ART. 1 OGGETTO ART. 2 OFFERTA

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1 REGIONE AUTONOMA DELLA SARDEGNA AZIENDA UNITA SANITARIA LOCALE N 1 SASSARI CAPITOLATO SPECIALE D APPALTO PER LA FORNITURA IN REGIME DI SERVICE DI SISTEMA DI ANALISI PER L ESECUZIONE DI TEST IN BIOLOGIA MOLECOLARE. ART. 1 OGGETTO Il presente capitolato disciplina la fornitura triennale di sistemi di analisi per l esecuzione di esami in biologia molecolare, da destinare al Laboratorio del Presidio ospedaliero di Sassari. Per sistema s'intende il complesso unitario dei beni (strumentali e di consumo) necessario all'esecuzione dei test di laboratorio indicati nel presente capitolato. La metodica richiesta, le specifiche per singola determinazione ed il numero delle determinazioni richieste sono descritte nell allegato A che fa parte integrante del presente Capitolato, tenuto conto dell attuale assetto istituzionale (Reparti Ospedalieri e Universitari).. I quantitativi messi in gara e indicati nell elenco, per tipo e per numero sono presunti e non tassativi per cui l eventuale aggiudicazione di tutta o parte delle voci oggetto della presente gara non impegna l'amministrazione ad emettere ordinativi di fornitura, in quanto gli approvvigionamenti verranno disposti esclusivamente sulla base delle effettive necessità operative delle strutture interessate. L aggiudicatario, pertanto, dovrà somministrare solo quelle quantità che gli verranno richieste, senza sollevare eccezioni, fermo restando quanto stabilito nel Capitolato Generale d Appalto, art. 3. La fornitura dovrà comprendere: a) la locazione della strumentazione, ove prevista, adeguata al carico di lavoro richiesto comprensiva del servizio d'assistenza necessaria a garantire la funzionalità della stessa; b) la somministrazione dei relativi reagenti e di tutti i materiali di consumo occorrenti per l esecuzione degli esami richiesti. ART. 2 OFFERTA L offerta, in cifre e in lettere, presentata secondo le modalità indicate successivamente, dovrà contenere i prezzi unitari riguardo a: 1. costo della locazione della strumentazione, con indicazione del canone complessivo annuo comprensivo dell assistenza tecnica full risk e del valore degli strumenti ceduti in locazione; 2. costo dei reattivi e dei materiali di consumo con indicazione della percentuale di sconto applicata nel listino prezzi ufficiale

2 3. il prezzo complessivo della fornitura quantificato su base annua (prezzo unitario di ciascuna determinazione per il numero delle determinazioni richieste oltre al costo della locazione degli strumenti), in relazione ai carichi di lavoro presunti indicati; Ai fini della successiva fatturazione dovrà essere specificato il prezzo unitario delle confezioni o kit necessari per l esecuzione degli esami, così come descritto nella scheda tecnica n 2 ricordando che l importo complessivo delle confezioni da fornire per l esecuzione delle determinazioni previste deve essere pari all importo complessivo ottenuto dal numero delle determinazioni previste in Capitolato per il prezzo unitario di ciascuna di esse. Gli importi dovranno essere comprensivi di tutte le spese per consegna presso il centro analisi interessato, dei reagenti, della strumentazione proposta, nonché della installazione e collaudo e assistenza tecnica applicativa e scientifica. L offerta, a pena di esclusione, deve comprendere tutti i parametri richiesti. Non sono ammesse offerte condizionate od espresse in modo indeterminato o con semplice riferimento ad altra offerta; dovrà essere presentata inoltre una sola offerta, pertanto l offerta che presenti delle alternative sarà esclusa dalla gara. L accettazione del presente capitolato presuppone la piena conoscenza dei siti dove devono essere installate le apparecchiature, al fine di poter verificare la possibilità di eventuali spese di installazione. Il prezzo offerto è soggetto a revisione periodica ai sensi dell articolo 44 della Legge 724/94. La validità dell'offerta non deve essere inferiore a 120 giorni dalla data della gara al fine di consentire alla Azienda l'adozione degli atti necessari alla aggiudicazione nei termini di validità dell'offerta. MODALITA DI PRESENTAZIONE DELL OFFERTA L'offerta economica, redatta in bollo secondo le indicazioni di cui all art. 2, deve contenere a pena di esclusione: la sottoscrizione del titolare della Ditta o del suo mandatario speciale o del rappresentante legale con la firma leggibile apposta per esteso dal sottoscrittore; deve essere contenuta in busta chiusa con ceralacca e controfirmata sui lembi di chiusura ed in essa non devono essere contenuti altri documenti. La busta contenente l offerta economica deve essere a sua volta racchiusa in un plico di formato più grande, ed anch'esso, a pena di esclusione, deve giungere alla Commissione chiuso con ceralacca e controfirmato sui lembi di chiusura; deve essere confezionato, comunque, in modo tale da non consentire effrazioni da parte di chicchessia e deve contenere (oltre alla busta dell'offerta) i seguenti documenti: a) dichiarazione, redatta secondo le forme del D.P.R. 28/12/0 n 445, da parte del fornitore

