TETA-TEST REF TE20 20 M287 Rev. 06 03/2006
TETA-TEST DOSAGGIO IMMUNOCROMATOGRAFICO PER LA DETERMINAZIONE VISIVA DEGLI ANTICORPI ANTI TOSSINA TETANICA IN SIERO, PLASMA O SANGUE INTERO, QUALE AUSILIO PER L ACCERTAMENTO DELLO STATO IMMUNE PER USO DIAGNOSTICO IN VITRO APPLICAZIONI CLINICHE Il tetano è ancora oggi un problema a livello mondiale: diverse centinaia di migliaia di persone in tutto il mondo sono colpite ogni anno da questa infezione. La tossina tetanica, una potente tossina microbica prodotta dal Clostridium tetani, ha un peso molecolare di 150000 ed è formata da una catena pesante, che contiene il sito che si lega alle cellule nervose, e da una catena leggera, che si suppone contenga la frazione tossica della molecola. La tossina tetanica esercita la sua principale azione patogena a livello del sistema nervoso centrale inibendo il rilascio dei neurotrasmettitori. L immunizzazione di massa con il tossoide del tetano (la tossina inattivata con formalina) si è dimostrata pienamente efficace nel proteggere la popolazione dal tetano. La conoscenza dello stato di immunizzazione di una popolazione contro il tetano può avere applicazioni pratiche. Può essere utile nel controllare i protocolli di immunizzazione adottati e la persistenza dell immunizzazione. Può anche essere di aiuto ai medici del Pronto Soccorso nella scelta della corretta profilassi antitetanica per i pazienti a rischio di tetano. E generalmente riportato in letteratura che un paziente: - È poco o non-protetto quando il titolo di anticorpi anti-tetano nel siero è < 0.1 IU/mL - è sufficientemente protetto quando il titolo è > 0.1 IU/mL. PRINCIPIO DEL METODO TETA-TEST è un test rapido one-step basato sul principio dell immunocromatografia. Il metodo impiega una combinazione di tossoide del tetano adeso sulla fase solida e di tossoide del tetano coniugato con oro colloidale. Il campione di sangue, siero o plasma umano è aggiunto al pozzetto di reazione sulla piastrina, e sullo stesso pozzetto viene poi aggiunto il diluente. Il diluente scorre lungo la carta assorbente, trascinando il tossoide coniugato lungo la striscia cromatografica in cui si forma un complesso con le IgG anti-tetano eventualmente presenti nel campione. Questo complesso reagisce con il tossoide immobilizzato formando una linea rosa nella finestra T. M287 Rev.06 03/2006 Pag. 2/8
Se le IgG anti-tetano non sono presenti non si evidenzierà alcuna striscia di precipitazione. L eccesso di oro coniugato si lega ad un reagente di controllo immobilizzato nella finestra C formando una linea rosa che indica che il test è stato eseguito correttamente. REAGENTI CONTENUTI NEL KIT: PREPARAZIONE E STABILITA - I reagenti sono sufficienti per 20 test. - Il kit deve essere conservato tra 4 C e 30 C. Non congelare. - La data di scadenza di ciascun reagente è indicata sulla rispettiva etichetta. PT 20 piastrine: costituite da tossoide del tetano immobilizzato su supporto cromatografico e tossoide coniugato con oro colloidale, confezionate singolarmente in contenitore di alluminio con essiccante, pipetta in plastica monouso e lancetta monouso. DIL Tampone diluente: 1 flacone (5 ml) di PBS ph 7.2, detergente 0.1% Conservante: NaN 3 (0.05%). - Istruzioni per l uso. AVVERTENZE E PRECAUZIONI Per ottenere risultati corretti e riproducibili, è necessario osservare le seguenti norme: - Non mescolare reagenti di lotti differenti. - Non usare i reagenti dopo la data di scadenza. - Evitare accuratamente contaminazioni tra campioni. - Rispettare i tempi di incubazione descritti nel procedimento operativo. Per evitare contaminazioni personali ed ambientali, è necessario osservare le seguenti norme di sicurezza: - Utilizzare guanti monouso durante la manipolazione di materiale potenzialmente infetto