"Sotto l'azzurro fitto del cielo qualche uccello di mare se ne va, nè sosta mai perchè tutte le immagini portano scritto più in là".
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- Salvatore Pesce
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1 Lentamente muore chi diventa schiavo dell'abitudine, ripetendo ogni giorno gli stessi percorsi, chi non cambia la marca, chi non rischia e cambia colore dei vestiti, chi non parla a chi non conosce. Muore lentamente chi evita una passione, chi preferisce il nero su bianco e i puntini sulle "i" piuttosto che un insieme di emozioni, proprio quelle che fanno brillare gli occhi, quelle che fanno di uno sbadiglio un sorriso, quelle che fanno battere il cuore davanti all'errore e ai sentimenti. Lentamente muore chi non capovolge il tavolo, chi è infelice sul lavoro, chi non rischia la certezza per l'incertezza, per inseguire un sogno, chi non si permette almeno una volta nella vita di fuggire ai consigli sensati. Lentamente muore chi non viaggia, chi non legge, chi non ascolta musica, chi non trova grazia in se stesso. Muore lentamente chi distrugge l'amor proprio, chi non si lascia aiutare; chi passa i giorni a lamentarsi della propria sfortuna o della pioggia incessante. Lentamente muore chi abbandona un progetto prima di iniziarlo, chi non fa domande sugli argomenti che non conosce, chi non risponde quando gli chiedono qualcosa che conosce. Evitiamo la morte a piccole dosi, ricordando sempre che essere vivo richiede uno sforzo di gran lunga maggiore del semplice fatto di respirare. Soltanto l'ardente pazienza porterà al raggiungimento di una splendida felicità. P. Neruda
2 "Sotto l'azzurro fitto del cielo qualche uccello di mare se ne va, nè sosta mai perchè tutte le immagini portano scritto più in là". Eugenio Montale
3 IL MAPPAGGIO GENETICO Caratteri mendeliani Caratteri complessi
4 IL MAPPAGGIO GENETICO Caratteri mendeliani Caratteri complessi
5 OBIETTIVO Determinare con quale frequenza due loci vengono separati dalla ricombinazione durante la meiosi
6 Ricombinazione Il mappaggio genetico
7 linkage
8 LOCI DISTANTI LOCI VICINI A a B b A B a b A a A a B B b b A B a b A B a b
9 DEFINIZIONE Due loci si dicono in linkage quando la loro frazione di ricombinazione è < 0.5
10 FRAZIONE DI RICOMBINAZIONE θ= numero di ricombinanti numero totale meiosi
11 Sono questi geni in linkage? 1. Dobbiamo analizzare un numero di famiglie che sono informative per i loci di interesse
12 Sono questi geni in linkage? 2. Noi dobbiamo capire la fase Aa Bb aa bb Aa Bb aa bb X
13 Sono questi geni in linkage? 3. Dobbiamo cercare di capire se ogni bambino ha una combinazione di alleli parentale o se è un ricombinante 3 generazioni!!!
14 Sono questi geni in linkage? 4. E più probabile che noi abbiamo osservato la particolare combinazione di alleli in quella famiglia perchè i geni sono in linkage piuttosto che per il solo caso dovuto ad assortimento indipendente dei cromosomi!!
15 Sono questi geni in linkage? 5. Usiamo il calcolo del lod score
16 Sono questi geni in linkage?
17 Sono questi geni in linkage?
18 Come capire l ordine dei geni e le distanze che li separano? A Il metodo più diretto sarebbe calcolare la frazione di ricombinazione tra geni malattia B C D Ma non avremmo i doppi eterozigoti!!! Abbiamo bisogno di marcatori a posizione nota e riferire la posizione dei geni rispetto a questi
19 MARCATORI Qualsiasi sequenza che consente di distinguere i cromosomi gli uni dagli altri Determinazione dei ricombinanti Più i marcatori sono ravvicinati, maggiore la possibilità di determinare la posizione dei geni con precisione
20 I marcatori genetici
21 STRs
22 4 ripetizioni AATG AATG AATG AATG 6 ripetizioni AATG AATG AATG AATG AATG AATG That s the startpoint for modern ability to perform human identity test
23 CLONAGGIO POSIZIONALE Reclutare famiglie estese Scansione dell intero genoma Testare più loci della stessa regione nelle stesse famiglie e usare i ricombinanti per definire l intervallo minimo dove cercare il gene Identificare i cloni di tutti l area Trovare tutti i geni dell area Trovare mutazioni presenti nei pazienti affetti "Eureka!"
