SOLUZIONI CONSUMABILI PER BIOANALISI. Soluzioni per la preparazione dei campioni e di cromatografia liquida per BIOANALISI
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- Feliciano Paolini
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1 SOLUZIONI CONSUMABILI PER BIOANALISI Soluzioni per la preparazione dei campioni e di cromatografia liquida per BIOANALISI quantitativa
2 Waters comprende le complesse sfide che la comunità bioanalitica deve affrontare, ad esempio la necessità di ottimizzare la sensibilità, incrementare la produttività e sviluppare metodi nuovi e stabili che possano essere trasferiti a laboratori di tutto il mondo. Al fine di affrontare queste sfide, Waters produce soluzioni per la preparazione dei campioni e di cromatografia liquida dedicate alla bioanalisi quantitativa in grado di offrire campioni puliti, separazioni selettive ed un flusso lavorativo con massima produttività. Per quanto concerne il massimo in termini di qualità dei dati bioanalitici, produttività di laboratorio e conformità, le innovative fasi stazionarie sono integrate nella Waters Regulated Bioanalysis System Solution, che comprende ACQUITY UPLC I-Class a dispersione ridotta (interfaccia per la Spettrometria di Massa migliore della categoria) e Xevo TQ-S ad alta sensibilità, con un nuovo controllo software che si avvale del sistema di informazione scientifica UNIFI completamente conforme alle normative. 2
3 Soluzioni consumabili per bioanalisi 3
4 SOLUZIONI PER LA PREPARAZIONE DEI CAMPIONI Principali Vantaggi: L esclusivo design consente di eliminare alcune procedure dispendiose in termini di tempo per una maggiore produttività Filtrati senza precipitati per la massimizzazione dei tempi di attività del sistema rispetto ai metodi classici Ideali a livello di purezza, compatibilità MS e recupero degli analiti 4
5 PIASTRA PER LA PRECIPITAZIONE DELLE PROTEINE SIROCCO SEMPLICEMENTE PURI La piastra per la precipitazione di proteine (PPT) Sirocco elimina alcune procedure di gestione dei campioni aggiuntive dispendiose in termini di tempo eseguite di norma tramite precipitazione proteica (PPT) classica. L esclusiva tecnologia con valvole a depressione consente all analista di effettuare precipitazioni proteiche all interno dei pozzetti con procedura finale di filtrazione. Tale metodo consente di effettuare un efficace elaborazione del campione, dal quale si ottengono filtrati puliti da volumi di campione ridotti. Sirocco può essere automatizzato per elaborare un numero elevato di campioni in modo efficace. CONFRONTO DEI TEMPI DI ELABORAZIONE Con le piastre Sirocco, l elaborazione dei campioni può richiedere tempi notevolmente ridotti rispetto alle precipitazioni proteiche (PPT) classiche, aumentando la produttività del laboratorio. RECUPERO La piastra Sirocco è stata sottoposta a test per il recupero degli analiti utilizzando sette analiti iniettati nel plasma di ratto avvalendosi di uno standard interno. Dai risultati emergono eccellenti recuperi in tutti gli analiti elencati. Precipitazioni Proteiche (PPT) Classiche Precipitazioni Proteiche (PPT) Sirocco minuti 15 minuti Recupero PPT (%) Carico del Campione Carico del Campione 20 0 Miscelare Miscelare Vuoto Atenololo Nadololo Metoprololo Oxprenololo Labetalolo Alprenololo Propranololo Centrifugare Iniezione Diretta Trasferire il supernatante 5
6 Somma Dei Conteggi Dell area Dei 5 Fosfolipidi SOLUZIONI PER LA PREPARAZIONE DEI CAMPIONI Purificazione più rapida dei campioni I prodotti per la preparazione dei campioni Ostro offrono una soluzione innovativa per la purificazione dei fosfolipidi in campioni di plasma e siero. Grazie ad uno sviluppo metodi minimo o nullo e all utilizzo di un protocollo semplice, tale tecnologia può essere implementata rapidamente al fine di ottimizzare il flusso di lavoro del vostro laboratorio. Grazie all offerta di estratti più puri e maggiormente riproducibili rispetto ai dispositivi o alle tecniche di rimozione dei fosfolipidi offerti dalla concorrenza, la piastra Ostro a 96 pozzetti consente di effettuare analisi più sensibili, di ottenere una maggiore produttività e minori tempi di inattività degli strumenti. RIMOZIONE DEI FOSFOLIPIDI Il livello di cinque fosfolipidi residui successivamente