PROTEINE TOTALI REF NPP50

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1 PROTEINE TOTALI REF NPP50 REAGENTE PER LA DETERMINAZIONE QUANTITATIVA DELLE PROTEINE TOTALI NEL SIERO, NELLE URINE E NEL LIQUOR CON METODO NEFELOMETRICO PER USO DIAGNOSTICO IN VITRO APPLICAZIONI CLINICHE Con la determinazione delle Proteine Totali è possibile valutare la presenza di disturbi metabolici e renali. I valori di Proteine Totali nel siero risultano essere bassi nelle seguenti situazioni cliniche: sindrome nefrosica, insufficienza renale, malnutrizione cronica, epatopatie acute e croniche, neoplasie, febbre, infezioni acute, traumi, interventi chirurgici e in caso di vomito e diarrea. I valori delle Proteine Totali nel siero aumentano, invece, per disidratazione, nelle gammopatie monoclonali e policlonali. La presenza di Proteine Totali nelle urine è un indicazione delle affezioni renali. PRINCIPIO DEL METODO Le proteine contenute nel siero, urine e liquor umane precipitano reagendo con la soluzione di Acido Tricloroacetico. Sfruttando il fenomeno della diffrazione della luce che questo precipitato provoca, si è in grado, per mezzo del nefelometro, di misurare l'intensità della luce diffratta, che risulta proporzionale alla concentrazione di proteine presenti nel campione in esame. La valutazione avviene per confronto con un calibratore a concentrazione nota. REAGENTE CONTENUTO NELLA CONFEZIONE La data di scadenza è indicata sulla etichetta e si riferisce al componente conservato ermeticamente chiuso a 2-8 C. Il Reagente Proteine Totali non deve essere usato se presenta intorbidamenti e/o sedimenti. RPT Proteine Totali: 1 flacone di plastica (15 ml) di Acido Tricloroacetico soluzione >10%. 4 flaconi di vetro vuoti. Trasferire 4 ml di soluzione di Acido Tricloroacetico in un flacone di vetro vuoto per utilizzo su nefelometro Delta (vedere AVVERTENZE E PRECAUZIONI). Dopo l'impiego, conservare il reagente chiuso a 2-8 C per 8 settimane. Non congelare. MATERIALE NECESSARIO MA NON FORNITO Il reagente deve essere utilizzato con i seguenti reagenti: Calibratore per Proteine, (REF NCPP1) Controllo per Proteine S/L, (REF NCPP2L) Controllo per Proteine S/M, (REF NCPP2M) Controllo per Proteine S/H, (REF NCPP2H) Diluente, (REF NDPP1) Tampone di Reazione, (REF NDPP2) Nefelometro Delta, (REF ) Altro materiale di consumo e attrezzature sono descritte nel manuale d'uso del Nefelometro Delta. AVVERTENZE E PRECAUZIONI C: Corrosivo N: Pericoloso per l ambiente R35: Provoca gravi ustioni R51/53: Tossico per gli organismi acquatici, può provocare a lungo termine effetti negativi per l ambiente acquatico S26: In caso di contatto con gli occhi, lavare immediatamente e abbondantemente con acqua e consultare il medico S36/37/39: Usare indumenti protettivi e guanti adatti e proteggersi gli occhi/la faccia S45: In caso di incidente o di malessere consultare immediatamente il medico (se possibile, mostrargli l'etichetta) S60: Questo materiale e il suo contenitore devono essere smaltiti come rifiuti pericolosi S61: Non disperdere nell'ambiente. Riferirsi alle istruzioni speciali schede informative in materia di sicurezza 1