24 Se dimostro che un carattere in una o più famiglie è in linkage con uno o più marcatori a posizione nota la posizione del gene è prossima a quella del marcatore!
25 CLONAGGIO POSIZIONALE Reclutare famiglie estese Scansione dell intero genoma Testare più loci della stessa regione nelle stesse famiglie e usare i ricombinanti per definire l intervallo minimo dove cercare il gene Identificare i cloni di tutti l area Trovare tutti i geni dell area Trovare mutazioni presenti nei pazienti affetti "Eureka!"
26 STUDIO DI LINKAGE
27 CLONAGGIO POSIZIONALE Reclutare famiglie estese Scansione dell intero genoma Testare più loci della stessa regione nelle stesse famiglie e usare i ricombinanti per definire l intervallo minimo dove cercare il gene Identificare i cloni di tutti l area Trovare tutti i geni dell area Trovare mutazioni presenti nei pazienti affetti "Eureka!"
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29 CLONAGGIO POSIZIONALE Reclutare famiglie estese Scansione dell intero genoma Testare più loci della stessa regione nelle stesse famiglie e usare i ricombinanti per definire l intervallo minimo dove cercare il gene Identificare i cloni di tutti l area Trovare tutti i geni dell area Trovare mutazioni presenti nei pazienti affetti "Eureka!"
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31 STUDIO DI LINKAGE A B C D E D14S258 D14S26 D14S257 D14S
32 CLONAGGIO POSIZIONALE Reclutare famiglie estese Scansione dell intero genoma Testare più loci della stessa regione nelle stesse famiglie e usare i ricombinanti per definire l intervallo minimo dove cercare il gene Identificare i cloni di tutti l area Trovare tutti i geni dell area Trovare mutazioni presenti nei pazienti affetti "Eureka!"
33 Quali cloni nella regione di linkage?
34 CLONAGGIO POSIZIONALE Reclutare famiglie estese Scansione dell intero genoma Testare più loci della stessa regione nelle stesse famiglie e usare i ricombinanti per definire l intervallo minimo dove cercare il gene Identificare i cloni di tutti l area Trovare tutti i geni dell area Trovare mutazioni presenti nei pazienti affetti "Eureka!"
35 Quali geni nella regione di linkage?
36 CLONAGGIO POSIZIONALE Reclutare famiglie estese Scansione dell intero genoma Testare più loci della stessa regione nelle stesse famiglie e usare i ricombinanti per definire l intervallo minimo dove cercare il gene Identificare i cloni di tutti l area Trovare tutti i geni dell area Trovare mutazioni presenti nei pazienti affetti "Eureka!"
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38 Diagnosi indiretta per LINKAGE
39 IL MAPPAGGIO GENETICO Caratteri mendeliani Caratteri complessi
40 IL MAPPAGGIO GENETICO Caratteri mendeliani Caratteri complessi
41 STUDIO DI LINKAGE NON PARAMETRICO
42 AFFECTED SIB-PAIR (ASP)... Marker unlinked Marker linked IBD= 2 IBD= 1 IBD= 0 25% 50% 25% 40% 55% 5% TEST STATISTICO: ASP condividono più alleli al marker di quanto atteso il marker è in linkage con il locus del GDS
43 ATTENZIONE!!! Identici di fatto non è uguale a identici per discendenza IBD vs IBS allele 1 è IBD (e IBS) allele 1 è IBS (no IBD) allele 1 è IBS (IBD?) allele 1 è IBS (IBD?)
