Partecipazione dei laboratori italiani all EUPT AO-07 sulla panna

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1 Partecipazione dei laboratori italiani all EUPT AO-07 sulla panna dott.ssa Patrizia Pelosi, dott.ssa Graziella Amendola Istituto Superiore di Sanità - Roma Dipartimento Ambiente e Connessa Prevenzione Primaria Reparto Antiparassitari X Convegno Attività dell amministrazione pubblica in materia di controllo dei residui di fitofarmaci negli alimenti Istituto Superiore di Sanità, Roma 24 Gennaio 2013

2 Attività del LNR-AO Collaborazione con il Laboratorio di Riferimento dell Unione Europea per i residui di antiparassitari sui prodotti alimentari di Origine Animale ed alimenti con un alto contenuto di grassi (EURL-AO) Workshop di settore Test comparativi (Proficiency Tests) Partecipazione e valutazione dei Proficiency Tests organizzati dell EURL-AO: EUPT AO-07 (panna liquida) Organizzazione di Proficiency Tests da parte del LNR-AO Assistenza scientifica e tecnica all autorità competente ISS - X Convegno

3 Proficiency Test organizzato dall EURL-AO Laboratori di controllo ufficiale: partecipazione obbligatoria ai Proficiency Tests organizzati annualmente dalla Commissione (EUPTs) ad opera dei Laboratori di Riferimento dell Unione Europea (EURLs) (art. 28 del Reg. 396/2005) Obiettivo degli EUPTs AO: Assicurare qualità, accuratezza, comparabilità ai dati prodotti dai laboratori europei Controllo dei metodi adottati dai laboratori per l attuazione del programma coordinato di controllo pluriennale dell Unione Europea Esigenze dettate dalla Commissione (2012): Matrice selezionata: Panna Introduzione di nuove molecole nello scopo dell EUPT AO EUPT AO-07 (2012): Pesticides in liquid cream test material ISS - X Convegno

4 EUPTs - procedure armonizzate (2010) Gestione dei dati tramite piattaforma comune agli EUPTs: Registrazione elettronica agli EUPTs Spazio dedicato dove dichiarare o meno la partecipazione all EUPT Campo dove dare motivazioni per la mancata partecipazione all EUPT Invio dei risultati in formato elettronico (Result submission website) Protocollo generale Procedure comuni da seguire per l organizzazione degli EUPTs dei 4 EURLs sui residui di antiparassitari - 3 edizione (disponibile su CIRCA) Variazioni in discussione nella prossima edizione: Nuova categorizzazione dei laboratori (Commissione) Test di omogeneità e di stabilità (da armonizzare) Incertezza del valore della mediana (da introdurre?) Valutazione dei risultati finali degli EUPTs (statistica armonizzata) Protocollo specifico Protocollo stilato dal EURL-AO con il supporto degli esperti dell EUPT Panel Informazioni dettagliate sulla gestione del campione da analizzare Trasmissione dei risultati Modalità di pagamento ISS - X Convegno

5 Protocollo specifico EUPT AO-07 (2012) Calendario Invio materiale test: 24 Aprile 2012 Invio risultati: 29 Maggio 2012 Istruzioni particolari Conservazione del campione congelato prima dell analisi (< - 18 C) Scongelare ed omogeneizzare il campione con cautela prima dell analisi Antiparassitari scopo dell EUPT Target List Annex 1: composti da analizzare obbligatoriamente Annex 2: analiti da determinare su base volontaria Determinazioni Campione fortificato: determinazione del grasso e degli analiti (Annex 1 e 2) Campione bianco: verifica della presenza di analiti (da usare per calcolo del recupero; standards in matrice) Risultati (Result submission website: subpages 1 e 2) Determinazione del grasso dei campioni test Determinazione degli analiti nel campione fortificato e nel bianco: concentrazione in mg/kg di grasso (analiti in Annex 1 e quelli in Annex 2 marcati con (F)) Esperienza del laboratorio nella determinazione dei composti della Target List Correzione per il recupero, se effettuata Recupero dell analita dal metodo utilizzato Informazioni sul metodo usato (Result submission website: subpages 3) Informazioni sul metodo di analisi e di determinazione analitica Falsi negativi (Result submission website: subpage 4) Dopo il termine per l invio dei risultati, in caso di falsi negativi riscontrati gli organizzatori chiedono dettagli sul metodo usato ISS - X Convegno

