QuickTox TM Kit for QuickScan DON3 (Vomitoxin) (AQ-254-BG)

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1 QuickTox TM Kit for QuickScan DON3 (Vomitoxin) (AQ-254-BG) Cat. # GX11176 Versione Minima Software QS: 4.7 Update 2 Manuale d uso Leggere attentamente il manuale prima di procedere all uso del kit Via San Geminiano, San Prospero (MO)- Italy : : : laboratorio@generon.it : [1] Manuale d uso - QuickTox TM Kit for QuickScan DON3 - Rev. 4-29/07/2016

2 1 Matrici Analizzabili ll kit consente di analizzare Mais, Mais Farina, Mais Germe, Mais - Panello di glutine, Mais - Semola glutinata, Residuo secco di distilleria, Frumento, Crusca di frumento, Tritello di frumento, Farina di frumento, Farina bianca di frumento, Glutine di frumento, Residui di molitura del frumento, Orzo, Orzo maltato, Avena, Sorgo, Panello di soia, Riso bianco, Riso grezzo e Semi grezzi di Segale. 2 Contenuto Del Kit Ogni kit contiene: 50 strip QuickTOX (Tubo bianco), una bottiglietta di Buffer DB6, 100 puntali per pipetta (sacchetto trasparente), 100 bicchierini per correre il test (sacchetto blu). Nel caso si renda necessario ulteriore buffer DB6 e possibile acquistarlo (Cat n GX11666) ricordando che il lotto di buffer è legato al lotto di strip pertanto nell ordine va indicato il numero di lotto di strip da abbinarvi. Generon può fornire anche tutti i materiali necessari ad eseguire l analisi non forniti con il kit: Bilance (Cat. # ACC3039) e barattoli per la pesata (Cat. # ACC3525); Pipette a volume variabile da 200 microlitri (Cat. # ACC3015) e 1000 microlitri (Cat. # ACC3014); Microcentrifughe (Cat. # ACC3064) o filtri (Cat. # ACC3504) per chiarificare gli estratti; Puntali da 1 ml (Cat. # ACC3514) e microtubi (Cat. # ACC3902) per utilizzare la microcentrifuga. 3 Precauzioni Le strip sono sensibili all umidità pertanto si consiglia di conservarle all interno del tubo ben tappate. Il tappo contiene silice disseccante che le proteggerà. Evitare di piegare le strip in quanto questo ne compromette il normale flusso. Prima di utilizzare le strip portarle a temperatura ambiente (20-25 C) in quanto esse sono state tarate in questo intervallo di temperatura. 4 Preparazione Dei Reagenti Estrarre dal frigo almeno mezzora prima delle analisi: le strip necessarie e il tampone DB6 BUFFER. Riporre le altre strip in frigo. ATTENZIONE: L analisi deve essere eseguita a temperatura ambiente, a C. Se eseguito a temperature inferiori o superiori, il test può dare risultati errati. Preparate anche la soluzione estrattiva necessaria in modo che sia a temperatura ambiente. Utilizzare acqua distillata, acqua demineralizzata o acqua minerale non gasata. [2] Manuale d uso - QuickTox TM Kit for QuickScan DON3 - Rev. 4-29/07/2016