2 Non usare i reagenti dopo la data di scadenza. Per evitare contaminazioni personali ed ambientali, è necessario osservare le seguenti norme di sicurezza: Utilizzare guanti protettivi resistenti agli acidi; Utilizzare occhiali protettivi a tenuta; Evitare i contatto con gli occhi e la pelle; Non fumare, mangiare, bere o applicare cosmetici durante l'esecuzione del dosaggio; Evitare la formazione di aerosol; Evitare il contatto con soluzioni alcaline; Non vaporizzare su fiamma o su corpo incandescente; Ai sensi del D.L. italiano n. 22 del , che fa riferimento alle direttive CEE (91/156/CEE, 91/689/CEE, 94/62/CEE) tutti i rifiuti provenienti da lavorazioni manuali e/o in automatico sono classificati rifiuti speciali pericolosi con codice di classificazione CER ; devono quindi essere eliminati affidandoli a ditte autorizzate al ritiro ed allo smaltimento. RACCOLTA E PREPARAZIONE DEI CAMPIONI Il dosaggio può essere effettuato su campioni di siero umano urine e liquor. I campioni di siero devono essere completamente coagulati e, dopo essere stati centrifugati, non devono contenere particelle o tracce di fibrina in sospensione. Prima del dosaggio, accertarsi che i campioni siano perfettamente limpidi. Pertanto, campioni fortemente lipemici o campioni congelati, che dopo lo scongelamento si presentano torbidi, devono essere chiarificati mediante centrifugazione (10' a ca g). I campioni di siero e liquor possono essere conservati a 2-8 C per 8 giorni, per tempi più lunghi (1 anno) si consiglia di congelarli a -20 C. Evitare ripetuti congelamenti e scongelamenti. Per la determinazione delle Proteine Totali nelle urine sono adatte urine spontanee o di raccolta. Si consiglia di non congelare i campioni di urina e, prima di eseguire il test, di centrifugarli per rimuovere le componenti particolate. PROCEDIMENTO OPERATIVO Tutte le fasi vengono eseguite automaticamente dallo strumento Attendere che i reagenti ed i campioni raggiungano la temperatura ambiente (15-25 C). Seguire il procedimento operativo descritto sul manuale d'uso del Nefelometro Delta, che prevede l'allestimento di quanto segue: Curva di calibrazione: viene preparata automaticamente dallo strumento mediante diluizioni seriali del Calibratore (REF NCPP1) con l'apposito Diluente (REF NDPP1). Le diluizioni effettuate vengono quindi impiegate per la calibrazione, che rimane valida purché il dosaggio dei sieri di controllo rientri nei limiti attesi. La calibrazione deve essere necessariamente ripetuta ogni qualvolta si utilizzi un nuovo lotto di reagente. Campioni: prima del dosaggio, i sieri vengono diluiti automaticamente dallo strumento Delta alla diluizione secondo metodica, utilizzando l'apposito Diluente (REF NDPP1). Qualora i valori dei campioni siano al di fuori dell'ambito di misura è opportuno ripetere il test, utilizzando una diluizione maggiore o minore. CONTROLLO DI QUALITÀ INTERNO Per ogni serie di campioni di siero umano e ogni volta che si utilizza un nuovo flacone di reagente, è necessario effettuare un controllo di accuratezza e di precisione, utilizzando il Controllo Proteine S/L (REF NCPP2L), S/M (REF NCPP2M) e S/H (REF NCPP2H). I controlli vengono trattati come i campioni in esame. Per i limiti attesi di tali controlli fare riferimento alla relativa tabella fornita a corredo della confezione dei controlli stessi. Diversamente, le Proteine Totali nelle urine e nel liquor devono essere determinate utilizzando il Controllo Proteine S/L (REF NCPP2L), S/M (REF NCPP2M) e S/H (REF NCPP2H) diluito 1:100 con Diluente (REF NDPP1), (esempio: 10 µl di Controllo Proteine S/M µl di Diluente). Come ambito fiduciale vale il valore nominale sierico del Controllo Proteine S/L (REF NCPP2L), S/M (REF NCPP2M) e S/H (REF NCPP2H) ± 20%. 2

3 CALCOLO DEI RISULTATI La valutazione dei campioni viene eseguita in modo automatico, mediante elaborazione dei risultati con una funzione logit-log. VALORI NORMALI I valori di Proteine Totali sotto riportati sono soltanto indicativi. Si raccomanda a ciascun laboratorio di stabilire i propri intervalli di riferimento : Proteina Siero Urine Liquor Proteine Totali g/l < 100 mg/l mg/dl CARATTERISTICHE METODOLOGICHE SPECIFICITA' L Acido Tricloroacetico determina la precipitazione di tutte le proteine presenti nel campione. SENSIBILITA' La sensibilità della determinazione viene definita dal limite inferiore della curva di calibrazione e dipende quindi dalla concentrazione delle proteine nel calibratore. Gli ambiti di misura sono riportati nel manuale d'uso del Nefelometro Delta. PRECISIONE La precisione è stata valutata misurando la variabilità intra-saggio ed intersaggio. Proteina Intra-assay Inter-assay Proteine Totali (siero) n repl. Valore medio [g/l] CV % n repl Valore medio [g/l] CV % Siero Siero Proteina Intra-assay Inter-assay Proteine Totali (urine) n repl. Valore medio [mg/l] CV % n repl Valore medio [mg/l] CV % Urina Urina