6 Valutazione dei risultati degli EUPTs con statistica comune Rapporto dell EUPT AO-07 Concentrazione vera (µ): mediana Deviazione Standard target (δ): modello di Deviazione Standard basata sul Fit For Purpose (FFP) δ = µ x FFP FFT= 0.25 (25%, dal EU PT6-2004) z-score (z): calcolato usando il modello di Deviazione Standard basata sul FFP z-score = (x µ) / δ x = valore riportato dal laboratorio Rapporto Preliminare Criteri di valutazione: Accettabile: IzI 2 Questionabile: 2 < IzI 3 Non accettabile:izi> 3 Valori combinati di z-score: Per i laboratori definiti in categoria A verranno fatte ulteriori elaborazioni statistiche nel rapporto finale. Categoria A: laboratori con una capacità analitica sufficiente all obiettivo dell EUPT, che soddisfano i seguenti requisiti: Analisi del 90% degli analiti fortificati al campione test Nessun falso positivo riportato 2012: Average of the squared Z-scores (AZ 2 ) (*) (*) parametro precedentemente nominato Sum of squared Z-scores (SZ 2 ) : calcolo introdotto dal ISS - X Convegno

7 Risultati dell EUPT AO- 07 Rapporto Preliminare Pubblicato su CIRCA ( ) Rapporto finale Documento non ancora a disposizione su CIRCA (prossimamente) Tutti i dati verranno rivalutati statisticamente in base a: Inclusione dei soli risultati calcolati su base del grasso del campione (mg/kg di grasso) Eliminazione dei dati provenienti da laboratori che hanno determinato il grasso in maniera particolarmente imprecisa ISS - X Convegno

8 EUPT AO-07 Pesticides in liquid cream test material Laboratori partecipanti Partecipanti EUPT AO-07 Istituto Superiore di Sanità APPA Bolzano ARPA Lazio IZS Abruzzo e Molise IZS Lazio e Toscana IZS Lombardia ed Emilia Romagna IZS del Mezzogiorno IZS Puglia e Basilicata IZS Sardegna IZS Umbria e Marche IZS delle Venezie Lab LNR-AO LU LU LU LU LU LU LU LU LU LU Laboratori europei partecipanti: 102 laboratori (106 registrati), rappresentanti di 26 Stati Membri e 1 Paese EFTA Laboratori italiani partecipanti: 11 laboratori (1 LNR-AO + 10 LU) Laboratori Ufficiali italiani: 2 nuovi laboratori (APPA Bolzano e ARPA Lazio) 8/10 Istituti Zooprofilattici Sperimentali LNR-AO: Laboratorio Nazionale di Riferimento per i residui dei pesticidi sui prodotti alimentari di origine animale ed alimenti con un alto contenuto di grassi LU: Laboratori Ufficiali ISS - X Convegno

9 EUPT AO-07 Pesticides in liquid cream test material Antiparassitari scopo dell EUPT Annex 1 del protocollo: Composti da analizzare obbligatoriamente Lista di 56 composti da determinare in mg/kg di grasso Minimum Required Reporting Level (MRRL) 12 analiti fortificati: 8 organoclorurati (OC) (cis-ordano, trans-ordano, p,p -DDE, Endosulfan Solfato, HCB, alfa-hch, beta-hch e gamma-hch) 2 organofosforati (OP) (Diazinone e Paration) 2 piretroidi (PYR) (Bifentrin e Deltametrina) ISS - X Convegno