alla preparazione del campione utilizzando il metodo Ostro è inferiore sia rispetto all estrazione liquido/liquido sia rispetto all estrazione liquido supportata su solido RIPRODUCIBILITÀ Rimozione percentuale comparativa dei fosfolipidi totali da sei diversi lotti di plasma utilizzando Ostro (RSD 0,19%), piastra di rimozione dei fosfolipidi dal campione della concorrenza A (RSD 24,5%) e piastra di rimozione dei fosfolipidi dal campione della concorrenza B (RSD 40,9%) % Rimozione Fosfolipidi Ostro Campione della Concorrenza A Campione della Concorrenza B 0 Ostro LLE SSLE Somma dei cinque fosfolipidi contenenti livelli elevati di fosfatidilcolina con m/z 496, 524, 704, 758 e
7 PRODOTTI PER LA PREPARAZIONE DEI CAMPIONI OSTRO Principali Vantaggi: Rimozione di un quantitativo notevolmente superiore di fosfolipidi rispetto alle tecniche della concorrenza, che consente di ottenere estratti più puri Migliore riproducibilità per metodi più uniformi e affidabili Maggiore produttività grazie a un protocollo di facile implementazione 7
8 SOLUZIONI PER LA PREPARAZIONE DEI CAMPIONI Principali Vantaggi: Massima sensibilità per composti farmaceutici tradizionali e peptidi terapeutici Minimi effetti matrice per analisi LC/MS/MS Qualità del prodotto, prestazioni e riproducibilità ineguagliabili 8
9 Prodotti Oasis per l estrazione dei campioni Sensibilità nella forma più pura La sensibilità è uno dei requisiti principali per ottenere saggi bioanalitici efficaci. Per ottenere la sensibilità ottimale è necessario isolare i composti di interesse da interferenze presenti nei campioni biologici. I prodotti brevettati Oasis per estrazione in fase solida (SPE) sono disponibili in un ampia gamma di formati e adsorbenti, consentendo ai ricercatori di sviluppare metodologie selettive per i composti d interesse. I prodotti Oasis consentono ai ricercatori di creare metodi SPE altamente accurati e riproducibili dotati di sensibilità e selettività ineguagliabili. SENSIBILITÀ Gli adsorbenti a modalità mista Oasis, tutti basati sull esclusivo copolimero ad alta permeabilità Oasis HLB, offrono due modalità di ritenzione, consentendo una maggiore selettività e sensibilità di purificazione per composti acidi e/o composti basici, anche nei casi di essiccamento dell adsorbente nei pozzetti. Ottenete una sensibilità senza pari con la piastra Oasis µelution, in grado di concentrare un campione fino a 15 volte senza necessità di evaporazione o ricostituzione. Limite di quantificazione (LOQ) di benzodiapina alprazolam 1 pg/ml da 375 µl di plasma 100 0% 100 0% A. Campione Addizionato B. Matrice Bianca min Limite di quantificazione (LOQ) di fluticasone propionato 5 pg/ml da 375 µl di plasma 100 0% 100 0% A. Campione Addizionato B. Matrice Bianca min EFFETTo MATRICE Successivamente all estrazione eseguita con un adsorbente in modalità mista Oasis, sono stati valutati gli effetti di matrice per una serie di cinque farmaci antidepressivi in lotti multipli di urina. Le deviazioni standard relative (RSD) della matrice sono state quantificate in un valore compreso tra il 5,5 e l 8,4%, ampiamente entro il limite del 15% richiesto dalle agenzie di regolamentazione. Analita RSD% dei Fattori di Matrix Amitriptilina 6.03 Nortriptilina 5.53 Imipramina 8.36 Desipramina 7.15 Doxepina 5.96 QUALITÀ Come risultato di un attento processo di design e delle più stringenti regole di controllo qualità, è stato raggiunto un nuovo standard di riproducibilità da batch a batch e da lotto a lotto per gli adsorbenti SPE. Ciò consente ai ricercatori di sviluppare metodi bioanalitici efficaci, accurati e precisi. Recupero % Nessuna Limitazione di batch necessaria: Recuperi costantemente elevati in oltre 15 anni di produzione anni Deviazioni standard relative (RSD) per recuperi di: Procainamide: 1.90% Ranitidina: 1.68% Acetaminofene: 1.65% 9
