RIDASCREEN Aflatoxin M 1 Art. Nr. R1121

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1 RIDASCREEN Aflatoxin M 1 Art. Nr. R1121 Test immunoenzimatico per il dosaggio quantitativo di aflatossina M 1 Test in vitro Conservare a 2-8 C

2 Prodotto da: R-Biopharm AG An der neuen Bergstraße 17 D Darmstadt Per informazioni Telefono: Centralino ( ) Telefax / Ordini ( ) orders@r-biopharm.de Marketing ( ) info@r-biopharm.de Distribuito da: R-Biopharm Italia Srl Via Morandi Melegnano MI Telefono info@r-biopharm.it - RIDA e RIDASCREEN sono marchi registrati della R-BIOPHARM AG Produttore: R-BIOPHARM AG, Darmstadt, Germania R-BIOPHARM AG è certificata ISO RIDASCREEN Aflatoxin M

3 Informazioni generali RIDASCREEN Aflatoxin M 1 RIDASCREEN Aflatoxin M 1 (Art.No. R1121) è un immunodosaggio enzimatico competitivo per l'analisi quantitativa dell aflatossina M 1 nel latte e nel latte in polvere. Tutti i reagenti richiesti per il dosaggio - inclusi gli standard - sono contenuti nel kit. Il kit è sufficiente per 96 determinazioni (inclusi gli standard). Per la quantificazione è richiesto un lettore colorimetrico per micropiastre. Preparazione campioni: Tempo richiesto: Limite di rilevabilità: (corrispondente alla sostanza standard) latte: scrematura latte in polvere: ricostituzione e scrematura preparazione dei campioni (10 campioni) latte... ca. 20 min latte in polvere... ca. 1 h esecuzione del test (incubazione)... ca.1 h e 15 min latte:... 5 ng/l (ppt) latte in polvere (relativamente al latte ricostituito)... 5 ng/l (ppt) latte in polvere relativamente al peso in g): ng/l (ppt) Valori di recupero: in campioni arricchiti (spiked) (corrispondente alla sostanza latte:... ca. 100 % standard) latte in polvere:... ca. 116 % Specificità: Aflatossina M % Aflatossina M 2... < 10 % La specificità del kit RIDASCREEN Aflatoxin M 1 è stata stabilita analizzando la cross-reattività verso le micotossine corrispondenti in un sistema tampone. Nei campioni, la specificità può risultare differente rispetto a quanto determinato in un sistema tampone a causa dell effetto matrice. Prima di analizzare le sostanze cross-reattive, l utilizzatore deve determinate il limite di rilevabilità ed i valori di recupero della sostanza nella rispettiva matrice. Il test non è in grado di differenziare tra analita e sostanze cross-reattive. RIDASCREEN Aflatoxin M

4 Al fine di aumentare la qualità delle prestazioni durante l'esecuzione di procedure ELISA, si prega di far riferimento al nostro Good ELISA Practice (GEP) Manual, nella versione aggiornata. Qui si elencano gli standard minimi riguardanti le condizioni di lavoro quando si utilizzano i kit di R-Biopharm AG e si eseguono test ELISA. Il manuale può essere visionato, stampato e scaricato direttamente dal nostro sito Prodotti correlati: RIDASCREEN FAST Aflatoxin M1(Art. No. R5812) TRILOGY Liquid Standard M1 (TSL-143) TRILOGY Dried Standard M1 (TS-130) 1. Scopo RIDASCREEN Aflatoxin M 1 è un immunodosaggio enzimatico competitivo per l'analisi quantitativa dell Aflatossina M 1 in campioni di latte e latte in polvere. 2. Generale Le aflatossine sono metaboliti cancerogeni e altamente tossici prodotti dalle muffe Aspergillus flavus e Aspergillus parasiticus. L'aflatossina M 1 è prodotta come metabolita dell'aflatossina B 1. E secreta nel latte di animali alimentati con mangime contenente aflatossina B 1. Poiché l'aflatossina M 1 è relativamente resistente ai processi di pastorizzazione, è necessario un controllo di routine non solo per le materie prime ma anche per i prodotti finiti. Dal primo gennaio 1999 nella EU sono stati fissati i limiti per le aflatossine. Per l aflatossina M 1 il limite è 0,05 µg/l (50 ppt). 3. Principio del test Il test si basa su una reazione antigene-anticorpo. I pozzetti della micropiastra sono sensibilizzati con anticorpi di cattura diretti contro gli anticorpi antiaflatossina M 1. Gli anticorpi anti-aflatossina M 1 sono aggiunti e legati dagli anticorpi di cattura immobilizzati. Dopo un ciclo di incubazione e di lavaggio, si aggiungono gli standard oppure la soluzione del campione. Dopo un ulteriore incubazione ed una successiva fase di lavaggio, si aggiunge l aflatossina M1 coniugata all enzima. L aflatossina M 1 libera e quella coniugata all enzima competono per il legame all anticorpo (test immunoenzimatico competitivo). Tutto il coniugato non legato è quindi eliminato con un lavaggio. Il substrato/cromogeno è aggiunto nei pozzetti ed incubato. Il coniugato legato trasforma il cromogeno in un prodotto blu. 4 RIDASCREEN Aflatoxin M