10 EUPT AO-07 Pesticides in liquid cream test material Antiparassitari scopo dell EUPT Annex 2 del protocollo: Composti da analizzare su base volontaria Lista di 22 analiti da determinare in mg/kg di prodotto/grasso Minimum Required Reporting Level La maggior parte dei composti sono analizzabili con LC- MS/MS Metodo analitico messo a disposizione sulla piattaforma riservata CIRCA ma non è stata fatta adeguata diffusione da parte dell EURL-AO 3 analiti fortificati: Boscalid (*) Tetraconazolo (*) Thiacloprid (*): analizzabili in GC/MS ISS - X Convegno

11 EUPT AO-07 Pesticides in liquid cream test material Preparazione dei campioni test Materiale test: panna liquida da montare presa dal mercato locale (circa 30% di grasso) Controllo dell assenza di antiparassitari al di sopra del MRRL: HCB Endosulfan Solfato p,p -DDE Valori trovati: (MRRL = 0.01) mg/kg di grasso Aliquote da analizzare, inviate congelate ( - 18 C): 1 campione da ca. 50 g di materiale fortificato 1 campione da ca. 50 g di materiale bianco EURL-AO (2 metodi analitici diversi per l analisi di tutti gli analiti): - Test di omogeneità: 11 campioni test analizzati in duplicato - Test di stabilità: analisi effettuate dalla preparazione dei campioni alla fine dell EUPT (IUPAC/ISO/AOAC International Protocol for Proficiency Testing ISO 13528:2005) ISS - X Convegno

12 Metodi usati dai laboratori italiani nell EUPT AO-07 Lab asse analiti Riferimenti Metodo OC Metodo interno 1 g PYR Metodo interno 1 g OP Metodo interno 1 g Annex 2 (Tiacloprid) OC+PYR+OP + Annex 2 (Bosalid) Metodo interno 1 g Campione Acetone Esano Acetone Esano Acetone Esano Acetone Esano Solvente di estrazione Metodo interno 10 g ACN NO NO OC+PYR+OP Metodo interno ACN 53 OC+PYR+OP Metodo interno 5 g ACN: Acetone: Dietil Etere 50:25:25 55 OC+PYR+OP EN : g Esano 58 OC+PYR+OP EN (QuEChERS - tampone citrato) Aggiunta H2O Correzione ph Purificazione 1 NO NO GPC SPE (Silice) NO NO GPC SPE (Alu-N) NO NO GPC SPE (Alu-N) NO NO GPC SPE (Alu-N) NO SPE (C18, 2 g) NO NO GPC SI (per OP) NO 5 g Etil Acetato NO SI SPE (Extrelut NT-3) GPC Dispersive SPE (PSA/MgSO4) SPE (Florisil, 1g) Congelamento Purificazione 2 solvente matrice matrice 1-livello matrice 1-livello matrice 1-livello matrice matrice matrice Calibrazione (delta-hch) (PCB 198) GC-NPD (Ethion) LC-MS/MS (QQQ) GC-MSD (PCB 209) (DCB) GC-MSD (TCPP) GC-MS/MS (QQQ) OC+ PYR: OP: GC-NPD Determinazione (Standard Interno) diverse colonne (RTX-5) diverse colonne (RTX-5) GC-MS/MS (QQQ) GC-Ion Trap GC-MS/MS (QQQ) diverse colonne GC-MSD Conferma Tipologia di metodo 8/11 Lab: metodi multiresiduo e multiclasse 3/11 Lab: estrazione uguale ma differenti purificazioni per ogni classe di composto 4 Lab: metodi normalizzati (3 usano il QuEChERS) 1 Lab non analizza OP 1 Lab non analizza PYR Analisi Campione di analisi: 1-50 g 71 OC+PYR+OP 89 OC+PYR+OP+ Annex 2 (Boscalid, Tetraconazolo, Tiacloprid) EN (QuEChERS - tampone citrato) EN (QuEChERS - tampone citrato) 5 g ACN SI 3 g ACN SI SI Dispersive SPE (PSA/MgSO4) matrice (Malation d10) OC: GC-MSD (PCB 52) PYR+OP+Annex2 LC-MS/MS (QQQ) GC-MSD Estrazione Solventi usati: ACN, Ac, Es, EtilAcetati, DietilEtere OC Metodo interno 50 g NO NO PYR Metodo interno 50 g NO NO OP Metodo interno 50 g NO NO SPE (Extrelut NT-3) SPE (Extrelut NT-3/ C18/ ALB) SPE (Extrelut NT-3 e C18) OC+PYR Metodo interno 1 g GPC OP OC Metodo interno 5 g Dietil Etere PYR SPE (Extrelut NT-3) OP Metodo interno 5 g Dietil Etere SPE (Silice) Colonna di Florisil OP: asse di composti non analizzata Colonna di Florisil solvente solvente solvente solvente solvente (PCB 209) GC-MS/MS (QQQ) (Fenpropatrin) GC-MS/MS (QQQ) (Cumafos) GC-MS/MS (QQQ) GC-MS/MS (QQQ) GC-MS/MS (QQQ) sistema a doppia colonna GC-ECD ISS -SPE X Convegno PYR: asse di composti non analizzata (Extrelut NT-3 e C18) solvente GC-NPD GC-NPD Purificazione - SPE (su cartuccia/dispersiva) - GPC (da sola o combinata con SPE/ cromatografia su colonna) - congelamento

