QuickToxTM Kit for QuickScan Manuale d uso Leggere attentamente il manuale prima di procedere all uso del kit

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Bonaventura Vitali
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1 QuickTox TM Kit for QuickScan Zearalenone (AQ-112-BG) Cat. # GX10429 Manuale d uso Leggere attentamente il manuale prima di procedere all uso del kit Via San Geminiano, San Prospero (MO)- Italy : : : laboratorio@generon.it : [1] Manuale d uso - QuickTox TM Kit for QuickScan Zearalenone - Rev.5-29/07/2016

2 1 Matrici Analizzabili ll kit consente di analizzare Mais. 2 Contenuto Del Kit Ogni kit contiene: 50 strip quicktox (tubo bianco) Una bottiglietta di buffer DB4 100 puntali per pipetta (sacchetto trasparente) 50 bicchierini per correre il test (sacchetto blu) Generon può fornire anche tutti i materiali necessari ad eseguire l analisi non forniti con il kit: Bilance (Cat. # ACC3039) Barattoli per la pesata (Cat. # ACC3525) Pipette a volume variabile da 200 microlitri (Cat. # ACC3015) e 1000 microlitri (Cat. # ACC3014) Microcentrifughe (Cat. # ACC3064) o filtri (Cat. # ACC3504) per chiarificare gli estratti Puntali da 1 ml (Cat. # ACC3514) Microtubi (Cat. # ACC3902) per utilizzare la microcentrifuga 3 Precauzioni Le strip sono sensibili all umidità pertanto si consiglia di conservarle all interno del tubo ben tappate. Il tappo contiene silice disseccante che le proteggerà. Evitare di piegare le strip in quanto questo ne compromette il normale flusso. Prima di utilizzare le strip portarle a temperatura ambiente (20-25 C) in quanto esse sono state tarate in questo intervallo di temperatura. 4 Preparazione Dei Reagenti Estrarre dal frigo almeno mezzora prima delle analisi: le strip necessarie e il tampone DB4 BUFFER. Riporre le altre strip in frigo. ATTENZIONE: L analisi deve essere eseguita a temperatura ambiente, a C; se eseguito a temperature inferiori o superiori, il test può dare risultati errati. [2] Manuale d uso - QuickTox TM Kit for QuickScan Zearalenone - Rev.5-29/07/2016

5 Estrazione Dello Zearalenone Dal Campione 1.

Macinare finemente tutto il campione arrivando ad una granulometria di almeno 20 Mesh (0,8 mm) (Fig.1).

Posizionare il barattolo sulla bilancia e premere il pulsante TARA. Pesare 20 g di campione macinato (da un minimo di 20 g a un massimo di 50 g) (Fig.2); 4.

% secondo la proporzione 1g (solido): 2 ml (liquido). Esempio: per 20 g di campione versare 40 ml di EtOH 50

Chiudere il barattolo e agitare vigorosamente per 2 minuti, assicurandosi che tutto il campione venga bagnato dalla soluzione estraente e che non si formino grumi nei quali l

3 5 Estrazione Dello Zearalenone Dal Campione 1. Raccogliere un campione rappresentativo del materiale da analizzare seguendo le indicazioni sul campionamento della UE e comunque possibilmente almeno 1-2 Kg; 2. Macinare finemente tutto il campione arrivando ad una granulometria di almeno 20 Mesh (0,8 mm) (Fig.1). Granulometrie più grossolane possono limitare l efficienza estrattiva portando a sottostime; Prendere un barattolo pulito e rimuovere il coperchio. Posizionare il barattolo sulla bilancia e premere il pulsante TARA. Pesare 20 g di campione macinato (da un minimo di 20 g a un massimo di 50 g) (Fig.2); 4. Aggiungere Etanolo 50% secondo la proporzione 1g (solido): 2 ml (liquido). Esempio: per 20 g di campione versare 40 ml di EtOH 50% (Fig.3) Chiudere il barattolo e agitare vigorosamente per 2 minuti, assicurandosi che tutto il campione venga bagnato dalla soluzione estraente e che non si formino grumi nei quali l estrazione non sarebbe completa (Fig.4). Qualora si utilizzi un agitatore meccanico (Cat. # ACC3912) il tempo di estrazione può ridursi ad 1 minuto; 6. Chiarificare l estratto preferibilmente* per centrifugazione 30 a 7200 rpm di un aliquota dell estratto come segue (Fig.5): I. Tarare la pipetta da 1000 µl per prelevare 800 µl II. Inserire un puntale da 1000 (Azzurri) e con una forbice tagliare la punta del puntale per evitare che si intasi con il pulviscolo III. centrifuga IV. Prelevare il surnatante e trasferirlo in un microtubo da Centrifugare avendo cura di bilanciare correttamente il rotore (*) se sprovvisti di centrifuga chiarificare il campione per filtrazione (utilizzando appositi filtri di carta plissettata Cat. # ACC3504). O [3] Manuale d uso - QuickTox TM Kit for QuickScan Zearalenone - Rev.5-29/07/2016

una coppetta pulita (Fig.6); 2. Prelevare 100 l di campione filtrato/ centrifugato e porli nella stessa coppetta.

Inserire la strip nella coppetta. La parte da immergere nel liquido è quella colorata (Fig.7); 4.

Togliere la strip dalla coppetta e tagliare via con le forbici la parte finale colorata (Fig.8). 6. 8. 7.

Apparirà il menu principale (Fig.9); 2. Estrarre dal Quickscan il supporto per le strip (parte nera a punta); 3.

