Il valore dell analisi prenatale non invasiva (non-invasive prenatal testing, NIPT). Un supplemento per il flipbook del consulente genetico

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1 Il valore dell analisi prenatale non invasiva (non-invasive prenatal testing, NIPT). Un supplemento per il flipbook del consulente genetico

2 Le NIPT utilizzano DNA libero. Campione di sangue materno DNA libero di origine materna DNA libero di origine fetale

3 Le NIPT utilizzano DNA libero. Il campione di sangue materno contiene una miscela di DNA libero di origine materna e fetale. Nella NIPT vengono contati e analizzati sia i frammenti materni sia quelli fetali. Le aneuploidie vengono rilevate confrontando la quantità di materiale cromosomico rispetto a una serie di cromosomi di riferimento.

4 Sequenziamento massivo in parallelo: un approccio più approfondito al sequenziamento. DNA libero di origine materna e fetale Allineamento e conteggio Gravidanza non interessata Gravidanza interessata DNA libero sequenziato mediante sequenziamento massivo in parallelo (Massively Parallel Sequencing, MPS)

5 Sequenziamento massivo in parallelo: un approccio più approfondito al sequenziamento. Il campione di sangue materno contiene una miscela di DNA libero di origine materna e fetale. L MPS, o sequenziamento massivo in parallelo, analizza i frammenti di DNA libero ottenuti da un campione di sangue materno. Le sequenze vengono allineate al genoma per identificare il cromosoma di origine del frammento. Le aneuploidie vengono rilevate confrontando la quantità di materiale cromosomico per un cromosoma specifico nel campione di una paziente rispetto a una serie di cromosomi di riferimento.

6 Rilevazione di anomalie cromosomiche fetali. Cromosomi Trisomia o Trisomia 18 Trisomia XX-sesso femminile XY-sesso maschile

7 Rilevazione di anomalie cromosomiche fetali. Il test prenatale verifi rileva le trisomie 21, 18 e 13 sia nelle gravidanze singole sia in quelle gemellari.

8 Rilevazione di anomalie dei cromosomi sessuali. Cromosomi o XX-sesso femminile XY-sesso maschile XXX Monosomia X XXY XYY

9 Rilevazione di anomalie dei cromosomi sessuali. Nelle gravidanze singole, possono inoltre essere rilevate le aneuploidie dei cromosomi sessuali. Questo test è facoltativo, in base alla preferenza della paziente e del medico. Le aneuploidie dei cromosomi sessuali rilevate includono 45,X, 47,XXX, 47,XXY, 47,XYY. Nelle gravidanze gemellari, viene rilevata la presenza o l assenza del cromosoma Y. Questo test è facoltativo, in base alla preferenza della paziente e del medico.

10 Rilevamenti del test verifi. Risultati Aneuploidia rilevata Aneuploidia sospetta Nessuna aneuploidia rilevata

11 Risultati del test. Per gli autosomi vi sono tre possibili risultati: Aneuploidia rilevata, aneuploidia sospetta (valore al limite), aneuploidia non rilevata. Per l analisi dei cromosomi sessuali nelle gravidanze singole vi sono due possibili risultati: Aneuploidia rilevata e aneuploidia non rilevata. Se non viene rilevata un aneuploidia, verrà segnalato il sesso del feto. Per le gravidanze gemellari, verrà segnalata la presenza o l assenza del cromosoma Y. Alle pazienti che ricevono un risultato di aneuploidia rilevata o sospetta deve essere offerta una successiva discussione sui risultati e sulle opzioni di analisi invasive (villocentesi o amniocentesi) per avere una conferma.

12 Tipica sequenza di analisi prenatale. La paziente sceglie l analisi prenatale NO SÌ Screening del siero Diagnostica NIPT (non-invasiva) Villocentesi/Amniocentesi (invasiva) SÌ Il risultato dello screening del siero è positivo? Il risultato del test verifi è un aneuploidia rilevata o sospetta? SÌ NO NO Continuare con la gestione della gravidanza secondo i protocolli della vostra professione. Continuare con la gestione della gravidanza secondo i protocolli della vostra professione. Continuare con la gestione della gravidanza secondo i protocolli della vostra professione.

13 Tipica sequenza di analisi prenatale. Considerazioni sulla consulenza prima del test Il test per l aneuploidia deve essere una scelta informata. Il test prenatale verifi rileva aneuploidie dei cromosomi 21, 18 e 13. Il test dei cromosomi sessuali è facoltativo. L offerta di qualsiasi test deve essere basata sul contesto clinico. Villocentesi e amniocentesi rimangono opzioni per tutte le donne in gravidanza. Considerazioni sulla consulenza dopo il test 3 risultati possibili per ogni cromosoma testato. Nessuna aneuploidia rilevata: questo risultato è rassicurante ma non garantisce una gravidanza non interessata. Aneuploidia sospetta/valore al limite: questo risultato è indicativo di aneuploidia. Esiste una piccola possibilità che i risultati possano non riflettere i cromosomi fetali bensì le modificazioni nella placenta o nella paziente. Aneuploidia rilevata: questo risultato è coerente con aneuploidia. Esiste una piccola possibilità che i risultati possano non riflettere i cromosomi fetali bensì le modificazioni nella placenta o nella paziente. Per i risultati di aneuploidia sospetta o rilevata sono raccomandate la consulenza genetica e la villocentesi/ amniocentesi. Lo screening del difetto di chiusura del tubo neurale non è una parte delle analisi NIPT e dovrebbe essere offerto separatamente. Tutti i risultati devono essere esaminati nel contesto dell anamnesi clinica, medica e familiare.