13 Metodi usati dai laboratori italiani nell EUPT AO-07 (cont.) Lab asse analiti Riferimenti Metodo OC Metodo interno 1 g PYR Metodo interno 1 g OP Metodo interno 1 g Annex 2 (Tiacloprid) OC+PYR+OP + Annex 2 (Bosalid) Metodo interno 1 g Campione Acetone Esano Acetone Esano Acetone Esano Acetone Esano Solvente di estrazione Metodo interno 10 g ACN NO NO OC+PYR+OP Metodo interno ACN 53 OC+PYR+OP Metodo interno 5 g ACN: Acetone: Dietil Etere 50:25:25 55 OC+PYR+OP EN : g Esano 58 OC+PYR+OP 71 OC+PYR+OP OC+PYR+OP+ Annex 2 (Boscalid, Tetraconazolo, Tiacloprid) EN (QuEChERS - tampone citrato) EN (QuEChERS - tampone citrato) 5 g Etil Acetato NO SI 5 g ACN SI OC Metodo interno 50 g NO NO PYR Metodo interno 50 g NO NO OP Metodo interno 50 g NO NO Aggiunta H2O Correzione ph Purificazione 1 NO NO GPC SPE (Silice) NO NO GPC SPE (Alu-N) NO NO GPC SPE (Alu-N) NO NO GPC SPE (Alu-N) SPE (C18, 2 g) NO NO GPC Dispersive SPE (PSA/MgSO4) SPE (Extrelut NT-3) SPE (Extrelut NT-3/ C18/ ALB) SPE (Extrelut NT-3 e C18) OC+PYR Metodo interno 1 g GPC OP OC Metodo interno 5 g Dietil Etere PYR EN (QuEChERS - tampone citrato) SPE (Extrelut NT-3) OP Metodo interno 5 g Dietil Etere SPE (Silice) NO SI (per OP) NO 3 g ACN SI SI SPE (Extrelut NT-3) GPC Dispersive SPE (PSA/MgSO4) SPE (Florisil, 1g) Congelamento Colonna di Florisil Purificazione 2 OP: asse di composti non analizzata Colonna di Florisil solvente matrice matrice 1-livello matrice 1-livello matrice 1-livello matrice solvente solvente solvente solvente solvente Calibrazione (delta-hch) (PCB 198) GC-NPD (Ethion) LC-MS/MS (QQQ) GC-MSD (PCB 209) GC-MS/MS (QQQ) (Malation d10) (PCB 209) GC-MS/MS (QQQ) (Fenpropatrin) GC-MS/MS (QQQ) (Cumafos) Determinazione (Standard Interno) diverse colonne (RTX-5) diverse colonne (RTX-5) GC-MS/MS (QQQ) GC-MS/MS (QQQ) GC-MSD GC-MSD GC-MS/MS (QQQ) GC-MS/MS (QQQ) GC-MS/MS (QQQ) sistema a doppia colonna GC-ECD Conferma ISS -SPE X Convegno PYR: asse di composti non analizzata (Extrelut NT-3 e C18) matrice matrice matrice solvente (DCB) GC-MSD (TCPP) OC+ PYR: OP: GC-NPD OC: GC-MSD (PCB 52) PYR+OP+Annex2 LC-MS/MS (QQQ) GC-NPD GC-Ion Trap diverse colonne GC-NPD Determinazione e conferma 7 (+1)/11 Lab: detector MSD o MS/MS 3/11 Lab: doppia colonna 1/11 Lab: uso di un secondo strumento ma stessa tipologia di detector 6/11 Lab: Standard Interno Calibrazione 10/11 Lab: calibrazione multilivello 7/11 Lab: calibrazioni in matrice Correzione per il recupero 2/11 Lab: per tutti gli analiti (es. Standard Addition/ Standard Isotopici) 2/11 Lab: a seconda del recupero dell analita

