GICA (CA 19-9) FASE POST-ANALITICA: I dati ottenuti vengono validati tecnicamente poi clinicamente e quindi firmati digitalmente.

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1 MODALITA' DI RICHIESTA: Pazienti interni: tramite modulo interno prestampato. Pazienti esterni: tramite richiesta del medico curante. GICA () PREPARAZIONE DEL PAZIENTE ALL'ESAME: Il paziente deve trovarsi in condizioni basali dopo un digiuno di circa 10 ore. MODALITA' DI RACCOLTA DEL CAMPIONE: - Prelievo venoso. - Utilizzo del sistema sottovuoto o di siringa monouso o butterfly. - Utilizzo provetta con gel separatore (tappo giallo). MODALITA DI TRASPORTO DEL CAMPIONE: Pazienti interni: da ogni stanza i campioni sono portati da un infermiere in un contenitore adeguato in laboratorio. Pazienti esterni: dalla sala prelievi (attigua al laboratorio) i campioni, attraverso l apposita finestra, sono consegnati al laboratorio. Vedi procedura. MODALITA' DI CONSERVAZIONE DEL CAMPIONE: La provetta madre dopo essere stata processata è conservata tra 2 e 8 C per 6 giorni Se il campione non può essere processato subito, il surnatante è raccolto mediante pipetta monouso in una provetta di plastica tappata, su cui è applicata l etichetta con codice a barre, e conservata secondo le modalità previste dalla metodica descritta nella scheda tecnica. Evitare congelamenti ripetuti. FASE PRE-ANALITICA: Sulla provetta madre è posta un etichetta con codice a barre che permette la trasmissione bidirezionale dei dati (esami richiesti e relativi risultati) tra il PC dello strumento e il PC gestionale. La provetta madre è centrifugata a 3750 rpm per 8 minuti. FASE ANALITICA: La provetta madre è posizionata sul rack porta campioni dello strumento ROCHE COBAS 6000 dalla preanalitica COBAS p 312, che provvede alla registrazione del check-in e quindi processata secondo le modalità analitiche previste. FASE POST-ANALITICA: I dati ottenuti vengono validati tecnicamente poi clinicamente e quindi firmati digitalmente. CRITERI DI VALIDAZIONE DEL DATO ANALITICO: Analisi dei controlli qualità interni secondo le regole di Westgard e controlli qualità esterni (VEQ). VALORI PANICO: Non applicabile. CARATTERISTICHE E DESCRIZIONE DEL METODO: Il metodo della determinazione quantitativa di è un immunodosaggio sandwich in chemiluminescenza. Per la sensibilizzazione della fase solida (particelle magnetiche) e per il coniugato è stato utilizzato lo stesso anticorpo monoclonale anti altamente specifico. Durante una prima incubazione, il presente nei calibratori, nei campioni o nei controlli si lega all'anticorpo monoclonale di fase solida e, successivamente, dopo una fase di lavaggio, durante una seconda incubazione l'anticorpo coniugato reagisce con il già legato alla fase solida. Dopo l incubazione, il materiale non legato viene rimosso mediante un ciclo di lavaggio. In seguito, vengono aggiunti i reagenti starter che inducono una reazione di chemiluminescenza. Il segnale luminoso, e quindi la quantità di coniugato anticorpoisoluminolo, è misurato da un fotomoltiplicatore in unità di luce relativa (RLU, relative light units) ed è indicativo della concentrazione di presente nei calibratori, nei campioni o nei controlli. PRECISIONE, ACCURATEZZA E SENSIBILITA : Vedi scheda tecnica.