10 Soluzioni di cromatografia liquida Tecnologia per colonne Grazie alla maggiore sensibilità, migliore produttività ed eccezionale affidabilità dei saggi offerta dalla Tecnologia UPLC, il sistema ACQUITY UPLC è stato definito come la soluzione LC ideale per i saggi bioanalitici. Grazie a cinque substrati particellari e venti fasi stazionarie a livello di sub-2 µm disponibili in commercio sia per applicazioni che impiegano molecole di piccole dimensioni che per quelle biofarmaceutiche, Waters offre una colonna UPLC per ogni esigenza. ACQUITY UPLC BEH C 18 O O Si O ACQUITY UPLC HSS T3 O O Si O Garantendo livelli di profilo dei picchi, efficienza e stabilità chimica ineguagliabili, la colonna BEH Technology (Ethylene Bridged Hybrid) C 18 da 1,7 μm è una soluzione di separazione ad elevatissime prestazioni per una serie di analiti distinti. Grazie alla capacità di funzionamento tra valori di ph compresi tra 1 e 12, la colonna BEH C 18 sfrutta l efficacia del ph per influenzare la ritenzione, la selettività e la sensibilità di composti ionizzabili, offrendo un miglioramento della sensibilità per i saggi LC/MS. Concepita specificatamente per migliorare la ritenzione di composti polari e metaboliti, la colonna HSS (High Strength Silica) T3 da 1,8 μm è una colonna C 18 a bassa densità di ligandi che presenta una ritenzione eccezionale senza ricorrere a reagenti di accoppiamento ionico, garantendo minori limiti di rivelazione e quantificazione per i metodi LC/MS. ACQUITY UPLC BEH HILIC Utilizzando una fase mobile ad alta percentuale di acetonitrile per migliorare la ritenzione, l efficienza di ionizzazione e la risposta degli spettrometri di massa di composti ad elevata polarità, la colonna BEH HILIC (Hydrophilic Interaction Chromatography) da 1,7 μm offre limiti di rivelazione migliori rispetto ai tradizionali metodi in fase inversa. Inoltre, gli estratti ad alto contenuto organico da PPT, LLE o SPE possono essere iniettati direttamente, migliorando notevolmente la produttività, l efficacia e la sensibilità dei campioni. ACQUITY UPLC BEH300 C 18 O O Si O Specificamente ideata e sottoposta a controllo di qualità per l analisi di peptidi veloce e ad alta risoluzione, la colonna 300Å BEH C 18 assicura l efficace separazione di una svariata gamma di peptidi. Ora è possibile utilizzare un unica colonna per trattenere e separare peptidi caratterizzati da un ampio spettro di idrofobicità, punto isoelettrico e peso molecolare. 10
11 COLONNE ACQUITY UPLC Principali Vantaggi: Massimizzare la produttività di laboratorio riducendo la durata delle analisi e migliorando al contempo la qualità dei dati Ottenere limiti di rivelazione più bassi consentendo una maggiore risposta MS con picchi cromatografici risolti Migliorare la caratterizzazione dei campioni riducendo la soppressione MS dovuta ai composti presenti nella matrice 11
12 Uffici vendite: Esportazioni in Austria ed Europa (Europa centrale, meridionale e orientale, CIS e Medio Oriente) Australia Belgio e Lussemburgo Brasile Canada Cina Repubblica Ceca Danimarca Finlandia Francia Germania Hong Kong Ungheria India Irlanda Italia Giappone Corea Messico Paesi Bassi Norvegia Polonia Porto Rico Russia/Comunità di Stati Indipendenti / Singapore Spagna Svezia Svizzera Taiwan Regno Unito Waters Corporation 34 Maple Street Milford, MA U.S.A. T: F: Il sistema di gestione della qualità degli stabilimenti produttivi Waters di Taunton, nel Massachusetts, e Wexford, in Irlanda, è conforme alla norma internazionale ISO 9001:2008 per la gestione e l assicurazione della qualità. Il sistema di gestione della qualità Waters viene periodicamente sottoposto a revisione da parte dell ente di certificazione per garantirne la conformità. Waters, The Science of What s Possible, UPLC, ACQUITY UPLC, UNIFI, Xevo, Oasis, Ostro, Sirocco e BEH Technology sono marchi di fabbrica di Waters Corporation Waters Corporation. Stampato negli Stati Uniti Aprile IT SC-CM
segue Dati sottoposti a rettifiche e revisioni successive. Ultimo aggiornamento su Paese
2015 2016 2017 Cina 25,69% 21,42% 25,48% 23,07% 23,42% 20,81% 23,33% 23,01% 21,53% 20,08% 24,26% 18,56% Germania 5,94% 9,23% 6,41% 7,69% 6,61% 7,49% 6,37% 9,55% 9,62% 9,16% 8,36% 10,37% Romania 7,81% 8,37%
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Dettaglisegue Dati sottoposti a rettifiche e revisioni successive. Ultimo aggiornamento su Paese
2015 2016 2017 Germania 9,96% 9,21% 9,83% 9,29% 10,70% 8,57% 8,82% 8,92% 9,07% 8,20% 9,43% 8,96% Francia 7,95% 6,21% 7,95% 7,22% 7,34% 7,07% 8,55% 8,04% 8,05% 7,26% 9,31% 8,64% Russia 5,74% 4,66% 5,37%
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