14 EUPT AO-07: Risultati preliminari dei laboratori italiani Annex 1 : Analiti nello scopo dell'eupt AO-07 da ricercare obbligatoriamente asse OC PYR OP Rrecupero % del grasso dal campione test Principi attivi determinati cis-ordano trans-ordano p,p'-dde Endosulfan Solfato Esaclorobenzene (HCB) alfa-hch beta-hch gamma-hch (Lindano) Bifentrin Deltametrina Diazinon Paration (-etile) MRRL Mediana (mg/kg di grasso) Mediana Lab 8 Lab 10 Lab 35 Lab 53 Lab 55 Lab 58 Lab 71 Lab 89 Lab 91 Lab 101 Lab ,1 30,8 29,4 32,0 30,0 28,1 31,0 47,0 25,0 29,0 23,6 7,1 0,01 0,125 0,0-0,3-0,6 0,1 1,1-1,2-1,6 0,1 1,0-3,0 1, (*) ? 75 (*) 74? ,01 0,150 0,1-0,3-0,9 0,4 1,4 0,0-1,5 0,5 1,1-2,6 1, (*) 87 88? 75 (*) 76? ,01 0,109 0,2-0,9-1,3 0,0 0,8-3,1-1,6-0,5 2,9-2,8 n.d. (-3,6) (*) 97 78? 75 (*) 61? 112 0,01 0,194-0,4 0,4 2,8 5,0 1,6-2,6 n.a. 0,8 1,3-2,9 n.a (*) 89 80? 98? 60 0,01 0,096 0,6-0,1-0,2 0,2 0,9-2,9-1,2-1,2 n.a. -0,3-0,4 44 (*) 64 (*) 110 (*) 90 83? 70 (*) ,01 0,179 0,6 0,3-1,4 0,2 1,2 1,4-1,3 0,9-1,1-2,3 4,9 52 (*) (*) 89 85? 71 (*) 101? ,01 0,224 1,4 0,4-0,2 0,3 0,3 n.d. (-3,8) -1,6 1,4 0,3-2,8 n.d. (-3,8) 61 (*) (*) (*) 98? 60 0,01 0,073 0,0 0,3-1,4 0,0 1,0-2,1-1,4 0,7 4,8-1,8 1,8 69 (*) (*) 88 80? 76 (*) 78? ,01* 0,274 0,1-0,1-1,5 0,2 1,2-2,7-1,4 0,4 n.a. -2,8 n.a (*) 94 97? 70 (*) ,025 0,388 0,3-1,4 5,0 1,3-0,5 n.d. (-3,7) -1,0 1,5-1,0-2,9 n.a (*) (*) 63? 40 0,01* 0,275-0,3 0,3-1,2-0,2 1,2 4,0-1,4 1,3-0,9 n.a. -1, (*) 82 86? 79 (*) 86?? 0,05* 0,390-0,1 1,8-0,7 0,5 1,0-2,5-1,2 1,6-0,5 n.a. -1,9 z-score (Fit For Purpose, 25%) (*) 72 92? 86 (*) 116?? Legenda: n.a. = non analizzato n.d. = non determinato, corrispondente ad un falso negativo (*) = correzione per il recupero (Standrd addition / Standards isotopici) analisi NON in routine nel laboratorio Lab Lab Lab Laboratori che usano purificazione con GPC Laboratori che usano metodo EN (QuEChERS - tampone citrato) Laboratori che usano purificazione con SPE ISS - X Convegno

