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Rossana Bassi
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Organulo più voluminoso (5 µm) Rapporto /plasmatico:

organismo => divisione cellulare Forma: correlata alla

..) o irregolare Posizione: correlata alla funzione

..) Numero: 1 (maggior parte), 2 o più (sincizi, come

1 Organulo più voluminoso (5 µm) Rapporto /plasmatico: indice caratteristico delle cellule somatiche di un organismo => divisione cellulare Forma: correlata alla cellula; regolare (fusata, sferica, ellittica...) o irregolare Posizione: correlata alla funzione (centrale, polare...) Numero: 1 (maggior parte), 2 o più (sincizi, come osteoclasti e macrofagi) Involucro nucleare: sistema doppio di membrane separate, continuo al RER, senza ribosomi sulla faccia interna 1

Involucro nucleare Composizione di membrana: Proteine 70 Lipidi 23

proteine integrali specifiche per l attacco della lamina fibrosa

lamìne (Lamine A, B, C) a ridosso della membrana interna: è

depolimerizzazione A e C (oligo- e monomeri) Mitosi cdc2 (Chinasi

2 Involucro nucleare Composizione di membrana: Proteine 70 Lipidi 23 Membrana esterna => proteine RE simili Membrana interna => proteine integrali specifiche per l attacco della lamina fibrosa (nucleoscheletro) scheletro Lamina fibrosa o nucleare: reticolo di lamìne (Lamine A, B, C) a ridosso della membrana interna: è responsabile del mantenimento e della ricostituzione dell involucro nucleare. Vi aderisce la cromatina 7-9 nm nm 7-9 nm scheletro depolimerizzazione A e C (oligo- e monomeri) Mitosi cdc2 (Chinasi > fosforilazione) B legata Ripolimerizzazione e ri-formazione del nucleo Apoptosi Caspasi proteolisi Frammentazione del nucleo e morte cellulare 2

Poro nucleare Importine Esportine Funzioni di riconoscimento molecolare del traffico nucleo-citoplasma

dipendente Annulus o complesso del poro (125 nm) proteine globulari => porine (famiglia > 100) Complesso

) 2 anelli (nucleare e citoplasmatico) 1 anello intermedio (colonnare) > 8 subunità colonnari 8 subunità

nucleare) > riconoscimento molecolare NLS: Nuclear localization signal (sequenze 4-8 aa) NES: Nuclear

3 Poro nucleare Importine Esportine Funzioni di riconoscimento molecolare del traffico nucleo-citoplasma attraverso i pori nucleari (10-15 nm) Sistema di trasporto a due vie di macromolecole (5-60 kda), ATP dipendente Annulus o complesso del poro (125 nm) proteine globulari => porine (famiglia > 100) Complesso macromolecolare (120MDa!) 2 anelli (nucleare e citoplasmatico) 1 anello intermedio (colonnare) > 8 subunità colonnari 8 subunità radiali (annulari) > ancoraggio > Transporter componenti fibrillari (fibre citoplasmatiche e canestro nucleare) > riconoscimento molecolare NLS: Nuclear localization signal (sequenze 4-8 aa) NES: Nuclear exportation signal (sequenze 8-10 aa) Ran: GTPasi per energia trasporto attraverso il poro Importine α e β: Transfer citoplasma > nucleo Esportine: Transfer nucleo > citoplasma Traffic e Cromatina Citoplasma 3

Cromatina e DNA Cromatina Organizzata in strutture granulari, i nucleosomi (associazione con istoni) Architettura della cromatina:

Caratteristiche: Eucarioti Filamentoso Stabilità (correzione e riparazione) Quantità costante (2n > 4n > 2n, n) Procarioti

coli Cromosoma Cromatina: DNA e Istoni somi H2A, H2B, H3, H4 nucleo istonico del nucleosoma H1 blocco di chiusura del rocchetto

4 Cromatina e DNA Cromatina Organizzata in strutture granulari, i nucleosomi (associazione con istoni) Architettura della cromatina: DNA e Istoni L aumento di complessità del genoma si accompagna con un aumento del suo grado di organizzazione DNA DNA Caratteristiche: Eucarioti Filamentoso Stabilità (correzione e riparazione) Quantità costante (2n > 4n > 2n, n) Procarioti Genoforo, unico cromosoma circolare Cromatina geni (mammals) geni 180 cm/cell H. sapiens 1.4 mm/ E.coli Cromosoma Cromatina: DNA e Istoni somi H2A, H2B, H3, H4 nucleo istonico del nucleosoma H1 blocco di chiusura del rocchetto istonico Protamine: istoni leggeri dello spermatozoo. Vengono sostituiti dopo la fecondazione. Alcuni procarioti possiedono proteine simil-istoniche 60 bp 147 bp 200 bp 4

Addendum Struttura (nucleo interfasico) Proteine non-istoniche - proteine della matrice nucleare e proteine strutturali legate al DNA e agli istoni (scaffold) - proteine contrattili (actina, miosina,