3 interessato dalla quale risulti: 1) di aver preso visione dei capitolati speciale e generale d appalto e dei relativi allegati e di accettare incondizionatamente gli stessi in ogni loro parte; 2) di non trovarsi in alcuna delle condizioni d esclusione previste dal D. Lg. n 358/92. art. 11, così come modificato dal D.Lg. n 402/98 3) di non trovarsi nelle condizioni di incapacità a contrarre con la P.A. ai sensi dell art. 120 della Legge 24/11/81 n 689; 4) di essere in regola, ove dovuto, con le norme che disciplinano il diritto al lavoro dei disabili di cui alla Legge n 68 del 12/03/1999, ovvero, di non essere tenuta all osservanza della predetta Legge avendo nel proprio organico meno di 15 dipendenti e/o di avere da 15 a 35 dipendenti senza aver effettuato nuove assunzioni dopo il 18/01/0; b) schede tecniche dei prodotti offerti e della strumentazione proposta in locazione, debitamente sottoscritte al pari dell'offerta con le referenze tecnico scientifiche così come precisato nell allegato A del presente capitolato; c) depliant illustrativi; d) copia dell offerta senza prezzi; e) certificato d iscrizione alla Camera di Commercio o, per le imprese straniere, iscrizione ad analoghi organismi o registri professionali negli Stati di residenza, da cui risulti l abilitazione (attività esercitata) alla produzione e/o al commercio di materiali oggetto della gara, nonché i nominativi del legale rappresentante, amministratore delegato, procuratori ecc. Tale certificazione potrà essere sostituita, con uguali contenuti, da dichiarazione redatta secondo le forme del D. P.R. 28/12/0 n 445. f) idonea capacità finanziaria ed economica, con preciso riferimento alle obbligazioni inerenti l appalto in oggetto, da attestare mediante dichiarazione di un Istituto bancario; g) descrizione della propria struttura organizzativa e distributiva sia sul piano amministrativo sia su quello tecnico con particolare riferimento all assistenza tecnica proposta; in particolare la ditta dovrà assicurare l assistenza tecnica e la manutenzione ordinaria e straordinaria quando necessario, dovrà essere indicato il centro di assistenza cui fare riferimento, i tempi di intervento dalla chiamata e la supplenza con strumentazione analoga, nel caso la risoluzione del guasto superasse le 24 ore, a totale e completo carico della ditta. Si ricorda che le dichiarazioni personali sostitutive di documenti comprovanti stati e fatti a conoscenza del dichiarante, devono essere accompagnate, qualora la sottoscrizione non sia autenticata, da fotocopia di un documento di identità personale in corso di validità. La cauzione definitiva dovrà essere presentata dalla ditta aggiudicataria al momento della stipula del contratto, a garanzia dell esatta esecuzione dello stesso ed è stabilita nella misura del 5% dell'importo effettivamente appaltato. L omessa presentazione dei documenti richiesti di cui alle precedenti lettere da a) a g) o la

4 presentazione degli stessi in modo difforme da quello richiesto comporterà l automatica esclusione dalla gara. Sul plico (contenente i documenti di cui ai punti precedentemente indicati e la busta dell'offerta economica) dovrà essere indicato, a pena di esclusione dalla gara, il nome e la ragione sociale della Ditta concorrente e dovrà essere scritto in maniera leggibile e chiara: OFFERTA PER L ASTA PUBBLICA DEL 27/04/6 PER LA FORNITURA IN SERVICE DI SISTEMA DI ANALISI PER L ESECUZIONE DI TEST IN BIOLOGIA MOLECOLARE Analoga dicitura si richiede sulla busta interna dell'offerta. Il plico contenente la busta dell'offerta economica ed i documenti prescritti dovrà giungere alla Azienda U.S.L. 1 Ufficio Protocollo - Via Monte Grappa 82 - Sassari - non più tardi delle ore 13 del giorno 24/04/6. Oltre gli anzidetti termini perentori non sarà ritenuta valida altra offerta anche se aggiuntiva o sostitutiva di una precedente. ART. 3 AGGIUDICAZIONE L aggiudicazione sarà effettuata, lotto per lotto, secondo quanto previsto dal D.L. 24/07/92 n 358, articolo 19 - comma 1 - lettera b, così come modificato dal D.Lg. n 402/98 a favore del concorrente che avrà presentato l'offerta più vantaggiosa in base ai seguenti elementi qualità/prezzo. PREZZO punti 40 al prezzo più basso complessivamente considerato su base annua per l intero lotto, e punteggio inversamente proporzionale agli altri prezzi. QUALITA : punti 60 max, in base agli elementi desunti dalle schede tecniche relativamente a: qualità analitiche e caratteristiche dei reagenti max punti 20 caratteristiche tecniche del sistema per il lavoro che dovrà svolgere nel contesto operativo max punti 30 qualità dei servizi di assistenza tecnica, applicativa e referenze tecnico scientifiche max punti 10 L Amministrazione si riserva la facoltà di richiedere a tutte o ad alcune ditte concorrenti, la presentazione entro un breve termine perentorio di eventuali chiarimenti relativamente alla descrizione contenuta nelle schede tecniche. L aggiudicazione è immediatamente vincolante per la ditta, mentre lo sarà per l Azienda solo dal momento che la relativa delibera diverrà esecutiva ai sensi di legge. Il giorno fissato per la gara si procederà all'apertura dei plichi e sulla base della documentazione inviata, il Presidente della Commissione dichiarerà l'ammissione (o l'esclusione) delle Ditte concorrenti. Il Presidente, procederà quindi alla verifica della regolarità delle schede tecniche e depliant; dopo di che la Commissione valuterà le schede tecniche in base