14 Profilo della NIPT: i numeri del test verifi. 1provetta di sangue 0.1% la più bassa percentuale di fallimento del test Eseguibile a sole 10 settimane di gravidanza Analizza le 3 più comuni aneuploidie autosomiche e aneuploidie sessuali supplementari Risultati ottenuti in soli giorni lavorativi2-4 Ciò che non può essere espresso in numeri: il conforto di sapere

15 Che cosa rende il test prenatale verifi diverso? Il test verifi è un analisi del sangue semplice, che si può eseguire in studio: è necessaria solo una provetta di sangue. Può essere effettuato presto, già a 10 settimane in gravidanza. Rileva le trisomie 21, 18 e 13 e ha un opzione per le aneuploidie dei cromosomi sessuali (monosomia X, XXX, XXY, XYY). I risultati del test sono solitamente disponibili in 2 4 giorni lavorativi dal ricevimento del campione. Ha la più bassa percentuale di fallimento tra le NIPT (0,1%). Per questo motivo, il test verifi è in grado di fornire risposte affidabili sulle più comuni anomalie cromosomiche.

16 Che cos è il mosaicismo? Divisione cellulare Mosaicismo tissutale Cellule normali Cellule con modificazione genetica

17 Che cos è il mosaicismo? Il mosaicismo è un fenomeno biologico dovuto alla presenza di cellule con differenti composizioni genetiche nello stesso individuo. Di solito si verifica durante il processo di divisione cellulare mitotica. Il mosaicismo può essere una causa biologica alla base di risultati discordanti delle NIPT.

18 Tipi di mosaicismo. Disomia Trisomia Mosaicismo generalizzato Mosaicismo confinato alla placenta (Confined placental mosaicism, CPM) Mosaicismo fetale

19 Tipi di mosaicismo. Esistono tre tipi di mosaicismo: Mosaicismo generalizzato: presenza di due o più linee cellulari con cariotipo diverso sia nella placenta sia nel feto. Nei casi di mosaicismo generalizzato, esiste la possibilità di risultati delle NIPT falsi positivi o falsi negativi a seconda dell origine del DNA libero. Mosaicismo confinato alla placenta: presenza di due o più linee cellulari con cariotipi diversi che sono limitate alla placenta e non presenti nel feto. Nei casi di mosaicismo confinato alla placenta, esiste la possibilità di un risultato falso positivo della NIPT. Mosaicismo fetale: presenza di due o più linee cellulari con cariotipi diversi che sono presenti nel feto, ma non presenti nella placenta. Nei casi di mosaicismo fetale, esiste la possibilità di un risultato falso negativo della NIPT.

20 Mosaicismo confinato alla placenta. Struttura di villo corionico normale Tecniche di laboratorio utilizzate per la villocentesi (Chorionic Villus Sampling, CVS) Colonne cellulari citotrofoblastiche Villocentesi Sinciziotrofoblasto Nucleo mesenchimale Citotrofoblasto Nucleo mesenchimale Sospensione di citotrofoblasto Coltura di villi corionici Preparazione diretta

21 Mosaicismo confinato alla placenta (Confined placental mosaicism, CPM). Il mosaicismo confinato alla placenta (CPM) è definito come presenza di due o più linee cellulari con cariotipi diversi che sono limitate alla placenta e non presenti nel feto. Il DNA libero che viene analizzato nella NIPT origina dai citotrofoblasti; quindi, un risultato della NIPT è molto simile a un risultato della preparazione diretta della villocentesi. Mosaicismo confinato alla placenta di tipo 1: il mosaicismo è limitato alle cellule del trofoblasto. Mosaicismo confinato alla placenta di tipo 2: il mosaicismo è limitato alle cellule dello stroma del villo corionico. Mosaicismo confinato alla placenta di tipo 3: il mosaicismo è presente in entrambe: cellule del trofoblasto e dello stroma. I mosaicismi confinati alla placenta di tipo 1 e di tipo 3 possono causare falsi positivi nelle NIPT Illumina, Inc. Tutti i diritti riservati. Illumina e verifi sono marchi registrati di Illumina, Inc e/o delle sue affiliate negli Stati Uniti e/o in altri Paesi. INTL_PRESENTATION-0046 Rev C