L emocromo è l esame specialistico ed essenziale per l ematologo. Indica che:

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1 L emocromo è l esame specialistico ed essenziale per l ematologo Indica che: Il midollo produce un numero sufficiente di cellule mature di tutte le linee emopoietiche Lo sviluppo di ogni linea emopoietica è normale

2 EMOCROMO LA BUONA ESECUZIONE DEL PRELIEVO IL TEMPO DAL PRELIEVO L ANTICOAGULANTE IDONEO QUANDO USARE Na-Citrato COME ANTICOAGULANTE

3 AUTOMAZIONE IN EMATOLOGIA I citometri automatici sono in grado di contare rapidamente un numero elevato di particelle e di valutarne le dimensioni Per queste caratteristiche possono in un tempo molto breve fornire molti parametri con qualità irraggiungibile dalle metodiche manuali

4 CONTATORE AUTOMATICO CAMPIONE Una porzione di sangue viene lisata per: Una porzione di sangue viene diluita per: - misurare la concentrazione di emoglobina - contare il numero di globuli bianchi - contare i globuli rossi - misurare il volume dei globuli rossi - contare le piastrine

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6 GLOBULI ROSSI PARAMETRI DIRETTI: CONTEGGIO GLOBULI DOSAGGIO Hb MCV PARAMETRI DERIVATI: EMATOCRITO MCH MCHC

7 GLOBULI ROSSI MCV = Mean Corpuscolar Volume (fl = femtolitro) MCH = Mean Corpuscolar Hemoglobin (valore emoglobina/numero globuli rossi x 10) MCHC = Mean Corpuscolar Hemoglobin Concentration (valore emoglobina/ valore ematocrito)

8 NOMENCLATURA ANISOCITOSI ANISOPOCHILOCITOSI MACROCITOSI MICROCITOSI IPOCROMIA IPERCROMIA MICROCITEMIA

9 CURVA DI DISTRIBUZIONE DEL VOLUME ERITROCITARIO

10 CITOGRAMMA ERITROCITARIO DI VOLUME E CONCENTRAZIONE DI EMOGLOBINA macrocitosi ipocromia ipercromia microcitosi

11 MICROCITOSI Globuli Rossi = /ul HGB = 10.6 g/dl MCV = 70.0 fl

12 MACROCITOSI Globuli Rossi = /μl HGB = 11,2 g/dl MCV = 121,4 fl

13 V O L U M E Densità (concentrazione Hb)

14 Analisi RBC: citogramma volume/concetrazione Macro 120fl 60fl Y asse: Volumi X asse: densità celllulare Micro Hgb.conc. 28g/dl 41g/dl Ipo Iper

15 RETICOLOCITI IN AUTOMAZIONE PARAMETRO ESSENZIALE NELLA DIAGNOSI DELLE ANEMIE,ESPRIMONO LO STATO FUNZIONALE DELL ERITROPOIESI LA STRUMENTAZIONE AUTOMATICA PERMETTE UN CONTEGGIO ATTENDIBILE POTENDO ANALIZZARE UN NUMERO DI EVENTI SIGNIFICATIVO

16 RETICOLOCITI IN AUTOMAZIONE METODO: COLORAZIONI (auramina O, arancio di tiazolo, oxazina, bleu di cresile) evidenziano l RNA dei reticolociti PARAMETRI %, VALORI ASSOLUTI, IRF

17 High Angle (5-15 degrees) GATED Analisi Reticolociti Oxazine 750 Absorption GLOBULI ROSSI RETICOLOCITI L : Retic maturi M : Retic a maturazione intermedia H : Retic più immaturi, com maggiore qtà di RNA

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20 2,98%

21 AUTOMAZIONE IN EMATOLOGIA: FORMULA LEUCOCITARIA - Contare correttamente le cellule normali - Evidenziare la presenza di cellule patologiche -Identificare le cellule patologiche

22 FORMULA LEUCOCITARIA IN AUTOMAZIONE La presenza di cellule patologiche deve essere sempre confermata e valutata insieme a tutti i parametri dell analisi dell emocromo. L identificazione del tipo di cellula patologica richiede ancor oggi l uso di altri strumenti e/o di altre metodiche.

23 Formula leucocitaria misurata con metodo impedenziometrico fl

24 V o l u m e Attività perossidasica

25 Intracellular Peroxidase Flow Cytometric Analysis

26 Tecnologia Baso BASOFILI MONO + LINFO NEUTR + EOSINO BLASTI

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28 LINFOCITOSI LEUCOCITI = 16,600/μl LINFOCITI = 12,100/μl

29 LUC= 14,0% LEUCOCITI= 7.680

30 LEUCOCITOSI 149,000/μl LMC

31 Peripheral Blood

32 Peripheral Blood

33 Basophil granulocyte

34 CONTEGGIO PIASTRINE IMPORTANZA DELLA BUONA ESECUZIONE DEL PRELIEVO QUANDO NON E INDICATO L ANTICOAGULANTE EDTA

35 PARAMETRI PIASTRINICI MPV = MEAN PLATELET VOLUME PDW = PLATELET DISTRIBUTION WIDTH PCT = PLATELETCRIT SONO FORTEMENTE INFLUENZATI DALLE CONDIZIONI E DAL TEMPO DI ESECUZIONE DEL PRELIEVO

36 METODO ADVIA volume densità

37 PIASTRINE = 2,000/μl

38 Conteggi piastrinici non attendibili si ottengono quando sono presenti aggregati, oppure piastrine giganti,oppure microciti o frammenti di eritrociti o leucociti

39 PIASTRINE 78,000/μl AGGREGATI PIASTRINICI

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42 Ethnic differences in normal blood cell values Men Women Caucasian n=100 Afrocarribean n=51 African n=65 Caucasian n=100 Afrocarribean n=51 African n=50 White cell count * 5.7( ) 5.2( ) 4.5( ) 6.2( ) 5.7( ) 5.0( ) Neutrophil count 3.2( ) 2.5( ) 2.0( ) 3.6( ) 3.0( ) 2.4( ) Lymphocyte count 1.7( ) 1.9( ) 1.8( ) 1.8( ) 2.0( ) 2.0( ) Monocyte 0.34( ) 0.33( ) 0.29( ) 0.30( ) 0.31( ) 0.28( ) Eosinophil count 0.12( ) 0.13( ) 0.12( ) 0.13( ) 0.10( ) 0.10( ) Platelet count 218( ) 196( ) 183( ) 246( ) 236( ) 207( )

43 Hematological values for normal infants and children. Amalgamation of data derived from various sources, expressed as mean ± 2SD or 95% range Birth Day 3 1 month 2 months 3-6 months 1 year 2-6 years 6-12 years Red cell count x /l Hemoglobin g/l Packed cell volume (PCV) l/l Mean cell volume (MCV) fl Mean cell Hb (MCH) pg Mean cell Hb conc (MCHC) g/l Reticulocytes x 10 9 /l White cell count x 10 9 /l Neutrophils x 10 9 /l Lympocytes x 10 9 /l Monocytes x 10 9 /l Eosinophils x 10 9 /l Platelets x 10 9 /l 6.0± ± ± ± ± ± ± ± ±40 180± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ±10 105±13 104±12 95±8 76±8 78±6 81±6 86±9 34±3 34±3 33±3 30±3 27±3 27±2 27±3 29±4 330± ± ± ± ± ± ± ± ±8 15±8 12±7 10±5 12±6 11±5 10±5 9±