G. PERRUOLO Dipartimento di Biologia e Patologia Cellulare e Molecolare Università Federico II Napoli

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1 Congresso SiBioc-SIMEL Rimini, 29 ottobre 2008 Workshop Siemens G. PERRUOLO Dipartimento di Biologia e Patologia Cellulare e Molecolare Università Federico II Napoli

2 Trasmissione sessuale: OMO ETERO Scambio siringe infette (droga) Trasmissione Verticale Trasfusioni

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4 Italia: Diagnosi di AIDS e decessi AIDS-correlati N. di diagnosi/morti Dati COA a gennaio 2008

5 casi di AIDS = soggetti HIV+ = Fonti: Registro Nazionale AIDS, Sorveglianza Nazionale HIV, 2008 Numero stimato di soggetti HIV+ viventi in Italia nel 2007: ~ Quanti sanno di essere HIV+? Il 25% dei soggetti HIV+ in Italia non sa di essere infetto

6 Ulteriore diffusione della infezione -Scarsa conoscenza del problema da parte della opinione pubblica Necessaria una modifica delle procedure con cui i soggetti sono valutati Screening della popolazione non raccomandato per le aree a bassa prevalenza Alti costi Problemi psicologici Ricorso al test limitato ai donatori, ai soggetti a rischio ed alle gravide

7 DIAGNOSI SIEROLOGICA Test per HIV NEGATIVO POSITIVO INDETERMINATO II Test NEGATIVO POSITIVO WESTERN BLOT -Chi deve essere sottoposto al test? -Consenso informato? -Test Combo di IV generazione

8 TEST COMBO Enzima che catalizza reazioni cromogene Es: Siero del paziente Riducono in maniera significativa il periodo finestra HIV COMBO Detectable level

9 HIV-1 RNA PLASMATICO: UN MARKER PROGNOSTICO E DI RISPOSTA ALLA TERAPIA ANTIRETROVIRALE L USO DIAGNOSTICO E LIMITATO DIAGNOSI MOLECOLARE: polymerase chain reaction (PCR) per RNA Evidenziazione e quantificazione di HIV-RNA plasmatico (viral load) Utilizzo: --risposta alla terapia HART --valutazione del set point Esistono varie metodiche: più usato Real Time PCR

10 Fattori di rischio: viremia plasmatica e progressione a 5 anni dall infezione % 49% 26% 8% AIDS Stabilizzazione (set point) 3-6 mesi Replicazione del virus Trascrittasi Inversa-TI è un enzima che sintetizza DNA virale partendo dall RNA presente nel virus. Sostanze in grado di interferire con il ciclo replicativo dell HIV: 1. Farmaci Nucleosidici (AZT, ddi, ddc, 3TC, D4T): intervengono sulla retrotrascrizione. 1. Inibitori delle proteasi virali: intervengono sulle modifiche post-traduttive. Resistenza al farmaco Capacità del virus di cambiare la sua struttura chimica o genetica. Simulazione Molecolare: studio della resistenza dell HIV-1 nei confronti degli inibitori della Transcrittasi Inversa.

11 INFEZIONE DA HIV Patologie cardiachemetaboliche EFFETTI COLLATERALI TERAPIA CURE PALLIATIVE DI SUPPORTO INFEZIONI OPPORTUNISTICHE MONITORAGGIO VIRO- IMMUNOLOGICO HIV-RNA numero di copie virali per ml di sangue Linfociti totali per ml di sangue CD 4+ numero totale per ml di sangue Rapporto CD 4+/CD 8+ OBBIETTIVI HIV-RNA < 50 copie / ml CD 4+ > 200 / ml

12 TERAPIA ARV: OBIETTIVI RIDUZIONE MORBILITA E MORTALITA HIV- CORRELATE MIGLIORAMENTO DELLA QUALITA DI VITA RIPRISTINO E PRESERVAZIONE FUNZIONE DEL SISTEMA IMMUNITARIO SOPPRESSIONE DURATURA DELL HIV-RNA.MA NON E POSSIBILE ERADICARE IL VIRUS CON I FARMACI AD OGGI DISPONIBILI.

13 TERAPIA ARV: effetti collaterali TERAPIA ARV: considerazioni CRONICA DI ASSOCIAZIONE NOTEVOLE IMPATTO ECONOMICO IMPEGNATIVA SU ENTRAMBI I FRONTI MEDICO- PAZIENTE NECESSITA DI STRETTO CONTROLLO E QUINDI DI RAPPORTO DI FIDUCIA MEDICO-PAZIENTE LA NON ASSUNZIONE RECA MENO DANNI DI UNA MALE- ASSUNZIONE (RESISTENZE!!!!!)

14 Valutazione HIV Combo Assay Siemens Advia Centaur vs HIV Combo Assay Architect Abbott e Roche Modular

15 HIV 1/0/2 Combo Assay Siemens Advia Centaur HIV p24 Antigen Sensitivity Dati Siemens su ADVIA Centaur (EuroMedlab 2007)

16 Campioni provenienti dal Servizio Trasfusionale della A.U.O. Federico II Total Sample Processed 2778 Architect Neg Pos Centaur Concordanza del 99,9 % Neg Pos 8 Total samples processed 338 Modular Neg Pos Centaur Neg 217 Pos 121 Campioni provenienti dalla A.F. Diagnostica Virologica 118 Gravide 99 Patologie autoimmuni varie 121 Positivi HIV a diversa carica virale

17 Dati Siemens su ADVIA Centaur (EuroMedlab 2007) Specificity 99.86% Dati Siemens su ADVIA Centaur (EuroMedlab 2007)

18 -Il test Siemens HIV ha una elevata concordanza con il test HIV Combo Architect Abbott e con il test HIV Combo Roche Modular -Non sono state riscontrate false positività nelle gravide ed in soggetti con artrite reumatoide ed altre patologie autoimmuni A.F. Diagnostica Virologica Prof. Giuseppe Portella Dr. Luca Vallefuoco Dr. Bruno Mazziotti di Celso Dr.ssa Fatima Abdenadi Servizio Trasfusionale Prof. Salvatore Formisano Dr. Enzo Perna