ACETALDEIDE URINARIA in UV Codice Z66010

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1 ACETALDEIDE URINARIA in UV Codice Z66010 BIOCHIMICA Il dosaggio della Acetaldeide o Aldeide acetica urinaria viene effettuato in seguito all esposizione ad Acetaldeide ed Etanolo. L Acetaldeide a temperatura ambiente è un liquido incolore volatile e infiammabile, dall'odore pungente e irritante. È una sostanza tossica, probabilmente cancerogena. È un importante reattivo impiegato nelle sintesi industriali organiche. Come tutte le aldeidi è facilmente ossidabile ad acido, in questo caso ad acido acetico. Nel corpo umano, l'acetaldeide si forma per iniziale ossidazione dell Etanolo nel fegato ad opera dell enzima alcool deidrogenasi; viene successivamente convertita in acido acetico dall'enzima aldeide deidrogenasi. Essendo più tossica dell'alcool etilico, l'acetaldeide è responsabile di molti dei malesseri associati ad un elevata assunzione di alcool. I farmaci concepiti per combattere l'abuso di alcool (come il disulfiram) agiscono su quest'ultimo stadio rallentando l'ossidazione dell'acetaldeide ad acido acetico con conseguente prolungamento del malessere. Il presente metodo permette di dosare l Acetaldeide urinaria in HPLC. EUREKA srl LAB DIVISION VAT N info@eurekaone.com Head Quarter: Via Enrico Fermi Chiaravalle (AN) ITALY Tel Fax Questo prodotto adempie a tutte le esigenze della Direttiva 98/79/CE sui dispositivi medico-diagnostici in vitro (IVD). La dichiarazione di conformità CE è disponibile su richiesta. Release N 002 Acetaldeide urinaria in UV Marzo

2 CARATTERISTICHE DEL KIT Principio del Metodo: Il presente metodo consente di determinare le concentrazioni urinarie dell Acetaldeide dopo derivatizzazione del campione urinario a 70 C per 15 minuti. Il campione derivatizzato viene diluito ed iniettato nel cromatografo HPLC. Recupero del Metodo: 100 % Sensibilità del Metodo: 0,1 mg/l Range dinamico del Metodo: 0, mg/l Valori di riferimento: Popolazione non esposta < 1 mg/l Popolazione esposta < 50 mg/l Contenuto della confezione: Tutti i reagenti sono pronti all uso e stabili 3 anni a temperatura ambiente (< 20 C). Reagente A - Soluzione Tampone 1, 1 x 10 ml Reagente B - Soluzione Tampone 2, 1 x 10 ml Reagente C - Soluzione Derivatizzante, 1 x 10 ml Reagente D - Soluzione Test/Standard chimico, 1 x 10 ml Reagente M - Fase Mobile, 4 x 500 ml Vedi Avvertenze Stoccare a 2-8 C Dotazione strumentale minima richiesta : Strumento HPLC isocratico con loop da 50 µl Detector UV λ = 385 nm Registratore di cromatogrammi Dotazione opzionale : Autocampionatore Computer gestionale Modalità di raccolta delle urine : Urine di fine turno o spot per abuso di alcool. Stoccare il campione a 2-8 C, stabile per 2 giorni. Stabile 3 mesi a -20 C. 2

3 PROCEDURA PREANALITICA FASE 1 : Derivatizzazione della Soluzione Test FASE 2 : Incubare a 70 C per 15 minuti Test Reagente A Soluzione Tampone µl Reagente D Soluzione Test 50 µl Reagente B Soluzione Tampone µl Reagente C Sol. Derivatizzante 100 µl Al vortex per 10 secondi Raffreddare FASE 3 : Prelevare 100 µl del Test derivatizzato ed aggiungere 400 µl di H 2 O di grado HPLC NOTA : Prima di iniziare la seduta analitica è consigliabile iniettare 50 µl di questa soluzione in HPLC per identificare il tempo di ritenzione dell Acetaldeide che deve essere simile a quello riportato in fig.1. Se il Test ha dato esito positivo si può procedere alla seduta analitica. Se così non fosse verificare la funzionalità del sistema analitico. Importante : Questo Test così ottenuto non deve essere usato come calibratore. PROCEDURA ANALITICA FASE 1 : Derivatizzazione del Bianco (necessario come punto 0 di calibrazione), dei Campioni, dello Standard chimico e degli eventuali Controlli (ottenuti diluendo lo Standard chimico in H 2 O di grado HPLC) Dispensare in provetta tipo eppendorf da 1,5 ml con tappo: Bianco Standard Campione Controllo Reagente A Soluzione Tampone µl 100 µl 100 µl 100 µl Acqua di grado HPLC 50 µl Reagente D Standard chimico 50 µl Campione 50 µl Controllo 50 µl Reagente B Soluzione Tampone µl 100 µl 100 µl 100 µl Reagente C Sol. Derivatizzante 100 µl 100 µl 100 µl 100 µl FASE 2 : Incubare a 70 C per 15 minuti Al vortex per 10 secondi Raffreddare FASE 3 : Prelevare 100 µl del Campione derivatizzato ed aggiungere 400 µl di H 2 O di grado HPLC. N.B.: il campione così preparato è stabile 3 giorni a 2-8 C INIEZIONE : Iniettare 50 µl del sovranatante limpido nel cromatografo HPLC e attendere la stampa del cromatogramma. 3