5 ai parametri sopraindicati. Nella stessa giornata od in data successiva che potrà essere comunicata nel corso della seduta, si procederà in seduta pubblica all apertura delle offerte economiche ed all aggiudicazione. L'Amministrazione si riserva, a suo giudizio insindacabile, la più ampia potestà discrezionale che le consentirà di far luogo o meno all'aggiudicazione, così come di riaprire i termini per la partecipazione o di rinnovare la gara, senza che le Ditte partecipanti possano vantare pretese o diritti di alcuna natura. ART. 4 - ESECUZIONE DELLA FORNITURA La consegna ed installazione delle apparecchiature costituenti i diversi sistemi diagnostici oggetto della presente gara avverrà a cure e spese dell'aggiudicatario entro 30 giorni dalla comunicazione dell avvenuta aggiudicazione ed il relativo collaudo dovrà essere effettuato entro 20 giorni dall installazione. Sono a carico della ditta le spese per eventuali opere edili e di impiantistica occorrenti per l'installazione. Alla scadenza del contratto l'apparecchiatura verrà restituita alla ditta. I quantitativi dei materiali occorrenti dovranno essere ripartiti in più consegne annuali, secondo il confezionamento e secondo accordi operativi con i laboratori analisi interessati. Il numero delle determinazioni indicate non è tassativo perciò il fornitore è tenuto a fornire il materiale necessario nei quantitativi realmente occorrenti. Ed inoltre ogni laboratorio potrà, per esigenze di servizio, disattivare, modificare le quantità e qualità d alcuni parametri richiesti, per poter inserire ulteriori parametri non indicati nella programmazione o immessi sul mercato successivamente all aggiudicazione; tutto ciò, previa autorizzazione dell Amministrazione, e conferma o miglioramento per 1 Azienda USL delle condizioni di gara (uguale o maggiore percentuale di sconto rispetto a quella applicata in sede di gara). L'accettazione della merce non solleva il fornitore dalle proprie obbligazioni in ordine ai difetti ed imperfezioni, ai vizi apparenti ed occulti delle merci consegnate e non potuti rilevare all atto della consegna, ma accertati in seguito in qualsiasi momento. La merce contestata sarà messa a disposizione del fornitore per il ritiro e dovrà essere sostituita entro 4 giorni dalla comunicazione. La ditta potrà proporre la sostituzione delle apparecchiature e dei materiali con altri nuovi che eventualmente ponga in commercio durante la vigenza del contratto e che presentino migliori od uguali caratteristiche di rendimento e funzionalità rispetto a quelli aggiudicati alle stesse condizioni economiche. ART. 5 - CONTESTAZIONI, CONTROVERSIE E PENALITA' Per ogni giorno di ritardo nelle consegne, sia quelle programmate che quelle in sostituzione, l'azienda potrà applicare una penale pari all'1% del valore della merce non consegnata, fatto salvo il riconoscimento danni derivanti dalla mancata consegna dei materiali. L'importo della penale verrà

6 recuperato sulle prime fatture in liquidazione. L'Azienda si riserva altresì la facoltà di risolvere il contratto dopo due contestazioni scritte per inadempienze compiute dalla ditta nel corso dell'anno, sia per quanto attiene la fornitura del materiale che per quanto riguarda l'assistenza tecnica. ART. 6 - CONTRATTO, VARIAZIONI, FATTURE Il contratto avrà durata di tre anni dalla data di collaudo e messa a regime del sistema che dovrà risultare da apposito verbale firmato dal Responsabile del laboratorio interessato.il pagamento delle fatture avverrà entro 60 giorni dal ricevimento e le stesse, relativamente al materiale diagnostico, dovranno essere emesse per il numero dei kit volta per volta forniti con i relativi codici di cui alla lettera e 2 scheda dell allegato A. ART. 7 FORO COMPETENTE Per ogni controversia il foro competente è quello di Sassari.