2 INTERFERENZE: Vedi scheda tecnica. SIGNIFICATIVITA (VARIABILITA ANALITICA E VARIABILITA BIOLOGICA): VA: vedi scheda tecnica. VB: COMPILAZIONE, TRASMISSIONE E CONSEGNA REFERTI: I risultati, dopo la validazione tecnica sono controllati e validati clinicamente per poi essere firmati digitalmente dal responsabile del laboratorio o da chi ne fa le veci. Dopo la firma digitale i referti sono disponibili on line per essere visionati dai reparti se i pazienti sono interni. Per i pazienti esterni i referti possono essere stampati su richiesta alla segreteria o sono accessibili via internet tramite l utilizzo dell apposito codice rilasciato al momento dell accettazione del paziente dalla segreteria. PRINCIPALI CRITERI INTERPRETATIVI: Il CA19-9 può essere utile per il monitoraggio dei pazienti con carcinoma pancreatico, minore sensibilità per il carcinoma epatobiliare. Livelli elevati si possono trovare anche in patologie non neoplastiche (colestasi per mancata escrezione, malattie del tratto gastrointestinale e fegato). TEMPO DI ATTESA PER L'ANALISI: Uguale o inferiore a 8 ore. 23/09/2015

3 Italiano Nota Il valore di CA 19 9 di un campione prelevato da un paziente può differire a seconda del metodo impiegato. Il risultato trovato nel laboratorio deve quindi sempre contenere un indicazione relativa al metodo di determinazione di CA 19 9 utilizzato. I valori di CA 19 9 di campioni prelevati da pazienti che sono stati dosati con metodi diversi non possono essere paragonati l uno con l altro e possono causare interpretazioni mediche errate. Se nel corso del monitoraggio di una terapia avviene un cambio del metodo di determinazione di CA 19 9, i valori ottenuti durante la fase di passaggio vanno confermati mediante misurazioni parallele con entrambi i metodi. Finalità d uso Test immunologico per la determinazione quantitativa in vitro del CA 19 9 nel siero e nel plasma umani. L esecuzione dell ImmunoAssay in ElettroChemiLuminescenza ECLIA è destinata all uso sugli immunoanalizzatori Elecsys e cobas e. Sommario I valori di CA 19 9 misurati sono definiti dall impiego dell anticorpo monoclonale 1116 NS Vengono misurati i determinanti reattivi per 1116 NS 19 9 su un glicolipide con un peso molecolare di ca Da. Questa mucina corrisponde ad un aptene del determinante del gruppo sanguigno Lewis a, ed è un componente di molte cellule della membrana mucosa. 1,2 Il 3 7 della popolazione hanno la costellazione del gruppo sanguigno Lewis a negativo/b negativo e non possono esprimere la mucina con il determinante reattivo CA Questo fatto va considerato per l interpretazione dei risultati. 3 Si riscontra la mucina nell epitelio fetale dello stomaco, dell intestino e del pancreas. Basse concentrazioni della mucina sono anche rilevabili nel tessuto adulto del fegato, del polmone e del pancreas. 3,4 I valori di CA 19 9 nel test possono essere utili per la diagnosi differenziale ed il monitoraggio di pazienti con carcinoma pancreatico (sensibilità: ). 5,6,7 Non esiste una correlazione dei valori di CA 19 9 nel test con la massa tumorale; pazienti con livelli sierici di CA 19 9 superiori a hanno però quasi sempre metastasi distali. 3 Con la determinazione del CA 19 9 non è possibile la diagnosi precoce del carcinoma pancreatico. 8,9,10 In caso di un carcinoma epatobiliare, i valori di CA 19 9 raggiungono una sensibilità del In caso di un carcinoma gastrico è raccomandabile la determinazione contemporanea del CA 72 4 e del CEA. In caso di un carcinoma colorettale è sufficiente la sola determinazione del CEA; solo nei rari casi negativi per il CEA la determinazione del CA 19 9 può risultare utile. 3 Poiché la mucina viene espulsa esclusivamente attraverso il fegato, una colestasi, anche di piccola misura, può provocare livelli sierici di CA 19 9 in parte chiaramente elevati. Si riscontrano valori di CA 19 9 elevati anche in caso di una serie di malattie benigne ed infiammatorie del tratto gastrointestinale e del fegato, nonché in caso di una fibrosi cistica. 3,6,7 Principio del test Principio sandwich. Durata complessiva del test: 18 minuti. 