Fucsina acida 0,1%, Biebrich Scarlet 0,9% e acido acetico 1% in acqua deionizzata contenente 1% Triton X-100

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1 Artisan Masson s Trichrome Stain Kit Codice AR173 Uso previsto Per uso diagnostico in vitro. Il Masson s Trichrome Stain Kit è destinato all uso in laboratorio per l identificazione, al microscopio ottico, del tessuto connettivo e muscolare nei campioni tissutali. 1-3 Si possono utilizzare campioni trattati con le procedure standard (inclusi in paraffina). Il fissativo suggerito è la formalina tamponata neutra. L'interpretazione clinica della colorazione o della sua assenza deve avvalersi di studi morfologici eseguiti con gli opportuni controlli, deve tenere conto dell'anamnesi del paziente e basarsi su ulteriori esami diagnostici eseguiti da un patologo qualificato. Tutti i reagenti del Masson s Trichrome Stain Kit sono stati ottimizzati per l uso con il sistema di colorazione Artisan Staining System Dako e non richiedono miscelazione né diluizione. Cenni introduttivi Il Masson s Trichrome Stain Kit è utilizzato per l identificazione di fibre muscolari, fibre di collagene, fibrina ed eritrociti nelle sezioni di tessuto. 1-3 La miscela tricromica di Masson è spesso utilizzata per evidenziare un aumento del deposito di collagene associato alla sostituzione di tessuto funzionale con tessuto cicatriziale. Questa colorazione è utile nella diagnosi della sclerosi epatica, in cui il collagene ispessito sostituisce il tessuto normale causando una disfunzione del fegato. La miscela tricromica di Masson, inoltre, risulta migliore per la rivelazione del tessuto muscolare rispetto alla colorazione con ematossilina ed eosina. Principio della procedura Le fibre di collagene e la fibrina non assumono nessuna colorazione con la procedura a base di ematossilina ed eosina. Il Masson s Trichrome Stain Kit è basato sulla procedura di Masson originale. 1-3 Il tessuto connettivo è simile a una rete proteica tridimensionale che può essere formata da diverse proteine, le quali a loro volta le conferiscono caratteristiche fisiche distinte. La struttura e la densità della rete proteica possono essere in rapporto diretto con le reazioni di colorazione dei componenti tissutali. 2 Il Masson s Trichrome Stain Kit è ottimizzato per l uso con il sistema Artisan Staining System. Tutti i passaggi di colorazione devono essere seguiti dal lavaggio del campione. Dopo la colorazione, i vetrini asciugati all'aria sono rimossi dallo strumento, diafanizzati con xilene o un suo sostituto e montati con il mezzo di montaggio appropriato. L interpretazione dei risultati avviene per mezzo di un microscopio ottico standard. Tessuto di controllo: utero, intestino tenue, fegato, appendice o tuba di Falloppio Reagenti forniti Il Masson s Trichrome Stain Kit è composto da otto confezioni dispenser pronte all uso, ognuna delle quali contiene: Soluzione di Bouin Acido picrico 0,9%, formaldeide 23,8% e acido acetico 4,8% in acqua deionizzata Ematossilina di Weigert A Ematossilina 1%, alcol 95% Ematossilina di Weigert B Cloruro di ferro 1,16% e acido cloridrico 1% in acqua deionizzata Fucsina acida Biebrich Scarlet Fucsina acida 0,1%, Biebrich Scarlet 0,9% e acido acetico 1% in acqua deionizzata contenente 1% Triton X-100 Acido fosfotungstico fosfomolibdico- 2 confezioni Acido fosfotungstico 2,5% e acido fosfomolibdico 2,5% in acqua deionizzata Blu anilina Blu anilina 2,5% e acido acetico 2% in acqua deionizzata contenente 1% Triton X-100 Acido acetico 3% Acido acetico in acqua deionizzata ( ) P04012IT_01/AR173/ p. 1/5