7 REGIONE AUTONOMA DELLA SARDEGNA AZIENDA UNITA SANITARIA LOCALE N 1 SASSARI ALLEGATO A AL CAPITOLATO SPECIALE D APPALTO PER LA FORNITURA IN REGIME DI SERVICE DI SISTEMA DI ANALISI PER L ESECUZIONE DI ESAMI IN BIOLOGIA MOLECOLARE LOTTO N 1 Fornitura in regime di service di un sistema di analisi per applicazioni speciali di biologia molecolare: Caratteristiche del lotto: Le metodiche e materiali proposti devono essere perfettamente compatibili con tutte le strumentazioni e le attrezzature già presenti nel laboratorio richiedente, le prestazioni analitiche dichiarate devono corrispondere con quelle effettivamente riscontrate presso il laboratorio. Tutte le metodiche proposte dovranno essere preventivamente testate presso il laboratorio, mediante fornitura di campioni relativi alle sotto indicate determinazioni, quantità adeguata per la valutazione delle prestazioni e della adattabilità alla routine del laboratorio: Applicazione Numero determinazioni da campionare amplificazione HCV RNA sequenza 5 terminale per genotipizzazione amplificazione quantitativa BCR-ABL (p ) sensibilità 1 cellula, con pre-amplificazione, sonde taqman amplificazione quantitativa PSA sensibilità 1 cellula, richiesta pre-amplificazione, sybr-green amplificazione quantitativa CK20 sensibilità 1 cellula, richiesta pre-amplificazione, sybr-green Le strumentazioni proposte devono avere caratteristiche e prestazioni uguali o superiori alle strumentazioni già presenti nel laboratorio e devono essere nuove di fabbrica (non ricondizionate). Le metodiche devono essere eseguibili su entrambe le strumentazioni (quelle offerte e quelle gia presenti nel laboratorio richiedente) senza rendere necessario alcun adattamento delle metodiche operative Tutte le applicazioni presentate dovranno essere descritte nei dettagli (posizione e sequenze dei primers e delle sonde, descrizione delle mutazioni ricercate, etc) e dovranno essere derivate dalla letteratura scientifica più recente. Le fonti bibliografiche da cui sono state derivate le applicazioni metodologiche dovranno essere indicate ed i lavori scientifici per esteso dovranno essere presentati con la documentazione tecnica Nel corso della fornitura il richiedente potrà richiedere tutte le modifiche necessarie alle metodiche per migliorarne le prestazioni in base agli aggiornamenti della letteratura scientifica. Sempre in base agli aggiornamenti della letteratura scientifica potrà inoltre richiedere nuove applicazioni

8 Elenco degli strumenti presenti nel Laboratorio, settore di Biologia Molecolare: Sequenziatore automatico di DNA: ABI PRISM 310 GENETIC ANALYZER - Applied Biosystems Termociclatore per PCR Quantitativa: ABI PRISM 7700 SEQUENCE DETECTOR - Applied Biosystems Biorobot : MULTIPROBE II PLUS Perkin Elmer Spettrofotometro UV/visibile: ULTROSPEC3PRO Amersham Biosciences A) Sistemi di estrazione DNA da cellule e siero o da virus con le seguenti caratteristiche: A1) Sistema di estrazione di DNA da cellule del sangue. Il metodo deve consentire l ottenimento di DNA di elevata purezza a partire da sangue intero (da 0.2 a 0.5ml di sangue). Il valore minimo del rapporto 260/280 deve essere pari a 1.8. Il metodo deve permettere l ottenimento di DNA puro e non frammentato per consentire il suo sequenziamento e la sua conservazione a lungo termine. La metodica non deve quindi basarsi su trattamenti che possano danneggiare il DNA (alte temperatura, miscelazioni vigorose, filtrazioni ad alto flusso, etc). Tempo di esecuzione inferiore a 45. Numero estrazioni: 250 A2) Sistema di estrazione del DNA rapido (tempo di esecuzione inferiore a 15 ) per l estrazione da un piccolo numero di cellule (-.000 cellule). Il metodo deve essere semplice e one tube per evitare la dispersione del campione. La qualità del DNA deve essere compatibile con le metodiche per la ricerca delle mutazioni basate sulla PCR. Numero estrazioni: 150 A3) Sistema per l estrazione del DNA libero o microbico/virale dal siero o da altri liquidi corporei. La metodica deve avere una elevatissima efficienza di estrazione e purificazione, deve essere rapida e one tube. Nel caso del DNA microbico o virale deve consentire la rilevazione di meno di 50 copie di DNA. La purificazione del DNA si deve basare sul legame con resine ad elevatissima affinità. Numero estrazioni: B) Sistemi di estrazione RNA da cellule, da siero o da virus, con le seguenti caratteristiche: B1) Sistema di estrazione di RNA da cellule mononucleate, compreso di reagenti per la separazione delle cellule dal sangue, basato su estrazione con fenolo acido/cloroformio e cattura del RNA su resina. Il metodo deve consentire l ottenimento di RNA di elevata purezza in un range da a di cellule. Deve essere dichiarato il grado di purezza dell RNA e deve essere mostrato il risultato di una separazione elettroforetica dell RNA estratto. L RNA purificato deve essere stabile ed RNAsi free. Il mezzo finale di solubilizzazione deve contenere inibitori delle RNAsi. Deve essere consentito di poter stabilizzare l RNA cellulare, mediante l aggiunta di una opportuna soluzione, per almeno 12 mesi prima di procedere all estrazione dell RNA. Deve essere evidenziato a che punto si può conservare l RNA estratto dalle cellule prima di procedere alla purificazione dell RNA. Numero estrazioni: 500