5 L aggiunta della soluzione di arresto provoca un viraggio del colore da blu a giallo. La lettura è eseguita con un fotometro a 450 nm e l assorbanza è inversamente proporzionale alla concentrazione di aflatossina M 1 nel campione. 4. Reagenti forniti Ogni kit contiene materiale sufficiente per 96 analisi (incluse le analisi degli standard). Ogni kit contiene: Componente Colore del tappo Formato Quantità Micropiastra K - Pronto all uso 96 pozzetti Buffer bianco Pronto all uso 40 ml Standard 1 bianco Pronto all uso 0 ng/l 1.3 ml Standard 2 bianco Pronto all uso 5 ng/l 1.3 ml Standard 3 bianco Pronto all uso 10 ng/l 1.3 ml Standard 4 bianco Pronto all uso 20 ng/l 1.3 ml Standard 5 bianco Pronto all uso 40 ng/l 1.3 ml Standard 6 bianco Pronto all uso 80 ng/l 1.3 ml Wash buffer salt Sali da sciogliere Tween Conjugate Rosso Pronto all uso 12 ml Antibody Nero Pronto all uso 12 ml Substrate/Chromogen Red Chromogen Pro Marrone Pronto all uso 10 ml Stop solution Giallo Pronto all uso 14 ml 5. Materiale richiesto ma non fornito 5.1. Attrezzatura: Lettore colorimetrico per micorpiastre (450 nm) Centrifuga mixer pipette pasteur pipette graduate pipette variabili da 20 µl µl e da µl bagnetto d acqua (per latte in polvere) RIDASCREEN Aflatoxin M

6 6. Avvertenze e precauzioni per gli utilizzatori Questo test dovrebbe essere eseguito solo da personale di laboratorio qualificato. Le istruzioni per l'uso devono essere seguite scrupolosamente. Le soluzioni standard contengono Aflatossina M 1, prestare particolare cura nel maneggiarle. Evitare il contatto del reagente con la cute (utilizzare i guanti). Decontaminare la vetreria e le soluzioni contenenti le tossine con una soluzione di ipoclorito di sodio (candeggina) (10 % (v/v) - (portare il ph a 7 con acido cloridrico) per una notte. Il kit può contenere ulteriori sostanze pericolose. Per maggiori dettagli, si prega di fari riferimento alla scheda si sicurezza (MSDS) disponibile online al sito 7. Conservazione Conservare il kit a 2-8 C (35-46 F). Non congelare nessun componente del kit. I pozzetti non utilizzati vanno riposti insieme all essiccante nella loro confezione originale, che deve essere ben richiusa e conservata a 2-8 C (35-46 F). Le Aflatossine sono fotosensibili: evitarne l esposizione alla luce diretta. La soluzione substrato/cromogeno è fotosensibile: evitarne l esposizione alla luce diretta. La garanzia di qualità decade dopo la data di scadenza del kit indicata sulla confezione. Non scambiare singoli reagenti appartenenti a kit con numeri di lotti diversi. 8. Indicazioni di instabilità e deterioramento dei reagenti qualsiasi colorazione bluastra della soluzione substrato/cromogeno, normalmente rossa, prima dell esecuzione del test valori inferiori a 0.6 unità di assorbanza (A 450 nm < 0.6) per lo standard zero 6 RIDASCREEN Aflatoxin M

7 9. Preparazione dei campioni I campioni devono essere conservati in luogo fresco, al riparo dalla luce. 9.1.Latte centrifugare i campioni di latte per la scrematura: 10 minuti / 3500 g / 10 C (50 F) (se non si dispone di una centrifuga refrigerata, raffreddare il campione a 10 C (50 F) prima della centrifugazione) dopo la centrifugazione, rimuovere completamente lo strato grasso superiore aspirandolo con una pipetta pasteur usare il latte scremato (=surnatante sgrassato) direttamente per l analisi (100 µl per pozzetto) 9.2. Latte in polvere pesare 10 g di latte in polvere e portare a 100 ml con acqua distillata omogenizzare per agitazione riscaldare la soluzione di latte ottenuta a 50 C (122 F) in un bagno d acqua per 30 minuti procedere come descritto per il latte al paragrafo 9.1. Nota: Se è necessaria un ulteriore diluizione, utilizzare il tampone di diluizione (vedi paragrafo 4). Su richiesta è disponibile una nota applicativa per campioni di formaggio e burro. RIDASCREEN Aflatoxin M