1 a incubazione: 10 µl di campione, un anticorpo monoclonale biotinilato specifico anti CA 19 9 e un anticorpo monoclonale specifico anti CA 19 9 marcato con un complesso di rutenio a) formano un complesso sandwich. Elecsys 2010 MODULAR ANALYTICS E170 cobas e 411 cobas e 601 cobas e a incubazione: dopo l aggiunta di microparticelle rivestite di streptavidina, il complesso si lega alla fase solida mediante l interazione biotina-streptavidina. La miscela di reazione viene aspirata nella cella di misura dove le microparticelle vengono attratte magneticamente alla superficie dell elettrodo. Successivamente si eliminano le sostanze non legate impiegando ProCell/ProCell M. Applicando una tensione all elettrodo, si induce l emissione chemiluminescente che viene misurata mediante il fotomoltiplicatore. I risultati vengono calcolati in base ad una curva di calibrazione, che viene generata in modo specifico per lo strumento con una calibrazione a 2 punti e con una curva master fornita insieme al codice a barre del reattivo. a) Complesso di rutenio (II) tris(2,2'-bipiridile) (Ru(bpy) ) Reattivi soluzioni pronte all'uso Il rack-pack reagenti è contrassegnato con CA19 9. M R1 R2 Microparticelle rivestite di streptavidina (tappo trasparente), 1 flacone, 6.5 ml: microparticelle rivestite di streptavidina 0.72 mg/ml; conservante. Anticorpi anti CA 19 9~biotina (tappo grigio), 1 flacone, 10 ml: anticorpo (murino) monoclonale biotinilato anti CA mg/l; tampone fosfato 100 mmol/l, ph 6.5; conservante. Anticorpi anti CA 19 9~Ru(bpy) (tappo nero), 1 flacone, 10 ml: anticorpo (murino) monoclonale anti CA 19 9 marcato con un complesso di rutenio 4 mg/l; tampone fosfato 100 mmol/l, ph 6.5; conservante. Precauzioni e avvertenze Per uso diagnostico in vitro. Osservare le precauzioni normalmente adottate durante la manipolazione dei reagenti di laboratorio. Lo smaltimento di tutti i rifiuti deve avvenire secondo le direttive locali. Scheda dati di sicurezza disponibile su richiesta per gli utilizzatori professionali. Evitare la formazione di schiuma in tutti i reattivi e tipi di campione (campioni, calibratori e controlli). Utilizzo dei reattivi I reattivi contenuti nella confezione formano un unità inseparabile e sono pronti all uso. Tutte le informazioni necessarie per l utilizzo corretto vengono lette nello strumento dai codici a barre dei rispettivi reattivi. Conservazione e stabilità Conservare a 2 8 C. Non congelare. Conservare la confezione di reattivi Elecsys in posizione verticale in modo da garantire la completa disponibilità delle microparticelle durante il mescolamento automatico prima dell uso. Stabilità: prima dell apertura a 2 8 C dopo l apertura a 2 8 C su MODULAR ANALYTICS E170, cobas e 601 e cobas e 602 su Elecsys 2010 e cobas e 411 fino alla data di scadenza indicata 8 settimane 6 settimane 8 settimane , V 22.0 Italiano 1 / 4

4 Prelievo e preparazione dei campioni Solo i tipi di campione elencati di seguito sono stati testati e risultano accettabili. Siero, prelevato con provette standard per prelievi di campioni o con provette contenenti gel di separazione. Plasma con litio/sodio/nh eparina e K 3 EDTA. Non impiegare plasma con citrato di sodio. Valutazione: recupero del valore nel siero o slope intercetta < ±2 x limite di sensibilità analitica + coefficiente di correlazione > Stabilità: 30 giorni a 2 8 C, 3 mesi a 20 C. 11 I tipi di campione elencati sono stati testati impiegando una selezione di provette per il prelievo di campioni disponibili in commercio al momento dell'analisi; non sono, quindi, state testate tutte le provette disponibili di tutte le case produttrici. Alcuni sistemi per il prelievo di campioni di vari produttori possono contenere diversi materiali e in alcuni casi possono interferire sui risultati del test. Quando si trattano i campioni in provette primarie (sistemi per il prelievo di campioni), seguire le istruzioni del produttore delle provette. I campioni contenenti precipitati devono essere centrifugati prima dell esecuzione del test. Non