9 B2) Sistema per l estrazione del RNA virale dal siero o dai tessuti. La metodica deve avere una elevatissima efficienza, deve essere rapida e one tube. Nel caso del RNA virale deve consentire la rilevazione di meno di 50 copie di RNA. La purificazione del RNA si deve basare sul legame con resine ad elevatissima affinità. L RNA purificato deve essere stabile ed RNAsi free. Il mezzo finale di solubilizzazione deve contenere inibitori delle RNAsi Numero estrazioni: 400 C) Sistemi di retrotrascrizione mrna e RNA virale C1) Metodica rapida di retrotrascrizione del mrna basato sul priming mediante polit o random examers, La miscela di reazione deve essere pronta all uso e deve contenere inibitori delle RNAsi. Il metodo deve consentire l ottenimento di cdna a partire dall RNA estratto da a di cellule in circa trenta minuti. Il volume finale in cui è diluito il cdna non deve essere superiore a 20ul. Il cdna deve essere RNAsi free deve essere stabile per almeno 12 mesi. Numero retrotrascrizioni: 0 C2) Metodica rapida di retrotrascrizione del RNA virale basato sul priming random examers o primers specifici, Ia miscela di reazione deve essere pronta al uso e deve contenere inibitori delle RNAsi. Il metodo deve consentire l ottenimento di cdna a partire dall RNA estratto da 20 a di cellule in circa trenta minuti. Il volume finale in cui è diluito il cdna non deve essere superiore a 20ul. Il cdna deve essere RNAsi free deve essere stabile per almeno 12 mesi. Numero retrotrascrizioni: D) Miscele di Amplificazione: Miscela di reazione pronta all uso contenente primers, sonde fluorescenti, DNA polimerasi termostabile, dntps, e tutti i reattivi per poter eseguire delle reazioni di amplificazione del DNA o real time PCR con le seguenti caratteristiche: sensibilità: 10 copie di DNA linearità: almeno 5 ordini di grandezza rivelazione delle quantità minime specificate entro il 35 ciclo di reazione sistema di pre-amplificazione per le metodiche ove si richieda elevata sensibilità possibilità di esecuzione della real time PCR mediante sonde fluorescenti e sybr-green per prevenuire le cross-contaminazioni, le metodiche di pre-amplificazione non devono estendersi oltre il 20 ciclo e devono essere decontaminabili mediante iso-psoraleni le miscele di reazione dovranno essere aliquotate in quantità sufficienti ad eseguire 10 amplificazioni Applicazione amplificazione HCV RNA sequenza 5 terminale per genotipizzazione amplificazione HBV DNA sequenze responsabili alla resistenza alla Lamivudina amplificazione CMV DNA sequenze responsabili alla resistenza al Ganciclovir e Foscarnet amplificazione quantitativa CMV DNA sensibilità 10 copie, sonde taqman o beacon amplificazione quantitativa HSV tipi: sensibilità 50 copie, sonde taqman o beacon,, Numero determinazioni in duplicato

10 amplificazione quantitativa EBV sensibilità 50 copie, sonde taqman o beacon amplificazione quantitativa Enterovirus sensibilità 50 copie, sonde taqman o beacon amplificazione quantitativa BCR-ABL (p ) sensibilità 1 cellula, con pre-amplificazione, sonde taqman amplificazione quantitativa BCL2 sensibilità 10 cellule, sonde taqman amplificazione quantitativa PML-RARA sensibilità 1 cellula, richiesta pre-amplificazione, sonde taqman amplificazione quantitativa E2A-PBX1 sensibilità 10 copie, richiesta pre-amplificazione, sonde taqman amplificazione quantitativa MLL-AF4 sensibilità 10 copie, richiesta pre-amplificazione, sonde taqman amplificazione quantitativa TEL-AML1 sensibilità 10 copie, richiesta pre-amplificazione, sonde taqman amplificazione quantitativa SIL-TAL1 sensibilità 10 copie, richiesta pre-amplificazione, sonde taqman amplificazione quantitativa CBFB-MYH11 sensibilità 10 copie, richiesta pre-amplificazione, sonde taqman amplificazione quantitativa AML1-ETO sensibilità 10 copie, richiesta pre-amplificazione, sonde taqman amplificazione quantitativa WT1 sensibilità 10 copie, richiesta pre-amplificazione, sonde taqman o beacon amplificazione quantitativa PSA sensibilità 1 cellula, richiesta preamplificazione, sybr-green amplificazione quantitativa CK20 sensibilità 1 cellula, richiesta pre-amplificazione, sybr-green amplificazione quantitativa DNA sierico totale sensibilità: 1 pm, sybr-green o sonde taqman E) Mix di reazione, sonde fluorescenti (beacons o FRET) e primers per genotipizzazioni e ricerca di SNPs mediante real time PCR: Miscela di reazione pronta all uso contenente primers, sonde fluorescenti, DNA polimerasi termostabile, dntps, e tutti i reattivi per poter eseguire delle reazioni real time PCR per la evidenziazione di mutazioni. Ricerca delle mutazioni mediante sonde fluorescenti tipo beacons o taqman, ove è necessario evidenziare più di una mutazione sullo stesso frammento amplificato si dovranno utilizzare sonde marcate con differenti fluorofori Ove si debbano evidenziare più mutazioni in una regione ristretta si dovranno utilizzare sonde FRET associate a curva di melting Rivelazione della mutazione entro il 30 ciclo di reazione le miscele di reazione dovranno essere aliquotate in quantità sufficienti ad eseguire 10 amplificazioni