2 Dako fornisce questi reagenti in una formulazione ottimale per l'uso secondo le istruzioni fornite, relative alla colorazione su sezioni di tessuto preparate. Qualsiasi variazione apportata alle procedure di analisi consigliate rischia di invalidare i risultati. Materiali necessari ma non forniti 1. Vetrini per microscopio 2. Artisan Staining System 3. Wash Solution (codice AR102) Precauzioni 1. Per uso professionale. 2. Se la soluzione di Bouin si secca, un urto o un aumento della temperatura potrebbero dare origine a una decomposizione esplosiva. 3. Evitare la contaminazione batterica dei reagenti, altrimenti potrebbe verificarsi un incremento della colorazione aspecifica. 4. Una volta completato il numero previsto di analisi, le confezioni dei reagenti potrebbero contenere della soluzione residua. 5. Tempi o temperature di incubazione diversi da quelli specificati possono generare risultati erronei. L'utente deve convalidare qualsiasi modifica apportata alla procedura rilasciata dal produttore. 6. Le confezioni dei reagenti, non utilizzate sullo strumento, devono essere conservate in posizione verticale. 7. Conservare le confezioni dei reagenti lontano dalla luce solare diretta e da fonti di calore. 8. In generale, l'utilizzo del prodotto da parte di soggetti di età inferiore a 18 anni non è consentito. Gli utenti devono essere accuratamente informati in merito alle corrette procedure operative, alle proprietà pericolose del prodotto e alle disposizioni di sicurezza necessarie. Per ulteriori informazioni, fare riferimento alla Scheda dati di sicurezza (SDS). 9. Indossare indumenti di protezione personale adeguati, per evitare il contatto con gli occhi e la pelle. 10. Smaltire la soluzione inutilizzata nel rispetto delle disposizioni locali, regionali e nazionali in materia. 11. Su richiesta è disponibile una scheda di sicurezza per utenti professionisti. Pericolo Bouin s Solution: 10-30% Formaldehyde, 1-5% Acetic acid, 0.1-1% 2,4,6-Trinitrophenol H302 + H312 + Nocivo se ingerito, a contatto con la pelle o se inalato. H332 H314 Provoca gravi ustioni cutanee e gravi lesioni oculari. H317 Può provocare una reazione allergica cutanea. H350 Può provocare il cancro. H341 Sospettato di provocare alterazioni genetiche. H335 Può irritare le vie respiratorie. P201 Procurarsi istruzioni specifiche prima dell uso. P202 Non manipolare prima di avere letto e compreso tutte le avvertenze. P281 Utilizzare il dispositivo di protezione individuale richiesto. P271 Utilizzare soltanto all aperto o in luogo ben ventilato. P261 Evitare di respirare il vapore. P270 Non mangiare, né bere, né fumare durante l uso. P272 Gli indumenti da lavoro contaminati non devono essere portati fuori dal luogo di lavoro. P308 + P313 IN CASO di esposizione o di possibile esposizione: Richiedere assistenza medica. P304 + P340 + IN CASO DI INALAZIONE: Trasportare l'infortunato all aria aperta e mantenerlo a riposo in posizione che favorisca la respirazione. Contattare immediatamente un CENTRO ANTIVELENI o un medico. P P330 + P331 IN CASO DI INGESTIONE: Contattare immediatamente un CENTRO ANTIVELENI o un medico. Sciacquare la bocca. NON provocare il vomito. P303 + P361 + P353 + P363 + IN CASO DI CONTATTO CON LA PELLE (o con i capelli): Togliere immediatamente tutti gli indumenti contaminati. Sciacquare la pelle/fare una doccia. Lavare gli indumenti contaminati prima di indossarli nuovamente. Contattare immediatamente un CENTRO ANTIVELENI o un medico. P302 + P352 + P312 IN CASO DI CONTATTO CON LA PELLE: Lavare abbondantemente con acqua e sapone. Contattare un CENTRO ANTIVELENI o un medico in caso di malessere. P333 + P313 + In caso di irritazione o eruzione della pelle: consultare un medico. IN CASO DI CONTATTO CON GLI OCCHI: Sciacquare accuratamente per parecchi minuti. Togliere le eventuali lenti a Contattare immediatamente un CENTRO ANTIVELENI o un medico. ( ) P04012IT_01/AR173/ p. 2/5

