fluorescenza N Osservazione al microscopio ¹ # Lampada a vapori di mercurio filtro di emissione specchio dicroico CCD camera Ç fotografia : obiettivo/ condensatore Elaborazione al computer

20 FISH: metafase in DAPI Cromosomi 1. denaturati 2. colorati con DAPI

21 FISH: segnali Sonde puntiformi fluorescenti

22 FISH: merge Sovrapposizione dell immagine della sonda sull immagine del DAPI

23 SONDE PER FISH

24 DAPI WCP MERGE SONDA

25 DAPI PCP MERGE SONDA

26 COIBRIDAZIONI 2 SONDE PUNTIFORMI 3 SONDE PUNTIFORMI

27 Duplicazione braccio corto del cromosoma Y crom Y normale Yp duplicato Alfoide crom Y 46X -Y + mar(dupyp) SRY Individuo di sesso maschile azospermico

28 Inversione pericentrica:4(inv) liquido amniotico By NA 4 inv(4)

29 Traslocazione 1/15 in diagnosi prenatale Sangue periferico madre By NA 1 1/15 15/ ,XY,der(1)t(1;15) (1pter,15q23)mat Prelievo di villi coriali ishder(1)t(1p;15q) (p36.33;q24.2)mat (pcp1p36;pcp15q)

30 Traslocazione(3/22) 3 3/22 22/3 22

31 Traslocazione 5/11 By NA Sangue periferico padre Liquido amniotico

32 Traslocazione 5/11 By NA 5 5/11 11/5 11

33 insinv6/7 6 6del 7/6 y

34 isocromosoma 21 By NA 21 isodic21