4 CORRELAZIONE TRA METODI Campioni di siero sono stati esaminati con il Reagente Radim alle Proteine Totali (y). Tali risultati sono stati messi a confronto con un sistema nefelometrico di riferimento (x). Le correlazioni dei risultati sono riportate nella tabella sottostante: Proteina Regressione lineare Coeff. di correlazione n campioni Proteine Totali (siero) y = 0.89x Proteine Totali (urine) y = 0.69x LIMITI DEL TEST La presenza di torbidità o di particelle può interferire nell'esecuzione del test. Si raccomanda, pertanto, di rimuovere mediante centrifugazione eventuali particelle dovute a sieri non completamente coagulati, a denaturazione proteica. Per motivazioni tecniche relative alla produzione e/o all'invecchiamento dei campioni, i risultati ottenuti con i sieri di controllo e con i sieri per il controllo di qualità inter-laboratori possono differire in funzione del metodo utilizzato. Può quindi rendersi necessario valutare i risultati ottenuti facendo riferimento a valori specifici per i diversi metodi utilizzati. 4

5 TOTAL PROTEIN REF NPP50 REAGENT FOR QUANTITATIVE DETERMINATIONS OF TOTAL PROTEIN IN HUMAN SERUM, CSF AND URINE USING A NEPHELOMETRIC METHOD FOR IN VITRO DIAGNOSTIC USE ONLY CLINICAL APPLICATIONS Estimation of the metabolic and renal diseases is possible by Total Protein test. Diminished Total Protein concentration occur in: nephritic syndrome, renal insufficiency, chronic malnutrition, acute and chronic hepatic disease, high temperature, trauma, surgery, vomit and diarrhoea. Elevated concentration of Total Protein in serum are to expected in dehydrating state, monoclonal and polyclonal gammopathy. Increased urinary secretion of Total Protein is an indicator of renal complication. PRINCIPLE OF THE ASSAY The human serum, urine and csf Protein gives a measurable precipitation with Trichloroacetic Acid solution. With the light diffraction phenomenon produced by this precipitation it is possible to measure the intensity of scattered light using a nephelometer. This intensity is proportional to the concentration of the relevant Protein in the sample. The result is evaluated by comparison with a calibrator of known concentration. REAGENT PROVIDED WITH THE KIT The expiration date is given on the label and it refers to closed component stored at 2-8 C. The Total Protein reagent should not be used if it has developed turbidity and/or a sediment. RPT Total Protein: 1 plastic vial (15 ml) Trichloroacetic Acid solution >10%. 4 empty glass vials. Transfer 4 ml of Trichloroacetic Acid solution in 1 empty glass vial to use on Delta nephelometer (see WARNINGS AND PRECAUTIONS). After each use, store the reagent, hermetically sealed, at 2-8 C for 8 weeks. Do not freeze. MATERIALS REQUIRED BUT NOT SUPPLIED The reagent must be used with the following reagents: Protein Calibrator, (REF NCPP1) Protein Control S/L, (REF NCPP2L) Protein Control S/M, (REF NCPP2M) Protein Control S/H, (REF NCPP2H) Diluent, (REF NDPP1) Reaction Buffer, (REF NDPP2) Delta Nephelometer, (REF ) Disposable materials and samples as described in the instruction manual for the Delta Nephelometer. WARNINGS AND PRECAUTIONS C: Corrosive N: Dangerous for the environment R35: Causes severe burns R51/53: Toxic to aquatic organisms, may cause long-term adverse effects in the aquatic environment S26: In case of contact with eyes, rinse immediately with plenty of water and seek medical advice S36/37/39: Wear suitable protective clothing and gloves and wear eye / face protection S45: In case of accident or if you feel unwell, seek medical advice immediately (show the label whenever possible) S60: This material and its container must be disposed of as hazardous waste S61: Avoid release to the environment. Refer to special instructions / safety data sheets Do not use reagents beyond their expiry date. 5