3 5 Estrazione Del Don (Vomitossina) Dal Campione Raccogliere un campione rappresentativo del materiale da analizzare seguendo le indicazioni sul campionamento della UE e comunque possibilmente almeno 1-2 Kg. Quindi macinare finemente tutto il campione arrivando ad una granulometria di almeno 20 Mesh (1 mm) (Fig.1). Granulometrie più grossolane possono limitare l efficienza estrattiva portando a sottostime. 2. Prendere un barattolo pulito e rimuovere il coperchio. Posizionare il barattolo sulla bilancia e premere il pulsante TARA. Pesare 20g di campione macinato (Fig.2). Il barattolo deve essere grande a sufficienza da garantire un adeguata agitazione del campione. 3. Aggiungere acqua distillata, demineralizzata o acqua minerale non gasata in proporzione 1g (solido): 5 ml (liquido) (Fig.3). Esempio: per 20 g di campione versare 100 ml di acqua. Per matrici diverse da grano e mais, il volume d acqua può variare: vedere Tabella di Estrazione a pag. 4 della guida 4. Agitare vigorosamente a mano o con un agitatore meccanico (Cat. # ACC3912) per 30 secondi assicurandosi che tutto il campione venga bagnato dalla soluzione estraente e che non si formino grumi nei quali l estrazione non sarebbe completa (Fig.4). NOTA: rispettare rigorosamente i tempi di agitazione indicati se si vuole ottenere una quantificazione precisa. 5. Chiarificare l estratto preferibilmente* per centrifugazione 30 a 7200 rpm di un aliquota dell estratto come segue: Tarare la pipetta da 1000 µl per prelevare 800 µl Inserire un puntale da 1000 (Azzurri) e con una forbice tagliare la punta del puntale per evitare che si intasi con il pulviscolo centrifuga Prelevare il supernatante e trasferirlo in un microtubo da Centrifugare avendo cura di bilanciare correttamente il rotore (*) se sprovvisti di centrifuga chiarificare il campione per filtrazione (utilizzando appositi filtri di carta plissettata Cat. # ACC3504), solo per grano e mais, è possibile evitare la filtrazione/ centrifugazione, lasciando decantare il campione finché il macinato si deposita e il liquido in superficie diventa limpido (Fig.5). o o (solo per mais e grano) 5. [3] Manuale d uso - QuickTox TM Kit for QuickScan DON3 - Rev. 4-29/07/2016

4 6 Esecuzione Del Test l 200 l 1. Preparare due bicchierini (#1 e #2) di quelli contenuti nel sacchetto blu del kit. Utilizzando la micropipetta p200 con un puntale pulito, prelevare 200 µl di campione chiarificato/ filtrato/ centrifugato e porli nel bicchierino #1. Utilizzando la micropipetta p1000 con un puntale pulito, prelevare 800 µl di tampone (DB6 BUFFER) e aggiungerli nella coppetta #1. Mescolare accuratamente con la pipetta (aspirare ed espellere delicatamente il liquido 2/3 volte) evitando di fare schiuma (Fig.6) l 2. Utilizzando la micropipetta p200 con un puntale pulito trasferire 200 µl dal bicchierino #1 al bicchierino #2 evitando di fare schiuma in quanto le bolle provocano dei problemi di flusso nella strip che si traducono in bande non completamente sviluppate e quindi in errori di lettura o errori di quantificazione (Fig.7) Gettare il bicchierino #1 ed inserire la strip nel bicchierino #2. La parte da immergere nel liquido è quella colorata ed attendere lo sviluppo della strip per 3 minuti (Fig.8). a. NOTA: rispettare rigorosamente i tempi di agitazione indicati se si vuole ottenere una quantificazione precisa Togliere la strip dalla coppetta e tagliare via con le forbici la parte finale colorata e procedere con la lettura della strip(fig.9). [4] Manuale d uso - QuickTox TM Kit for QuickScan DON3 - Rev. 4-29/07/2016

5 7 Lettura Della Strip Aprire il programma di lettura, facendo doppio clic sull icona Quickscan (QS) sullo schermo. Apparirà il menu principale (Fig.10). 2. Estrarre dal Quickscan il supporto per le strip (Fig.11 parte nera appuntita). Aprire lo sportellino e posizionare la strip sul numero La strip deve avere la parte col codice a barre rivolta verso il basso. E` possibile posizionare fino a 4 strip contemporaneamente, sfruttando le 4 posizioni disponibili (Fig.12). 4. Chiudere lo sportellino. Tenendolo premuto con un dito, inserire di nuovo il supporto nello scanner (Fig.13). 5. Cliccare sul comando READ TEST sulla schermata principale del programma. Attendere che il Quickscan termini la scansione (Fig.14). 6. Quando compare la schermata dei risultati, come in figura, inserire almeno il nome del campione nello spazio Sample ID (Fig.15) e premere Invio (Enter) sulla tastiera. 13 Scrivere qui il «nome» del campione 15 Il limite di quantificazione della strip è 290 ppb. Il software restituirà comunque un valore anche se la concentrazione misurata fosse più bassa attraverso un estrapolazione. Il dato che ne risulta è tuttavia affetto da una maggiore imprecisione. 14 Un eventuale risultato > ppb significa che il campione supera i ppb. Attraverso un opportuna diluizione è possibile misurare valori fino a ppb (vedi sotto). 8 Gestione Dei Risultati Se si desidera stampare immediatamente il report di analisi, premere il comando PRINT in basso a destra. Premere CLOSE per chiudere la finestra di lettura. Per rivedere o stampare i risultati in un secondo momento, doppio clic sulla cartella REPORTS sul desktop Per visualizzare il registro di tutte le analisi eseguite, cliccare sul comando DATA LOG nella schermata iniziale del programma [5] Manuale d uso - QuickTox TM Kit for QuickScan DON3 - Rev. 4-29/07/2016