impiegare campioni inattivati a caldo. Non impiegare campioni e controlli stabilizzati con azide. Assicurarsi che i campioni, i calibratori ed i controlli al momento della misura siano alla temperatura di C. Per evitare un eventuale evaporazione, analizzare/misurare i campioni, calibratori e controlli che si trovano sugli analizzatori entro 2 ore. Materiali a disposizione Per i reattivi, vedere la sezione Reattivi soluzioni pronte all'uso. Materiali necessari (ma non forniti) , CA 19 9 CalSet, per 4 x 1 ml , PreciControl Tumor Marker, per 2 x 3 ml ciascuno di PreciControl Tumor Marker 1 e , Diluent Universal, 2 x 16 ml di diluente, oppure , Diluent Universal, 2 x 36 ml di diluente Normale attrezzatura da laboratorio Analizzatore Elecsys 2010, MODULAR ANALYTICS E170 o cobas e Accessori per gli analizzatori Elecsys 2010 e cobas e 411: , ProCell, 6 x 380 ml di tampone del sistema , CleanCell, 6 x 380 ml di soluzione di lavaggio per celle di misura , Elecsys SysWash, 1 x 500 ml di additivo per l acqua di lavaggio , adapter per SysClean , Elecsys 2010 AssayCup, 60 x 60 coppette di reazione , Elecsys 2010 AssayTip, 30 x 120 puntali di pipettaggio Accessori per gli analizzatori MODULAR ANALYTICS E170, cobas e 601 e cobas e 602: , ProCell M, 2 x 2 L di tampone del sistema , CleanCell M, 2 x 2 L di soluzione di lavaggio per celle di misura , PC/CC Cups, 12 coppette per il preriscaldamento di ProCell M e di CleanCell M prima dell'uso , ProbeWash M, 12 x 70 ml di soluzione di lavaggio per la conclusione del run ed il lavaggio al cambio di reattivi , AssayTip/AssayCup Combimagazine M, 48 supporti da 84 coppette di reazione e 84 puntali di pipettaggio, sacchetti per rifiuti , WasteLiner, sacchetti per rifiuti , SysClean Adapter M Accessori per tutti gli analizzatori: , SysClean Elecsys, 5 x 100 ml di soluzione di lavaggio per il sistema Esecuzione Per una performance ottimale del test, attenersi alle indicazioni riportate nel presente documento per l'analizzatore in questione. Per le istruzioni specifiche dell'analizzatore relative all'esecuzione del test, consultare il manuale d'uso dello strumento. La risospensione delle microparticelle prima dell uso avrà luogo automaticamente. Leggere i parametri test specifici nello strumento dal codice a barre del reattivo. Nel caso eccezionale che non sia possibile leggere il codice a barre, digitare la sequenza di 15 cifre. Portare i reattivi conservati al fresco alla temperatura di ca. 20 C e collocarli nel rotore portareattivi (20 C) dell'analizzatore. Evitare la formazione di schiuma. La regolazione della temperatura esatta, l apertura e la chiusura dei flaconi avranno luogo automaticamente nello strumento. Calibrazione Tracciabilità: questo metodo è stato standardizzato contro il metodo Enzymun Test CA Ogni set di reattivi Elecsys possiede un'etichetta con codice a barre contenente le informazioni specifiche per la calibrazione del rispettivo lotto di reattivo. La curva master preimpostata viene adattata all'analizzatore impiegando l'appropriato CalSet. Frequenza di calibrazione: effettuare una calibrazione per ogni lotto con reattivo fresco (al massimo 24 ore dopo l identificazione della confezione di reattivo sull'analizzatore). Si consiglia di ripetere la calibrazione come segue: dopo 12 settimane se si impiega lo stesso lotto di reagente dopo 7 giorni (se si impiega la stessa confezione di reattivo sull'analizzatore) all occorrenza: ad es. se un controllo di qualità si trova al di fuori dei limiti definiti Controllo di qualità Per il controllo di qualità, impiegare PreciControl Tumor Marker. In aggiunta, è possibile utilizzare altro materiale di controllo appropriato. I controlli per le diverse concentrazioni devono essere eseguiti individualmente almeno 1 volta ogni 24 ore quando il test è in uso, al cambio di ogni confezione di reattivi e dopo ogni calibrazione. Gli intervalli ed i limiti del controllo dovranno essere conformi alle esigenze individuali di ogni laboratorio. I valori ottenuti devono rientrare nei limiti definiti. Ogni laboratorio