11 Applicazioni genotipizzazione, su frammenti pre-amplificati, zona 5 term HCV: sonde per tipo 1, 1a, 1b, 2, 3, 4 ricerca, su frammenti pre-amplificati di HBV DNA, delle mutazioni responsabili alla resistenza alla Lamivudina ricerca, su frammenti pre-amplificati di CMV DNA, delle mutazioni responsabili alla resistenza al Ganciclovir e Foscarnet ricerca delle mutazioni responsabili alla resistenza alla rifampicina e isoniazide in M tuberculosis Numero determinazioni in duplicato 300 ricerca più frequenti mutazioni responsabili dell emocromatosi ricerca più frequenti mutazioni sui geni del fattore II e fattore V della coagulazione ricerca delle più frequenti mutazioni sui geni Apo E e Apo B responsabili di aumentato rischio cardiovascolare ricerca più frequenti mutazioni responsabili della fibrosi cistica in Sardegna ricerca mutazioni sul gene per MTFRH ricerca delle più frequenti mutazioni sui geni BRCA1-2 associate al tumore della mammella in Sardegna N.B.: per quanto riguarda i punti d-e il numero di determinazioni è indicativo e potrà essere intercambiabile tra le diverse applicazioni. Le ditte potranno offrire anche altri reagenti presenti nel loro listino per la diagnostica molecolare, che potranno essere acquistati in aggiunta a quelli previsti dal capitolato, in caso di quesiti diagnostici particolari o di nuove esigenze cliniche. F) Plasmidi e linee cellulari. Plasmidi o linee cellulari per tutte le applicazioni richieste nei punti d ed e. I plasmidi dovranno essere quantificati per consentire la taratura delle misure Nel caso di ricerca di mutazioni è necessario fornire il plasmide per il wild type e per il mutato. Nel caso della linea cellulare, dovrà essere fornito cdna estratto da cellule che esprimono gli mrna che dovranno essere quantificati. Le cellule dovranno essere quantificate per consentire la taratura delle misure in riferimento al numero di cellule Numero totale misure 30 G) Estrazioni di DNA/RNA da cellule e siero o da virus da effettuare con Biorobot MULTIPROBE II PLUS PERKIN ELMER preferibilmente con l utilizzo di particelle magnetiche. Le metodiche di cui sopra devono essere eseguibili con il Biorobot, consentire l estrazione di un n. di copie di DNA/RNA non inferiore a e devono garantire l integrità degli acidi nucleici purificati. Numero totale estrazioni presunte 800 H) Materiale annuale per il sequenziamento: Tutto il materiale di consumo per il sequenziamento di DNA con Abi Prism 310 (Applied Biosystem) (Part.n , ,401956,401955,401674,402824, ) Una Glass Syringes P/N Kloehn LTD Quattro confezioni di Better buffer 3BB-10-Box B (Microzone Limited) N 40 primers di cui verranno indicate le sequenze

12 Materiale per la produzione e la purificazione degli amplificati da sequenziare Numero totale sequenziamenti: 800 Strumentazione richiesta per il service di Biologia Molecolare lotto 1: n.1 thermal cycler real time con filtri per almeno 4 emissioni fluorescenti, dotato di computer e stampante; possibilità di effettuare gradienti termici all interno della piastra, possibilità di eseguire programmi di discriminazione allelica e software per il calcolo, la gestione ed archiviazione dei risultati con possibilità di interfacciamento al sistema di gestione dati del laboratorio. n. 3 Thermal cycler con tappo riscaldato n. 1 microcentrifuga n. 1 blocco termostatato 20- C n. 2 set di pipette regolabili Gilson (20,, 0 ul) n. 1 apparato per la separazione elettroforetica degli acidi nucleici e visualizzazione mediante UV n. 1 macchina fotografica per fotodocumentazione dei gel E inoltre richiesta: disponibilità di un sequenziatore DNA che garantisca l erogazione delle analisi nel caso di malfunzionamento del sequenziatore di proprietà del laboratorio. disponibilità di un MALDI-TOF per i controlli di qualità delle sonde. ASSISTENZA TECNICO-SCIENTIFICA Assistenza full risk con possibilità di sostituzione della strumentazione in 48 ore nel caso di perdurare del fermo macchina. La sede deve essere obbligatoriamente a Sassari e deve fornire personale specializzato nella messa a punto di nuove applicazioni diagnostiche (sequenziamento, genotipizzazioni, ricerca SNPs mediante real time PCR, ricerca della malattia minima residua, etc.) per almeno 400/ore anno. La struttura di assistenza dovrà permettere una serie di controlli di qualità sui materiali per garantirne la specificità e la purezza (es. analisi in HPLC ed in spettrometria di massa delle onde fluorescenti). Dovrà essere descritta la struttura di assistenza esistente: la sede, le strumentazioni disponibili e le specializzazioni del personale dedicato all assisteza tecnico-scientifica. OFFERTA TECNICA Per i reagenti ed altro materiale di consumo 1. Scheda riassuntiva contenente per ciascun prodotto offerto: 1. Nome commerciale del prodotto, relativo codice 2. Composizione chimica, Codici CAS e formulazione dei principali componenti 3. Confezionamento in ml e relativa pezzatura 4. Caratteristiche di pericolosità 5. Principali caratteristiche tossicologiche 6. Codice CER dei rifiuti 7. Modalità di smaltimento dei rifiuti 8. Tipologia e quantità di rifiuti prodotti per determinazione 9. Condizioni di conservazione e shelf life 10. Numero di determinazioni per singola confezione dichiarato (numero teorico)