6 In order to avoid personal and environmental contamination, the following precautions must be observed: Wear suitable protective gloves acid resistant; Wear eye / face protection; Avoid contact with eyes and skin; Do not smoke, eat, drink or apply cosmetics during the assay; Avoid aerosol formation; Avoid contact with alkaline solution; Keep away from sources of ignition; According to Italian decree D.L. no. 22 dated , in compliance with EEC directives (91/156/EEC, 91/689/EEC, 94/62/EEC), all waste products originating from either manual and/or automated processing are classified as hazardous special waste material (European classification code CER ). As such, they must be eliminated by delegating to special enterprises, qualified for waste collection and disposal. SPECIMEN COLLECTION AND PREPARATION The assay can be performed on human serum, urine and csf samples. Serum samples should have coagulated completely and, after centrifugation, should contain no particles or traces of fibrin. Prior to use be sure that samples are perfectly clear. Specimens showing particulate matter or turbidity should be centrifuged (10 minutes at approx. 15,000 x g) prior to use. Serum and csf samples can be stored at 2-8 C for 8 days, for longer periods (1 year) it is advisable to freeze samples at -20 C. Repeated Freeze/thawing of samples should be avoided. Random and timed urine collections are suitable specimens for the assessment of Total Protein in urine. It is advisable not to freeze urine samples and to centrifuge prior to use to remove any particulate matter. ASSAY PROCEDURE All steps are automatically performed by the instrument. Allow the reagents and samples to warm up to room temperature (15 to 25 C). Consult the Delta Nephelometer manual for details regarding the operation of the instrument in preparation of the following: Reference curve: is automatically prepared by instrument with serial dilutions of the Calibrator (REF NCPP1) using the supplied Diluent (REF NDPP1). These dilutions are used for calibration. The calibration is valid as long as control serum performances are reproduced within their expected limits. Every time a different lot of reagent is used a new calibration curve must be prepared. Specimens: prior to use, serum samples are automatically diluted for Total Protein assay using the supplied Diluent (REF NDPP1). If the readings obtained are outside the assay range the assay can be repeated using a higher or lower dilution of sample. INTERNAL QUALITY CONTROL For each series of serum samples as well as the initial opening of an reagent vial, an accuracy and precision control should be assessed using the Protein Controls S/L (REF NCPP2L), S/M (REF NCPP2M) and S/H (REF NCPP2H). The controls are assayed and results evaluated as for patient samples. For the expected values refer to the table provided with the control kit. On the contrary, total protein in urine and csf must be determinate with a 1:100 dilution of Protein Controls S/L (REF NCPP2L), S/M (REF NCPP2M) and S/H (REF NCPP2H) with Diluent (REF NDPP1), (example: 10 µl Protein Controls S/M µl Diluent).The confidence interval is the assigned value of Protein Controls S/L (REF NCPP2L), S/M (REF NCPP2M) and S/H (REF NCPP2H) in serum ± 20%.. 6

7 CALCULATION OF RESULTS The evaluation of samples is automatic and the results are elaborated by means of a logit-log function. NORMAL VALUES The Total Protein values reported below are indicative. We suggest that each laboratory establish its own normal range: Protein Serum Urine CSF Total Protein g/l <100 mg/l mg/dl ASSAY PERFORMANCE SPECIFICITY Trichloroacetic Acid solution gives a precipitation of all proteins in the sample. SENSITIVITY The sensitivity of the assay is established by the lower limit of the reference curve and depends therefore upon the concentrations of the proteins in the calibrator. Typical measuring ranges are given in the Delta Nephelometer instruction manual. PRECISION Precision was evaluated upon intra- and inter-assay variability. Protein Intra-assay Inter-assay Total Protein (serum) n repl. Mean value [g/l] CV % n repl Mean value [g/l] CV % Serum Serum Protein Intra-assay Inter-assay Total Protein (urine) n repl. Mean value [mg/l] CV % n repl Mean value [mg/l] CV % Urine Urine METHOD COMPARISON 7

8 Serum was assayed with Radim reagent to Total Protein (y). These results were confronted with a reference nephelometric system(x). Correlation results yielded the following data: Protein Linear regression Coeff. of correlation n samples Total Protein (serum) y = 0.89x Total Protein (urine) y = 0.69x LIMITS OF THE ASSAY Turbidity or particles can interfere with the assay. Any particles formed due to serum samples not completely coagulated or proteinic denaturation samples must be removed by centrifugation. Due to technical manufacturing reasons and/or aged samples the results obtained for control samples and inter-laboratory survey samples may differ depending on the assay method used. It may therefore be necessary to assess these results in relation to method-specific target values. M446 - Rev.3 Maggio 2009 RADIM SpA - Via del Mare, Pomezia (Roma) Italia Tel.: 0039/06/ Fax: 0039/06/ ; National Order Entry: 0039/06/ ; Export Dept.: 0039/06/ ; Customer Care: 0039/06/ ; 8