deve definire delle misure correttive da attuare nel caso che alcuni valori siano al di fuori dei limiti definiti. Per il controllo di qualità, attenersi alle normative vigenti e alle linee guida locali. Calcolo L analizzatore effettua il calcolo automatico della concentrazione dell analita di ogni campione (in oppure in ku/l). Limiti del metodo interferenze L ittero (bilirubina < 1129 µmol/l oppure < 66 mg/dl), l emolisi (Hb < 1.4 mmol/l oppure < 2.2 g/dl), la lipemia (Intralipid < 1500 mg/dl) e la biotina (< 100 ng/ml oppure < 409 nmol/l) non interferiscono sul test. Valutazione: recupero entro ±15 del valore iniziale. Ai pazienti sottoposti a terapia con alti dosaggi di biotina (>5 mg/die), il campione dovrà essere prelevato almeno 8 ore dopo l ultima somministrazione di biotina. Non sono state osservate interferenze da fattori reumatoidi fino ad una concentrazione di 1500 I. Nessun effetto hook in caso di concentrazioni di CA 19 9 fino a Tra 27 farmaci di frequente impiego, testati in vitro, non si è osservata alcuna interferenza nel test. In casi rari possono riscontrarsi interferenze causate da titoli estremamente alti di anticorpi diretti contro anticorpi specifici anti analita, di anticorpi anti streptavidina o di anticorpi anti rutenio. Tali effetti sono ridotti al minimo attraverso un procedimento appropriato del test. 2 / , V 22.0 Italiano

5 Ai fini diagnostici, i risultati devono sempre essere valutati congiuntamente con la storia clinica del paziente, con gli esami clinici e con altre evidenze cliniche. Limiti ed intervalli Intervallo di misura (definito dal limite di sensibilità inferiore e dal massimo valore della curva master). I valori al di sotto del limite di sensibilità vengono indicati come < I valori al di sopra dell intervallo di misura vengono indicati come >1000 (oppure, su campioni diluiti 1:10, fino a ). Limiti inferiori di misura Limite di sensibilità inferiore del test Limite di sensibilità inferiore: <0.60 Il limite di sensibilità inferiore rappresenta la minima concentrazione misurabile dell analita che può essere distinta dallo zero. Viene calcolato come il valore che si trova 2 deviazioni standard al di sopra dello standard più basso (calibratore master, standard 1 + 2, studio relativo alla ripetibilità, n = 21). Diluizione I campioni con concentrazioni di CA 19 9 al di sopra dell intervallo di misura possono essere diluiti con Diluent Universal. È raccomandata la diluizione 1:10 (automaticamente dagli analizzatori MODULAR ANALYTICS E170, Elecsys 2010 o cobas e, o manualmente). La concentrazione del campione diluito deve essere > 50. Dopo la diluizione manuale, moltiplicare il risultato per il fattore di diluizione. Dopo la diluizione automatica, il software degli analizzatori MODULAR ANALYTICS E170, Elecsys 2010 e cobas e calcola automaticamente la concentrazione del campione. Nota: l antigene CA 19 9 tende ad aggregarsi; 12 il che può portare ad un comportamento di diluizione non lineare. Valori di riferimento In 381 campioni, prelevati da soggetti (n = 187) e donatori di sangue (n = 194) sani, sono stati riscontrati i seguenti valori: 27 (95 o percentile) 34 (97.5 o percentile) 39 (99 o percentile) Ogni laboratorio deve controllare l applicabilità dei valori di riferimento alla propria popolazione di pazienti e, se necessario, determinare intervalli di riferimento propri. Dati specifici sulla performance del test Qui di seguito sono riportati i dati rappresentativi delle prestazioni sugli analizzatori. I risultati dei singoli laboratori possono differire da questi. Precisione La precisione è stata determinata impiegando reattivi Elecsys, pool di sieri umani e controlli, eseguiti in base ad un protocollo modificato (EP5 A) del CLSI (Clinical and Laboratory Standards Institute): 6 volte al giorno per 10 giorni (n = 60); ripetibilità sull'analizzatore MODULAR ANALYTICS E170, n = 21. Sono stati ottenuti i seguenti risultati: Campione Analizzatori Elecsys 2010 e cobas e 411 Media Ripetibilità Precisione intermedia Siero umano Siero umano Siero umano