8 10. Esecuzione del test Indicazioni preliminari Portare tutti i reagenti a temperature ambiente (20-25 C /68-77 F) prima dell uso. Come soluzione di lavaggio è necessario un tampone PBS Tween. Si raccomanda di usare il sale di lavaggio contenuto nella busta inclusa nel kit (vedi paragrafo 4), sciogliendone il contenuto in un litro di acqua distillata. Il tampone di lavaggio pronto all uso si conserva per circa 4-6 settimane a una temperatura di 2-8 C (36-46 F) In alternativa: Sciogliere il contenuto della busta in soli 100 ml di acqua distillata per ottenere un tampone di lavaggio concentrato 10 volte. Utilizzare 1 parte di questa soluzione concentrata e mescolarla con 9 parti di acqua distillata per ottenere una soluzione di lavaggio pronta all uso. Questa soluzione scade dopo circa 8-12 settimane se conservata a temperatura ambiente (20-25 C/68-77 F) Procedura per l esecuzione del test Seguire attentamente la procedura di lavaggio raccomandata. Evitare l asciugamento dei pozzetti tra i vari passaggi del test. 1. Inserire un numero sufficiente di pozzetti nel supporto per tutti gli standard e campioni da eseguire in duplicato. Registrare le posizioni assegnate agli standard ed ai campioni. 2. Aggiungere 100 µl della soluzione di anticorpo diluita in ciascun pozzetto ed incubare per 15 minuti a temperatura ambiente (20-25 C/ F). 3. Svuotare il liquido dai pozzetti e rovesciare per tre volte di seguito la piastra su un foglio di carta assorbente picchiettandola in modo da eliminare tutto il liquido dai pozzetti. Riempire i pozzetti con 250 µl di tampone di lavaggio (vedi par ) ed eliminare nuovamente il liquido come descritto sopra. Ripetere la procedura di lavaggio per due volte. 4. In ogni pozzetto aggiungere 100 µl delle soluzioni standard oppure del campione preparato in pozzetti separati in duplicato. Miscelare delicatamente facendo oscillare manualmente la piastra ed incubare per 30 minuti a temperatura ambiente (20-25 C / F) al buio. 5. Svuotare il liquido dai pozzetti e rovesciare per tre volte di seguito la piastra su un foglio di carta assorbente picchiettandola in modo da eliminare tutto il liquido dai pozzetti. Riempire i pozzetti con 250 µl di tampone di lavaggio 8 RIDASCREEN Aflatoxin M

9 (vedi par ) ed eliminare nuovamente il liquido come descritto sopra. Ripetere la procedura di lavaggio per due volte. 6. Aggiungere ad ogni pozzetto 100 µl dell enzima coniugato diluito. Miscelare delicatamente facendo oscillare manualmente la piastra e incubare per 15 minuti a temperatura ambiente (20-25 C / F) al buio. 7. Svuotare il liquido dai pozzetti e rovesciare per tre volte di seguito la piastra su un foglio di carta assorbente picchiettandola in modo da eliminare tutto il liquido dai pozzetti. Riempire i pozzetti con 250 µl di tampone di lavaggio (vedi par ) ed eliminare nuovamente il liquido come descritto sopra. Ripetere la procedura di lavaggio per due volte 8. Aggiungere ad ogni pozzetto 100 µl di substrato/cromogeno (tappo marrone). Miscelare delicatamente facendo oscillare manualmente la piastra e incubare per 15 minuti a temperatura ambiente (20-25 C / F) al buio. 9. Aggiungere 100 µl di soluzione di stop (flacone con tappo giallo) in ogni pozzetto. Miscelare delicatamente facendo oscillare manualmente la piastra e leggere le assorbanze a 450 nm dopo azzeramento contro aria. Leggere entro 15 minuti dall aggiunta della soluzione di stop. RIDASCREEN Aflatoxin M

10 11. Risultati Per la valutazione delle analisi eseguite con i kit RIDASCREEN ELISA è possibile utilizzare un apposito software denominato RIDA SOFT Win/ RIDA SOFT Win.net (cod. Z9996). Il profilo della curva standard è riportata nel Certificato di Assicurazione di Qualità allegato. Nota per il calcolo eseguito senza l utilizzo dell apposito software: Assorbanza dello standard (o campione) X100 = % assorbimento Assorbanza standard zero Lo standard zero è così uguale al 100% e i valori di assorbanza sono calcolati in percentuale. Inserire i valori calcolati per gli standard in un sistema di coordinate su una scala semilogaritmica contro le concentrazioni di aflatossina M 1 espresse in [ng/l]. Per ottenere una concentrazione di aflatossina M 1 in ng/l effettivamente contenuta nel campione, la concentrazione calcolata dalla curva standard deve essere moltiplicata per il fattore di diluizione corrispondente. Operando secondo le procedure descritte, il fattore di diluizione da applicare è il seguente: latte... 1 latte in polvere (relativamente al latte ricostituito)... 1 latte in polvere (relativamente al peso in g) R-Biopharm non fornisce alcuna garanzia, esplicita o implicita, oltre a quella relativa alla qualità standard dei materiali di cui sono costituiti i suoi prodotti. Nel caso tali materiali risultassero difettosi, R-Biopharm si impegna a fornire prodotti sostitutivi. Non esiste garanzia di commerciabilità o di idoneità del prodotto per uno scopo particolare. R-Biopharm non è da ritenersi responsabile per danni, ivi compresi danni speciali o indiretti, o spese derivanti direttamente o indirettamente dall utilizzo del prodotto. 10 RIDASCREEN Aflatoxin M