3 Pericolo Weigert s Hematoxylin A: % Ethanol, 1-5% Methanol H225 Liquido e vapori facilmente infiammabili. H360 Può nuocere alla fertilità o al feto. H371 Può provocare danni agli organi. H335 Può irritare le vie respiratorie. H336 Può provocare sonnolenza o vertigini. H373 Può provocare danni agli organi in caso di esposizione prolungata o ripetuta. P201 Procurarsi istruzioni specifiche prima dell uso. P202 Non manipolare prima di avere letto e compreso tutte le avvertenze. P281 Utilizzare il dispositivo di protezione individuale richiesto. P210 Tenere lontano da fonti di calore, superfici calde, scintille, fiamme libere o altre fonti di accensione. Non fumare. P241 Utilizzare impianti elettrici, di ventilazione, d illuminazione e per la movimentazione dei materiali a prova di esplosione. P242 Utilizzare solo utensili antiscintillamento. P243 Prendere precauzioni contro le scariche elettrostatiche. P233 Tenere il recipiente ben chiuso. P271 Utilizzare soltanto all aperto o in luogo ben ventilato. P260 Non respirare il vapore. P270 Non mangiare, né bere, né fumare durante l uso. P314 In caso di malessere, consultare un medico. P309 + P311 IN CASO di esposizione o di malessere, contattare un CENTRO ANTIVELENI o un medico. P304 + P340 + P312 IN CASO DI INALAZIONE: Trasportare l'infortunato all aria aperta e mantenerlo a riposo in posizione che favorisca la respirazione. Contattare un CENTRO ANTIVELENI o un medico in caso di malessere. P303 + P361 + P353 IN CASO DI CONTATTO CON LA PELLE (o con i capelli): togliere immediatamente tutti gli indumenti contaminati. Sciacquare la pelle/fare una doccia. P403 Conservare in luogo ben ventilato. P235 Conservare in luogo fresco. Weigert s Hematoxylin B: 1-3% Iron chloride (FeCl3), hexahydrate, 0.1-1% Hydrochloric acid H315 Provoca irritazione cutanea. P302 + P352 + P P363 IN CASO DI CONTATTO CON LA PELLE: Lavare abbondantemente con acqua e sapone. Togliere gli indumenti contaminati. Lavare gli indumenti contaminati prima di indossarli nuovamente. P332 + P313 In caso di irritazione della pelle: consultare un medico. Biebrich Scarlet Acid Fuchsin: 0.1-1% Poly(oxy-1,2-ethanediyl),.alpha.-[4-(1,1,3,3-tetramethylbutyl)phenyl]-.omega.-hydroxy- ( ) P04012IT_01/AR173/ p. 3/5

4 Pericolo Phosphotungstic Phosphomolybdic Acid: 1-5% Phosphotungstic phosphomolybdic acid H314 Provoca gravi ustioni cutanee e gravi lesioni oculari. P304 + P340 + IN CASO DI INALAZIONE: Trasportare l'infortunato all aria aperta e mantenerlo a riposo in posizione che favorisca la respirazione. Contattare immediatamente un CENTRO ANTIVELENI o un medico. P IN CASO DI INGESTIONE: Contattare immediatamente un CENTRO ANTIVELENI o un medico. Sciacquare la bocca. P330 + P331 NON provocare il vomito. P303 + P361 + IN CASO DI CONTATTO CON LA PELLE (o con i capelli): Togliere immediatamente tutti gli indumenti contaminati. P353 + P363 + Sciacquare la pelle/fare una doccia. Lavare gli indumenti contaminati prima di indossarli nuovamente. Contattare immediatamente un CENTRO ANTIVELENI o un medico. + IN CASO DI CONTATTO CON GLI OCCHI: Sciacquare accuratamente per parecchi minuti. Togliere le eventuali lenti a Contattare immediatamente un CENTRO ANTIVELENI o un medico. Aniline Blue: 1-5% Acetic acid, 0.1-1% Polyoxyethylene octyl phenyl ether Conservazione Ciascun componente deve essere conservato alla temperatura indicata sull'etichetta. Non