44 PSORS7 PSORS1 PSORS4 ATOD2 PSORS5 ATOD1 PSORS9 ATOD5 PSORS PSORS5 ATOD3 ATOD5 PSORS8 PSORS PSORS putativi ATOD ATOD putativi PSORS2 ATOD4
45 Mappatura fine della regione Si analizzano le regioni che hanno mostrato linkage (nella( scansione del genoma) Si incrementa il numero di marcatori della regione in studio Riduzione della regione da 10 a 5cM (=~ 5 Mbasi) Ulteriore evidenza di linkage
46 Association Studies Compare allele frequencies in a set of affected individuals to a set of controls The genetic Case-control association design is an important tool for mapping complex trait genes, but it may be influenced by population admixture / heterogeneity The control populations should be matched according to ethnicity as well as other potential confounding factors
47 Definizione del genotipo: la ricerca del gene Studi di associazione: affetti vs non affetti Family-based Caso-controllo
48 TDT Design A1 è trasmesso al malato ed è associato alla malattia
49 Associazione Genetica = Linkage Disequilibrium Più il gene malattia è vicino al marcatore,più a lungo l associazione allele marcatore/malattia persisterà Disease locus Locus 1 Locus 2 Differenti popolazioni possono avere differenti varianti al locus marcatore
50 Gli studi di associazione ricercano differenze tra un gruppo di soggetti affetti e un gruppo di soggetti sani Affetti Controlli Utilizzano il Linkage Disequilibrium per identificare segmenti ancestrali di cromosomi rimasti inalterati poichè non soggetti a ricombinazione
51 Il Linkage Disequilibrium LA MUTAZIONE AVVIENE SU UN CROMOSOMA ANCESTRALE ESPANSIONE DELLA POPOLAZIONE Utilizza le ricombinazioni che avvengono in un intera popolazione FRAMMENTAZIONE DEL CROMOSOMA ORIGINALE IN SEGUITO A RICOMBINA- ZIONE MUTAZIONE PRESENTE SUL CROMOSOMA FONDATORE REGIONE CRITICA
52 Il 65-85% del DNA è costituito da blocchi cromosomici inscindibili che contengono fino a SNPs Questi blocchi sono separati gli uni gli altri da hot spot di ricombinazione Ridotta variabilità (LD), maggiore facilità di mappare geni di suscettibilità Il numero di SNPs da caratterizzare diminuisce, poiché non sono indipendenti tra loro Hot Spot di ricombinazione Blocchi di LD Cromosoma
53 Ciascun blocco, in un individuo, può essere identificato da una specifica combinazione di alleli (SNPs). G G A C A AATATATCGCTATCCGTATACCTAATTGGGGGTGTGTGTACGTAATGCTAGCACGCGCGCCAGGATTAGCTGCCACA AATATATCGCTTTCCGTATACCTAATTTGGGGTGTGTGTACGTAATGCTAGCACGCGCGCCAGGATTAGCTGCCACA AATATATCGCTTTCCGTATACCTAATTTGGGGTGTGTGTACGTACTGCTAGCACGCGCGCCAGGATTAGCTGCCACA AATATATCGCTATCCGTATACCTAATTTGGGGTGTGTGTACGTACTGCTAGCACGCGCGCTAGGATTAGCTGCCACA AATATATCGCTATCCGTATACCTAATTGGGGGTGTGTGTACGTACTGCTAGCACGCGCGCTAGGATTAGCTGCCACA AATATATCGCTATCCGTATACCTAATTGGGGGTGTGTGTACGTACTGCTAGCACGCGCGCTAGGATTAGCTGCCACA A T T A A A G T T T G G A A C C C C C C C T T T A T T A A A G T T T G G A A C C C C C C C T T T
54 Una volta identificata una regione di suscettibilità, si selezionano i geni e le regioni regolative conservate e si analizzano solo gli SNPs in essi compresi Il numero degli SNPs da tipizzare si riduce ulteriormente GENE GENE GENE SNPs SNPs SNPs
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56 Associazione Genetica = Linkage Disequilibrium Più il gene malattia è vicino al marcatore,più a lungo l associazione allele marcatore/malattia persisterà Disease locus Locus 1 Locus 2 Differenti popolazioni possono avere differenti varianti al locus marcatore
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