5 Addendum Struttura (nucleo interfasico) Proteine non-istoniche - proteine della matrice nucleare e proteine strutturali legate al DNA e agli istoni (scaffold) - proteine contrattili (actina, miosina, α e β tubulina) - proteine regolatrici trascrizione genica: fattori di trascrizione, enhancers... (binding a specifiche sequenze DNA) - proteine di trascrizione e processamento RNA (RNA pol I, II, III; capping e poli-a, splicing) La componente fondamentale è la cromatina: Cromatina > DNA e proteine lo (1 o più) > RNA e proteine Matrice nucleare (nucleoplasma) ETEROCROMATINA 90%: condensata, zolle e addensamenti granulo-filamentosi >>> TRASCRIZIONALMENTE INATTIVA - proteine enzimatiche di duplicazione DNA (replisoma) - proteine di ricombinazione, riparazione, elicasi, topoisomerasi, ecc. EUCROMATINA 10%: dispersa, filamentosa, poco colorabile suddivisa in: >>> EUCROMATINA TRASCRIZIONALMENTE INATTIVA (maggior parte) >>> EUCROMATINA TRASCRIZIONALMENTE ATTIVA % di eucromatina ed eterocromatina varia a seconda dello stato funzionale della cellula (attività trascrizionale) Cromatina EU DNA a copia singola: geni strutturali (almeno 2 nella cellula 2n); codifica mrna DNA mediamente ripetitivo: centinaia di copie rrna e trna, geni strutturali di proteine istoniche, promoters e enhancers ET DNA altamente ripetitivo: centinaia di migliaia a milioni di copie sequenze brevi, non codificano RNA; denominato DNA satellite, localizzato in diverse zone dei cromosomi (eterocromatina costitutiva), centromero e telomeri... Ruolo? strutturale? eterocromatina facoltativa: può trasformarsi in eucromatina ed essere trascritta eterocromatina costitutiva: permanentemente inattiva Centromero: zona di unione dei cromosomi omologhi Telomeri: sequenze ripetute alle estremità del cromosoma (contatore mitotico > cloning) 5

Genoma silente: Metilazione del DNA (5-metil Citosina) Le regioni di eterocromatina (hanno DNA iper-metilato ed istoni deacetilati)

degli istoni Genoma silente e genoma attivo: istoni e spiralizzazione Ubiquitinazione: silenzia?

6 Genoma silente: Metilazione del DNA (5-metil Citosina) Le regioni di eterocromatina (hanno DNA iper-metilato ed istoni deacetilati) Le regioni di eucromatina (hanno DNA de-metilato ed istoni iperacetilati) Genoma silente e genoma attivo: istoni e spiralizzazione del DNA Condensazione silenzia! cromosoma metafasico: nessuna trascrizione Genoma silente e genoma attivo: istoni e spiralizzazione Modificazioni post-traduzionali degli istoni Genoma silente e genoma attivo: istoni e spiralizzazione Ubiquitinazione: silenzia? Modificazioni posttraduzionali degli istoni IPERFOSFORILAZIONE dell Istone H1 durante la superspiralizzazione della cromatina a formare i cromosomi Fosforilazione: silenzia! ACETILAZIONE AMINOTERMINALE: ATTIVA LA CROMATINA Acetilazione: attiva! metilazione acetilazione 6

7 GBE, July 2014 Diff DNA methyl region Copy number variation Lamarck return? Ecological and Evolutionary Medicine 7

Sede di trascrizione e splicing dei rrna ed assemblaggio

Incrementa in volume in funzione dell attività di sintesi

nucleolo) - 80 proteine - RNA pol I e III (45S e 5S) -

Componente granulare (pars granularis) => Assemblaggio

DNA e proteine Cromatina associata al nucleolo o

Organizzatore del nucleolo No ha membrana!

organizzatori del nucleolo, una porzione proveniente da

profase e si si ricostituisce alla fine della telofase lo

Reticolo fibronucleare Residui nucleolari plasma La

impalcatura per strutturare e per organizzare la

trascrizione e replicazione 40 Le proteine più

8 Sede di trascrizione e splicing dei rrna ed assemblaggio ribosomi Corpuscolo sferico il cui numero varia da 1 a 6 Incrementa in volume in funzione dell attività di sintesi proteica lo Costituito da: - DNA (organizzatori del nucleolo) - 80 proteine - RNA pol I e III (45S e 5S) - nucleolina (trasporto < >) - snrnp U3 Suddiviso in: Componente granulare (pars granularis) => Assemblaggio ribosomi Componente fibrillare (pars fibrillaris) => RNA DNA e proteine Cromatina associata al nucleolo o perinucleolare Cromatina associata al nucleolo lo Organizzatore del nucleolo No ha membrana! Nella componente fibrillare è presente la componente degli organizzatori del nucleolo, una porzione proveniente da diversi cromosomi (10 nell uomo) che scompare nella profase e si si ricostituisce alla fine della telofase lo Addendum Matrice nucleare: 3 componenti Lamina nucleare Reticolo fibronucleare Residui nucleolari plasma La matrice nucleare è un network proteico che fornisce una impalcatura per strutturare e per organizzare la cromatina, facilitandone nel contempo le attività di trascrizione e replicazione 40 Le proteine più rappresentate sono le nucleoplasmine e le lamine La lamina fibrosa contiene anche vimentina ed actina Il DNA si associa mediante specifiche sequenze alla matrice 60 8

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