13 11. Quantità di confezioni di reagente ed altri consumabili necessari all esecuzione del numero di determinazioni richieste 2. Documentazione tecnica: Schede tecniche contenenti tutte le informazioni richieste nel capitolato speciale ed inoltre: 1. composizione del reagente e codici CAS 2. descrizione dettagliata delle modalità di utilizzazione 3. Informazioni per lo smaltimento dei rifiuti e codice CER 4. condizioni di conservazione 5. caratteristiche delle prestazioni analitiche 6. tipo di campione da analizzare Schede di sicurezza (MSDS) Lavori scientifici per esteso che descrivono le metodiche presentate, citati nelle schede tecniche Dichiarazione che i materiali di consumo ed i reagenti sono totalmente compatibili con le strumentazioni già presenti nel laboratorio Dichiarazione di avvenuta consegna dei reattivi presso il laboratorio del richiedente e di esito positivo delle prove effettuate con le strumentazioni già presenti nel laboratorio. La dichiarazione dovrà essere controfirmata dal responsabile del laboratorio richiedente Per le apparecchiature Il tipo di attrezzature che si intende fornire Le caratteristiche tecniche e funzionali delle stesse, allegando depliants illustrativi, schede tecniche manuali ed altro materiale utile ad una valutazione delle caratteristiche Protocolli operativi delle varie applicazioni richieste Attestazione che l apparecchiatura richiesta è conforme alle norme di sicurezza CEI Planimetria del laboratorio richiedente con indicazione degli ingombri e del posizionamento proposto delle strumentazioni offerte Modalità di smaltimento dei rifiuti LOTTO N 2 VIROLOGIA MOLECOLARE. (HCV RNA) Si richiedono n.2 sistemi diagnostici in service costituiti da reattivi, idonea strumentazione e relativa assistenza tecnica, per il dosaggio qualitativo e per il dosaggio quantitativo della viremia HCV. Carichi di lavoro: HCV.RNA qualitativo HCV RNA quantitativo Numero totale determinazioni Numero totale determinazioni 1 test/anno 1400 test/anno La frequenza di esecuzione di tale test è settimanale; le determinazioni dovranno poter essere eseguite da diversi operatori, quindi dovranno essere di facile e rapida esecuzione. La ditta offerente dovrà calcolare le quantità di tutti i reagenti, dei reagenti ausiliari, di tutto il materiale di consumo, dei calibratori, dei controlli e di quantaltro necessario per l esecuzione dei test secondo le frequenze indicate, e quotarli opportunamente nell offerta economica. Caratteristiche indispensabili richieste per i reagenti.

14 Si richiedono, pena l esclusione dalla gara, le seguenti caratteristiche tecniche indispensabili per i reagenti: 1. il prodotto offerto deve essere riconosciuto ed accreditato a livello internazionale per il monitoraggio terapeutico, con allegato elenco degli utilizzatori in ambito nazionale. 2. elevata sensibilità analitica (per HCV RNA qualitativo sensibilità di almeno 50 copie/ml, per HCV RNA quantitativo almeno 4000 copie/ml) 3. presenza di un controllo di reazione interno 4. estrazione degli acidi nucleici automatizzata o assente 5. ampio range dinamico 6. eguale quantificazione dei 6 principali genotipi virali 7. affidabili procedure di riduzione e prevenzione della contaminazione (possibilità di utilizzo di un unico ambiente per l esecuzione del test quantitativo) Caratteristiche indispensabili richieste; sistemi quantitatitvi: 1. apparecchiature di ingombro ridotto e con buona automazione complessiva 2. unico strumento per le fasi di incubazione, lavaggio e lettura risultati per il test quantitativo 3. automazione delle fasi di lettura e refertazione senza intervento dell operatore 4. produttività modulabile, in base alle reali esigenze del Laboratorio, da un minimo di 12 campioni per seduta ad un massimo di oltre 150 campioni 5. manutenzione automatica della strumentazione Caratteristiche indispensabili richieste; sistemi qualitativi: 6. sistema modulare 7. automazione delle fasi di lettura e refertazione senza intervento dell operatore 8. produttività modulabile, in base alle reali esigenze del Laboratorio, da un minimo di 4 campioni per seduta a un massimo di campioni circa per seduta 9. manutenzione di rapida esecuzione Materiale di consumo. Nell offerta deve essere incluso tutto il materiale di consumo necessario per l esecuzione delle metodiche, come pipette repeater tipo-eppendorf con appositi puntali da 0.5 ml, 2.5 ml, 12.5ml, pipetta automatica multicanale con relativi puntali, eventuali puntali con filtro per microvolumi, cartucce per stampanti. LOTTO N. 3. VIROLOGIA MOLECOLARE. (HBV DNA) Si richiedono n. 1 sistema diagnostico in service costituito da reattivi, idonea strumentazione e relativa assistenza tecnica, per il dosaggio quantitativo della viremia HBV. Carichi di lavoro: HBV DNA quantitativo Numero totale determinazioni 800 test/anno La frequenza di esecuzione di tale test è settimanale; le determinazioni dovranno poter essere eseguite da diversi operatori, quindi dovranno essere di facile e rapida esecuzione e automatizzabili su MULTIPROBE II PLUS PERKIN ELMER di proprietà del Laboratorio (dovranno essere fornite le metodiche applicative).