utilizzare dopo la data di scadenza. Se i reagenti sono conservati in condizioni diverse da quelle specificate, le loro condizioni dovranno essere verificate dall'utente. Non sono stati osservati segni evidenti che suggeriscano l'instabilità di questo prodotto, pertanto, per tale verifica, analizzare come controllo un tessuto adeguato. Qualora si ottenga una colorazione imprevista che non sia giustificata da un cambiamento delle procedure di laboratorio o da un'errata conservazione, contattare l'assistenza tecnica della Dako. Procedura per lo strumento/ procedura di colorazione Commenti preliminari Per istruzioni dettagliate consultare la Guida dell'utente Artisan. Priming delle confezioni dei reagenti Prima di iniziare la colorazione, si deve eseguire il priming delle confezioni dei reagenti e il controllo di eventuali perdite. Quando si utilizza un nuovo kit, e prima di eseguire la prima colorazione della giornata, controllare il priming di ogni reagente. 1. Su una salviettina di carta rimuovere il tappo di spedizione rosso o nero (se presente) dal sistema di erogazione della confezione del reagente, spingendo delicatamente il tappo verso il basso. 2. Per eseguire il priming di una confezione di reagente, quando viene ricevuta, tenere la confezione con il dispenser rivolto verso il basso e picchiettare delicatamente sul lato della confezione 2-3 volte, per far fuoriuscire eventuali bolle d'aria che possono essere rimaste intrappolate nel dispenser. 3. Premere e rilasciare completamente il pistone per 3-4 volte in successione rapida, assorbendo il liquido espulso con attenzione su una salviettina di carta, una garza assorbente o un materiale simile, fino a ottenere un flusso costante. 4. Evitare di far fuoriuscire una quantità eccessiva di reagente durante il priming, poiché il reagente potrebbe non essere più sufficiente per il numero di test stabilito. 5. Prima di ogni utilizzo, eseguire il priming 1-2 volte, controllando sempre di ottenere un flusso costante. 6. Tenendo la confezione del reagente con una mano, far scivolare la guida di montaggio, sul retro della confezione del reagente, nelle scanalature del carosello del reagente, in modo da posizionare completamente la confezione. ( ) P04012IT_01/AR173/ p. 4/5

5 Procedura Consultare la sezione Rapporti delle procedure nel software Artisan Host per la procedura dettagliata consigliata. Una volta completata la colorazione, i vetrini saranno asciutti. Immergere i vetrini in xylene o in un suo sostituto ed eseguire il montaggio permanente. Interpretazione dei risultati della colorazione Fibre muscolari:...rosso Fibrina:...rosa Collagene:...blu Nuclei:...blu o nero Eritrociti:...rosso Caratteristiche prestazionali Riproducibilità La riproducibilità nella serie, ottenuta colorando 12 vetrini dello stesso tessuto di controllo su uno strumento, è risultata del 100%. La riproducibilità tra serie, ottenuta colorando 12 vetrini dello stesso tessuto di controllo su tre diversi strumenti, è risultata del 100%. Risoluzione dei problemi Fare riferimento alla sezione Manutenzione e risoluzione dei problemi della Guida all utente Artisan o contattare l Assistenza tecnica. Bibliografia 1. Bancroft JD, Stevens A. Theory and Practice of Histological Techniques, 4th edition, Churchill Livingstone Inc., New York, New York, Luna LG. Manual of Histologic Staining Methods of the AFIP, 3rd edition. McGraw-Hill Book Company, New York, New York, Luna LG. Histopathological Methods and Color Atlas of Special Stains and Tissue Artifacts, 1st edition, American Histolabs, Inc., Gaithersburg, MD, 1992 Edizione 04/15 ( ) P04012IT_01/AR173/ p. 5/5