e durante il dosaggio. - Non pipettare i reagenti con la bocca. - Non fumare, mangiare, bere o applicare cosmetici durante l'esecuzione del dosaggio. - I materiali di origine umana, eventualmente utilizzati per la preparazione dei reagenti del presente kit, sono stati saggiati per la presenza di HBsAg, anti-hiv e anti-hcv e sono risultati ripetutamente negativi. Comunque nessun test attualmente disponibile garantisce l'assenza degli agenti responsabili della sindrome da immunodeficienza acquisita, dell'epatite B ed epatite C. Tali reagenti e tutti i campioni di siero umano devono essere considerati potenzialmente infettivi. - Evitare la produzione di schizzi e la formazione di aerosol; in tal caso, ripulire accuratamente con ipoclorito di sodio ad una concentrazione del 3%. Il mezzo M287 Rev.06 03/2006 Pag. 3/8
adoperato per la pulizia deve essere trattato come residuo potenzialmente infetto ed eliminato secondo le modalità sotto riportate. - La sodio azide contenuta come conservante in alcuni reagenti, può reagire con il piombo ed il rame delle tubature formando azidi di metallo altamente esplosive. Per evitare la formazione e l accumulo di tali composti far scorrere abbondante acqua sui reagenti eliminati. - I reagenti per cui non si fornisce la scheda di sicurezza non contengono sostanze chimiche pericolose o se presenti, queste sono al di sotto dei limiti di concentrazione definiti nel D.L. italiano 285/98 e nella direttiva CEE 91/155. - Ai sensi del D.L. italiano n. 22 del 05.02.97, che fa riferimento alle direttive CEE (91/156/CEE, 91/689/CEE, 94/62/CEE) tutti i rifiuti provenienti da lavorazioni manuali e/o in automatico sono classificati rifiuti speciali pericolosi con codice di classificazione CER 180103; devono quindi essere eliminati affidandoli a ditte autorizzate al ritiro ed allo smaltimento. RACCOLTA E PREPARAZIONE DEI CAMPIONI Il dosaggio può essere effettuato su sangue intero, siero, plasma o plasma ricalcificato (colletto soltanto con EDTA). E consigliabile testare i campioni immediatamente; inoltre, possono essere conservati a 2-8 C per 3 giorni o a -20 C per tempi più lunghi. Si consiglia di non congelare e scongelare ripetutamente i campioni. La presenza di precipitati (campioni lipemici o emolizzati, filamenti di fibrina) possono interferire nel dosaggio; assicurarsi pertanto che i campioni siano perfettamente limpidi prima di dosarli (5 a 1000rpm). PROCEDIMENTO OPERATIVO 1. Aprire il numero necessario di confezioni e sistemare le piastrine su una superficie piana. 2. Contrassegnare le piastrine con il nome del paziente o un numero identificativo. 3. Il test può essere eseguito su sangue intero, siero, plasma EDTA) Su sangue intero: Il dito dovrebbe essere opportunamente pulito. Successivamente pungere usando una lancetta, riempire la pipetta con il campione, dispensare una goccia di sangue con la pipetta nel pozzetto di reazione posto sulla piastrina Su siero o plasma: riempire la pipetta con il campione a tenendola verticalmente, dispensare una goccia del campione senza bolle d aria nel pozzetto di reazione posto sulla piastrina. 4. Dispensare 3 gocce di diluente, entro 10 secondi, tenendo il flacone in posizione verticale sul campione ed evitando di toccarlo con il contagocce. 5. Leggere il risultato dopo 20 minuti. Se non compare una banda di precipitazione nella seconda finestra di reazione dopo 20 minuti si può aggiungere una ulteriore goccia di diluente nella finestra dove era stato aggiunto il campione in esame. M287 Rev.06 03/2006 Pag. - 4 -/8