15 La ditta offerente dovrà calcolare le quantità di tutti i reagenti, dei reagenti ausiliari, di tutto il materiale di consumo, dei calibratori, dei controlli e di quant altro necessario per l esecuzione dei test secondo le frequenze indicate, e quotarli opportunamente nell offerta economica. Caratteristiche indispensabili richieste per i reagenti. Si richiedono, pena l esclusione dalla gara, le seguenti caratteristiche tecniche indispensabili per i reagenti: 1. il prodotto offerto deve essere riconosciuto ed accreditato a livello internazionale per il monitoraggio terapeutico, con allegato elenco degli utilizzatori in ambito nazionale. 2. elevata sensibilità analitica (ampio range dinamico, da almeno 0 copie/ml a copie/ml) 3. presenza di un controllo di reazione interno per verificare una eventuale inibizione del campione e minimizzare il rischio di risultati falsi negativi 4. affidabili procedure di riduzione e prevenzione della contaminazione 5. flessibile e di facile utilizzo 6. eseguibile su micropiastra da 96 pozzetti Caratteristiche indispensabili richieste per le apparecchiature 1. Le apparecchiature dovranno essere di ingombro ridotto e con buona automazione complessiva. 2. automazione delle fasi di lettura e refertazione senza intervento dell operatore 3. produttività modulabile, in base alle reali esigenze del Laboratorio, da un minimo di 12 campioni per seduta ad un massimo di circa 84 campioni n.b. è preferibile che le determinazioni quantitative per HBV-DNA e HCV-RNA siano eseguibili sulla stessa strumentazione. Materiale di consumo. Nell offerta deve essere incluso tutto il materiale di consumo per l esecuzione delle metodiche, come pipette repeater tipo-eppendorf se necessarie (con appositi puntali da 0.5 ml, 2.5 ml, 12.5ml), pipetta automatica multicanale se necessarie con relativi puntali, eventuali puntali con filtro per microvolumi e micropiastre, cartucce per stampanti. 1 SCHEDA a) dettagliata descrizione della strumentazione che si intende fornire completa delle caratteristiche di funzionamento e delle prestazioni; b) In relazione alle funzioni ed esigenze esplicitate, è necessario che venga specificato, fra l'altro, il volume di ingombro ed il peso (allegare anche il depliant illustrativo); c) tipo e modalità di assistenza tecnica prevista, con indicazione della sede e tempi di intervento. La ditta dovrà assicurare l assistenza tecnica e la manutenzione straordinaria ed ordinaria, quando necessario, dovrà essere indicato il centro di assistenza cui fare riferimento con tempi di intervento non superiori alle 8 ore dalla chiamata durante tutti i giorni feriali, e la possibilità di supplenza con altri idonei mezzi, nel caso la risoluzione del guasto superasse le 48 ore solari, da mettere in opera nel tempo immediatamente successivo, a totale e completo carico della ditta. Deve essere precisato anche il tipo di assistenza applicativa che la ditta è in grado di prestare. In particolare, devono essere precisate le soluzioni per evitare l'inattività anche temporanea, in caso di avaria della apparecchiatura primaria offerta; d) ogni sistema deve prevedere anche l esecuzione di esami in urgenza, con sospensione temporanea della routine;

16 e) dichiarazione di conformità alle norme di sicurezza C.E.I. od altre norme internazionali ufficialmente riconosciute sulla sicurezza elettrica in laboratori di analisi cliniche. Si richiede che le ditte in indirizzo dichiarino: se operano in regime di qualità conforme agli standards della serie EN ISO forniscano le informazioni relative alla certificazione di parte terza del sistema di qualità, e nel caso in cui la ditta offerente sia stata certificata, si richiede copia del certificato al fine di conoscere l'ente terzo di certificazione, il numero di registrazione, la data di rilascio, lo standard di riferimento. Dichiarino l'avvenuta apposizione della marcatura CE relativa alla compatibilità elettromagnetica sulla strumentazione offerta; f) corso di formazione per il personale addetto. 2 SCHEDA Reattivi e materiali di consumo necessari per la realizzazione delle determinazioni richieste. Dovranno essere indicate: a) le caratteristiche analitiche (tecnico-scientifiche) del materiale diagnostico; b) le quantità richieste dei prodotti occorrenti per tali determinazioni; c) il nome della ditta produttrice; d) il tempo di validità del materiale dalla data di consegna e stabilità dello stesso dopo l'apertura/ricostituzione; e) il tipo di confezione proposta ed i relativi codici; f) le condizioni ottimali di conservazione; g) Volume dei reflui prodotti per ogni singolo esame e volume dei reflui prodotti per ogni ora di lavoro, codice CER del rifiuto prodotto; h) presenza o meno di eventuali sostanze tossiche e nocive previste dalla normativa vigente sugli scarichi dei rifiuti.