4 Release N 002 Acetaldeide urinaria in UV Marzo 2010 ACETALDEIDE - Avvertenze REAGENTE D : SOLUZIONE TEST/STANDARD CHIMICO ACETALDEIDE 99,5 mg/l PARAMETRI DEL DETECTOR SPETTROFOTOMETRICO λ GAIN TEMPO DI INTEGRAZIONE 385 nm 0,002 AUFS 5 secondi PROTEZIONE DELLA COLONNA ANALITICA Per salvaguardare la colonna analitica Reverse Phase GENESIS 4,6 x 150 mm, 4 µ, è tassativo l uso del Metasaver Precolumn Filter 0.5 um (1 x 10 pz.) cod. ZA6005. CONDIZIONAMENTO DELLA COLONNA Installare la colonna analitica nuova Reverse Phase GENESIS C 18 (4,6 x 150 mm, 4 µ). Disconnettere il detector e far passare 30 ml di una soluzione di H 2 O : Acetonitrile ( 20 : 80 v/v ) e successivamente 30 ml di H 2 O per HPLC, al flusso di 1,2 ml/minuto. Non riciclare i liquidi di lavaggio. Condizionare la colonna con la fase mobile al flusso di 1,2 ml/minuto e scaricare i primi 30 ml. Non è possibile effettuare analisi a ricircolo di fase. Se la temperatura amb. del Laboratorio è > 20 C si consiglia di conservare a 2-8 C la Fase Mobile fra una seduta analitica e l altra. PULIZIA DELLA COLONNA PARAMETRI HPLC Disconnettere il detector. Flussare 30 ml di H 2 O e scaricare. Flussare una soluzione di H 2 O : Acetonitrile ( 20 : 80 v/v ) per 30 minuti scaricandola. Quando la colonna verrà usata di nuovo far passare 30 ml di H 2 O prima di condizionarla con la Fase Mobile. LOOP 50 µl Flusso di lavoro consigliato 1,2 ml/minuto Pressione corrispondente Circa 110 bar PARAMETRI INTEGRATORE HP 3394 / 3395 / 3396 ATTENUAZIONE 8 PARAMETRI COMPUTER GESTIONALE SECONDO LE SPECIFICHE DEL SOFTWARE GESTIONALE ACCESSORI E CONSUMABILI CODICE DESCRIZIONE CONFEZIONE Z66020 Standard chimico per Acetaldeide 2 x 5 ml ZFM15960E Colonna Analitica Genesis C18 (150 x 4,6mm -4 um) 1 PZ ZA6005 Metasaver Precolumn Filter 0.5 um 1 x 10 PZ S29057U Vial standard di vetro da 2 ml con tappo a vite 1 x 100 PZ 4

5 ACETALDEIDE URINARIA ( Cromatogrammi di Riferimento ) Fig. 1 Soluzione Test Fig. 2 Standard di Calibrazione diluito Fig. 3 Campione di urina arricchito R.T Acetaldeide 99,5 mg/l R.T Acetaldeide 9,95 mg/l R.T Acetaldeide 4,5 mg/l 5

6 ACETALDEIDE URINARIA ( Cromatogrammi di Riferimento ) Fig. 4 Standard di calibrazione diluito (Controllo) Fig. 5 Bianco R.T Acetaldeide 0,995 mg/l R.T Acetaldeide 6