È possibile posizionare fino a 4 strip contemporaneamente, sfruttando le 4 posizioni disponibili (Fig.10); 4.

4 6 Esecuzione Del Test 1. Utilizzando la micropipetta calibrata con un puntale pulito, prelevare 100 l di tampone (DB4 BUFFER) e metterli in una coppetta pulita (Fig.6); 2. Prelevare 100 l di campione filtrato/ centrifugato e porli nella stessa coppetta. Mescolare bene con la pipetta (aspirare ed espellere delicatamente il liquido 2/3 volte); 3. Inserire la strip nella coppetta. La parte da immergere nel liquido è quella colorata (Fig.7); 4. Attendere lo sviluppo della strip: 5 minuti; 5. Togliere la strip dalla coppetta e tagliare via con le forbici la parte finale colorata (Fig.8) Lettura Della Strip 1. Aprire il programma di lettura, facendo doppio clic sull`icona Quickscan (QS) sullo schermo. Apparirà il menu principale (Fig.9); 2. Estrarre dal Quickscan il supporto per le strip (parte nera a punta); 3. Aprire lo sportellino e posizionare la strip, con il codice a barre rivolta verso il basso. È possibile posizionare fino a 4 strip contemporaneamente, sfruttando le 4 posizioni disponibili (Fig.10); 4. Chiudere lo sportellino. Tenendolo premuto con un dito, inserire di nuovo il supporto nello scanner (Fig.11); 5. Cliccare sul comando READ TEST sulla schermata principale del programma. Attendere che il Quickscan termini la scansione Digitare qui il nome del campione [4] Manuale d uso - QuickTox TM Kit for QuickScan Zearalenone - Rev.5-29/07/2016

8 Analisi Del Risultato 1. Quando compare la schermata dei risultati, come in figura 12, inserire almeno il nome del campione nello spazio Sample ID e premere Invio (Enter) sulla tastiera; 2.

5 8 Analisi Del Risultato 1. Quando compare la schermata dei risultati, come in figura 12, inserire almeno il nome del campione nello spazio Sample ID e premere Invio (Enter) sulla tastiera; 2. Se si desidera stampare immediatamente il report di analisi, premere il comando PRINT in basso a destra; 3. Premere CLOSE per chiudere la finestra di lettura. Per rivedere o stampare i risultati in un secondo momento, doppio clic sulla cartella REPORTS sul desktop; 4. Per visualizzare il registro di tutte le analisi eseguite, cliccare sul comando DATA LOG nella schermata iniziale del programma. Un eventuale risultato <LOD significa inferiore al limite di rilevazione, quindi Zearalenone inferiore a 50 ppb. Un eventuale risultato >520 ppb significa che il campione supera i 520 ppb. Se si necessita di una misurazione precisa del valore, procedere al paragrafo Campioni che superano 520 ppb. 9 Campioni Che Superano 520 ppb 1. Per quantificare campioni che superano 520 ppb, occorre predisporre un campione diluente che consenta di diluire il valore di Zearalenone contenuto nel campione originario e riportarlo nel range di lettura del kit. Predisporre il campione diluente come segue: a. Pesare 1 gr di farina priva di Zearalenone (Farina Zearalenone <LOD, fornita da Generon) b. Aggiungere 2 ml di Etanolo 50% c. Agitare 2 minuti d. Filtrare oppure centrifugare per 30 secondi e. Utilizzare il filtrato/centrifugato per il passaggio successivo Conservare il campione diluente così preparato in frigo per 24 h massimo. 2. Preparare 2 coppette pulite. 100 l Nella coppetta 1 porre 300 l di Campione Diluente l del campione originario (filtrato/centrifugato). Miscelare con la pipetta. 4. Prelevare 100 l del mix dalla coppetta 1 e trasferirli nella coppetta 2 (Fig.13). Cambiare puntale. 5. Aggiungere 100 l di BUFFER DB4 nella coppetta 2. Miscelare con la pipetta. 6. Inserire una nuova strip nella coppetta 2 e attendere 5 minuti. Tagliare la parte finale colorata e procedere con la lettura della strip. ATTENZIONE: la procedura per quantificare campioni superiori a 520 ppb non è pre-impostata nel software Quickscan, pertanto occorre calcolare manualmente il risultato: moltiplicare il risultato x 4 per ottenere il valore reale di Zearalenone del campione originario. [5] Manuale d uso - QuickTox TM Kit for QuickScan Zearalenone - Rev.5-29/07/2016

6 10 Dichiarazione di non responsabilità Generon S.p.A. non si assume responsabilità di alcun tipo, esplicite o implicite, eccetto garantire che i materiali di cui i propri prodotti si compongono sono di qualità standard. In caso di materiale difettoso, Generon S.p.A. si impegna a fornire un prodotto sostitutivo. Generon S.p.A. non è tenuta a rispondere per qualunque danno, inclusi danni speciali o consequenziali o spese che derivano direttamente o indirettamente dall uso di questo prodotto. L acquirente può duplicare questo documento, in tutto o in parte, solo per scopi interni, a condizione che questa nota venga riportata in tutte le copie. Nella duplicazione l acquirente si impegna a compiere ogni ragionevole sforzo per impedire l'uso non autorizzato e la distribuzione delle informazioni sulla proprietà. Questo manuale è la semplice traduzione in lingua italiana del manuale in lingua straniera presente nel kit. [6] Manuale d uso - QuickTox TM Kit for QuickScan Zearalenone - Rev.5-29/07/2016

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