6 9 Campioni Che Superano ppb (12 ppm) Per campioni di mais e frumento è possibile misurare la contaminazione anche a valori superiori i 12 ppm, la misura è validata fino a 30 ppm. Si tratta di diluire l estratto secondo questa procedura: a. In un bicchierino mescolare 100 μl di estratto filtrato e 700 μl di acqua e mescolare accuratamente b. A questo punto questo diventa il campione e si procede dal punto 6 fino alla lettura della strip e alla schermata dei risultati punto 15. c. Nella stessa schermata scegliere 1:7.5 nel menù a tendina dilution il sistema calcolerà automaticamente il livello di DON nell estratto originario. 10 Dichiarazione Di Non Responsabilità Generon S.p.A. non si assume responsabilità di alcun tipo, esplicite o implicite, eccetto garantire che i materiali di cui i propri prodotti si compongono sono di qualità standard. In caso di materiale difettoso, Generon S.p.A. si impegna a fornire un prodotto sostitutivo. Generon S.p.A. non è tenuta a rispondere per qualunque danno, inclusi danni speciali o consequenziali o spese che derivano direttamente o indirettamente dall uso di questo prodotto. L acquirente può duplicare questo documento, in tutto o in parte, solo per scopi interni, a condizione che questa nota sia riportata in tutte le copie. Nella duplicazione l acquirente si impegna a compiere ogni ragionevole sforzo per impedire l'uso non autorizzato e la distribuzione delle informazioni sulla proprietà. Questo manuale è la semplice traduzione in lingua italiana del manuale in lingua straniera presente nel kit. [6] Manuale d uso - QuickTox TM Kit for QuickScan DON3 - Rev. 4-29/07/2016

7 Tabella di Estrazione Descrizione Inglese Descrizione Italiana Volume d acqua Istruzioni Altre note Corn gluten meal Farina di glutine di mais Corn gluten feed Wheat flour Malted barley DDGS Semola glutinata Farina integrale di grano Orzo maltato Residui di distillazione dei cereali 4X Aggiungere acqua distillata in proporzione 1g (solido) : 4 ml (liquido). Esempio: per 20 g di campione versare 80 ml di acqua ed agitare per 30 secondi. Whole rye Semi grezzi di segale Corn Mais in granella Corn flour Farina di mais Corn germ Germe di mais Wheat Frumento in granella Wheat midds Wheat bran Wheat gluten Tritello di frumento Crusca di grano Glutine di grano 5X Aggiungere acqua distillata in proporzione 1g (solido) : 5 ml (liquido). Esempio: per 20 g di campione versare 100 ml di acqua ed agitare per 30 secondi. Per glutine di grano, è consigliata l estrazione in blender a lame e successiva centrifugazione dell estratto 30 a 2000xg. Wheat Red Dog Residui di molitura del frumento Barley Orzo in granella Rough rice Riso integrale Soybean meal Panello di soia White wheat flour Oats Milled rice Sorghum Farina bianca di grano Avena Riso bianco Sorgo 6X Aggiungere acqua distillata in proporzione 1g (solido) : 6 ml (liquido). Esempio: per 20 g di campione versare 120 ml di acqua ed agitare per 30 secondi. Agitare il campione per 1 minuto anziché 30 secondi. [7] Manuale d uso - QuickTox TM Kit for QuickScan DON3 - Rev. 4-29/07/2016