INTERPRETAZIONE DEI RISULTATI Test di validazione: Una banda colorata rosa compare nella finestra di controllo C, mostrando che il test è stato eseguito correttamente Interpretazione del Test: Nessuna comparsa di banda colorata nella finestra di reazione del test T : Il test risulta negativo per gli anticorpi anti-tetano. Se in aggiunta alla banda colorata nella finestra di controllo C, una banda colorata rosa chiaramente distinguibile compare nella finestra di reazione del test T, indica un risultato positivo e che il test contiene anticorpi anti-tetano. Eventuali differenze di intensità di colore tra le due bande T e C non influenzano l interpretazione dei risultati. N.B. Qualora non comparisse alcuna banda nell area di controllo C, il test dovrà essere considerato non valido e quindi ripetuto. PROCEDURE PER IL CONTROLLO DI QUALITA La buona pratica di laboratorio raccomanda l uso di materiale di controllo per assicurarsi del buon funzionamento del Kit in uso. Un siero di Controllo Positivo può essere utilizzato allo scopo. VALORI NORMALI Il livello minimo di IgG anti-tetano riconosciuto dal Teta-Test è 0.2 IU/mL su sangue intero e di 0.1 IU/mL su siero. CARATTERISTICHE METODOLOGICHE VALIDAZIONE CLINICA 72 campioni di siero sono stati testati utilizzando il Teta-Test e il kit Elisa GENZYME VIROTECH: 14 campioni: titolo < 0.1 IU/mL 8 campioni: titolo compreso tra 0.14 IU/mL e 0.1 IU/mL 50 campioni: titolo maggiore di 0.14 IU/mL M287 Rev.06 03/2006 Pag. - 5 -/8
Dopo un secondo test di conferma solo un campione, con una concentrazione di IgG anti-tetano compresa tra 0.10 IU/mL e 0.12 IU/mL col metodo ELISA, è risultato negativo con il kit Teta-Test PRECISIONE Ripetibilità (Intra-saggio): la precisione è stata determinata usando 10 replicati di 3 campioni contenenti 0, 0.5 e 20 IU/mL di IgG anti-tetano. I valori negativi e positivi sono stati correttamente identificati nel 100% dei casi. Riproducibilità (Inter-saggio): la precisione è stata determinata usando gli stessi campioni contenenti 0, 0.5 e 20 IU/mL in 10 test indipendenti e con 3 lotti diversi di TETA-TEST. I valori negativi e positivi sono stati correttamente identificati nel 100% dei casi. BIBLIOGRAFIA 1 Beytout J. Actualité de la prévention du tétanos. Le concours médical, 112 (11): 973-78 (1990). 2 Bizzini B. Tetanus toxin, Microbiol. Rev. 43, (2): 224-240 (1979). 3 Gawade S., Bon C. e Bizzini B. The use of antibody Fab fragments specifically directed to two different complementary parts of the Tetanus toxin molecule for studying the mode of action of the toxin. Brain Res. 334:139-146 (1985). 4 Gentili G., Pini C. and Collotti C. The use of an immunoenzymatic assay for the estimation of tetanus antitoxin in human sera: a comparison with seroneutralization and indirect haemagglutination. J. Biol. Stand., 13.53-59 (1985). 5 Hagenaars A. M., van Delft R. W. and Nagel J. Comparison of Elisa and toxin neutralization for the determination of tetanus antibodies. J. Immun. 5 (1&2), 1-11 (1984). 6 Ho J.L. and Klempner M.S. Tetanus toxin inhibits secretion of lysosomal contents from human macrophages. J. Infect. Dis. 152 (5):922-929 (1985). 7 Tardy H. Situation vaccinale antitétanique et statut immunitaire des patients consultant au service d accueil des urgences du Centre hospitalier d Annecy (étude comparative). Thése de doctorat, Université Joseph Fourier, Faculté de Médecine de Grenoble (1995). 8 Volk W.A. et al. Neutralization of tetanus toxin by distinct monoclonal antibodies binding to multiple epitopes on the toxin molecule. Infect. Immun. 45 (3): 604-609 (1984). M287 Rev.06 03/2006 Pag. - 6 -/8
LEGENDA SIMBOLI EN 980 EDMA REF LOT Codice di riferimento o di ordine Lotto Data di scadenza IVD Per uso diagnostico In-vitro Marcatura CE secondo le direttive IVD 98/79/CE +4 C +30 C Conservare a 4-30 C Fabbricante Rischio biologico 20 Consultare la metodica operativa Sufficiente per 20 test M287 Rev.06 03/2006 Pag. - 7 -/8
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