PreciControl TM b) PreciControl TM b) TM = Tumor Marker Analizzatori MODULAR ANALYTICS E170, cobas e 601 e cobas e 602 Campione Media Ripetibilità Precisione intermedia Media Siero umano Siero umano Siero umano PreciControl TM PreciControl TM Confronto tra metodi Il confronto del test CA 19 9 Elecsys (y) con il metodo Enzymun Test CA 19 9 (x), impiegando campioni prelevati da pazienti ospedalizzati, ha prodotto le seguenti correlazioni: Numero dei campioni misurati: 78 Passing/Bablok 13 Regressione lineare y = 0.99x y = 0.99x τ = r = Le concentrazioni dei campioni erano comprese fra ca. 4.5 e 216. Specificità analitica Il test del marcatore tumorale CA 19 9 Elecsys si basa sull anticorpo monoclonale 1116 NS 19 9, disponibile esclusivamente presso Fujirebio Diagnostics ed i suoi concessionari e rappresentanti. Le prestazioni caratteristiche dei procedimenti con tale anticorpo non sono applicabili ai metodi di dosaggio che impiegano altri anticorpi. Letteratura 1 Koprowski H, Steplewski Z, Mitchell K, et al. Colorectal carcinoma antigens detected by hybridoma antibodies. Somat Cell Genet 1979;5: Hansson GC, Zopf D. Biosynthesis of the cancer-associated sialyl-lea antigen. J Biol Chem 1985;260: Stieber P, Fateh-Moghadam A. Sensible Use of Tumormarkers. Dtsch: Tumormaker und ihr sinnvoller Einsatz. ISBN dtsch/engl. Juergen Hartmann Verlag Marloffstein-Rathsberg (1993). 4 Herlyn M, Sears HF, Steplewski Z, et al. Monoclonal antibody detection of a circulating tumor-associated antigen. Presence of antigen in sera of patients with colorectal, gastric and pancreatic carcinoma. J Clin Immunol 1982;2: Ritts RE Jr, Del Villano BC, Go VLV, et al. Initial clinical evaluation of an immunoradiometric assay for using the NCI serum bank. Int J Cancer 1984;33: Farini R, Fabris C, Bonvicini P, et al. in the differential diagnosis between pancreatic cancer and chronic pancreatitis. Eur J Cancer Clin Oncol 1985;21: Safi F, Roscher R, Beger HG. The clinical relevance of the tumor marker in the diagnosing and monitoring of pancreatic carcinoma. Bull Cancer Paris 1990;77(1): Steinberg WM, Gelfand R, Anderson KK, et al. Comparison of the sensitivity and specificity of the and carcinoembryonic antigen assays in detecting cancer of the pancreas. Gastroenterology 1986;90: Fritsche HA Jr, Gelder FB. Serum tumor markers for pancreatic carcinoma. Immunol-Ser 1990;53: Steinberg W. The clinical utility of the tumor associated antigen. Am J Gastroenterol 1990;85(4): Guder WG, Narayanan S, Wisser H, et al. List of Analytes; Preanalytical Variables. Brochure in: Samples: From the Patient to the Laboratory. GIT-Verlag, Darmstadt 1996;8. ISBN : Suresh MR. Immunoassays for cancer-associated carbohydrate antigens. Semin Cancer Biol 1991 Dec;2(6): , V 22.0 Italiano 3 / 4

6 13 Bablok W, Passing H, Bender R, et al. A general regression procedure for method transformation. Application of linear regression procedures for method comparison studies in clinical chemistry, Part III. J Clin Chem Clin Biochem 1988 Nov;26(11): Per ulteriori informazioni, consultare il manuale d uso appropriato per il relativo analizzatore, i rispettivi fogli di applicazione, la Product Information e le metodiche di tutti i componenti necessari (se disponibili nel vostro paese). In questa metodica, per separare la parte intera da quella frazionaria in un numero decimale si usa sempre il punto. Il separatore delle migliaia non è utilizzato. CA 19 9 è un marchio registrato di Fujirebio Diagnostics, Inc. Simboli Oltre a quelli indicati nello standard ISO , Roche Diagnostics impiega i seguenti simboli: Contenuto della confezione Analizzatori/strumenti su cui i reagenti possono essere usati Reattivo Calibratore Volume dopo ricostituzione o mescolamento Le aggiunte o modifiche significative sono indicate mediante una linea verticale posizionata al margine. 2013, Roche Diagnostics Roche Diagnostics GmbH, Sandhofer Strasse 116, D Mannheim Distribuzione negli USA: Roche Diagnostics, Indianapolis, IN Assistenza tecnica alla clientela negli USA: / , V 22.0 Italiano