15 EUPT AO-07: Risultati preliminari dei laboratori italiani Annex 2 : Analiti nello scopo dell'eupt da ricercare su base volontaria Rrecupero % del grasso dal campione test Principi attivi determinati MRRL Mediana (mg/kg di grasso) Mediana Lab 8 Lab 10 Lab 35 Lab 53 Lab 55 Lab 58 Lab 71 Lab 89 Lab 91 Lab 101 Lab ,1 30,8 29,4 32,0 30,0 28,1 31,0 47,0 25,0 29,0 23,6 7,1 z-score (Fit For Purpose, 25%) Boscalid (F) Tetraconazolo (F) Tiacloprid (F) 0,05 0,528 n.a. 0,2 n.d. (-3,9) n.a. n.a. n.a. n.a. 0,9 n.a. n.a. n.a ,025 0,275 n.a. n.a. n.a. n.a. n.a. n.a. n.a. 1,3 n.a. n.a. n.a. 77 0,015 0,392-1,4 n.a. n.a. n.a. n.a. n.a. n.a. 0,4 n.a. n.a. n.a Legenda: n.a. = non analizzato n.d. = non determinato, corrispondente ad un falso negativo analisi NON in routine nel laboratorio (F) = "Fat soluble" determinazione: mg/kg di grasso Lab Lab Lab Laboratori che usano metodo EN (QuEChERS - tampone citrato) Laboratori che usano purificazione con GPC Laboratori che usano purificazione con SPE La maggior parte dei laboratori italiani non analizza in routine gli analiti dell Annex 2 4 Lab hanno analizzato i composti fortificati (recuperi buoni) 1 Lab ha analizzato tutti gli analiti fortificati: metodo analisi EN (QuEChERS) 1 Lab ha riscontrato un falso negativo ISS - X Convegno

16 Z-Scores dei laboratori italiani - Risultati preliminari (analiti Annex 1) asse OC PYR OP Categoria A Legenda: Rrecupero % del grasso dal campione test Principi attivi determinati cis-ordano trans-ordano p,p'-dde Endosulfan Solfato Esaclorobenzene (HCB) alfa-hch beta-hch gamma-hch (Lindano) Bifentrin Deltametrina Diazinon Paration (-etile) MRRL Mediana (mg/kg di grasso) Mediana Lab 8 Lab 10 Lab 35 Lab 53 Lab 55 Lab 58 Lab 71 Lab 89 Lab 91 Lab 101 Lab ,1 30,8 29,4 32,0 30,0 28,1 31,0 47,0 25,0 29,0 23,6 7,1 0,01 0,125 0,0-0,3-0,6 0,1 1,1-1,2-1,6 0,1 1,0-3,0 1, (*) ? 75 (*) 74? ,01 0,150 0,1-0,3-0,9 0,4 1,4 0,0-1,5 0,5 1,1-2,6 1, (*) 87 88? 75 (*) 76? ,01 0,109 0,2-0,9-1,3 0,0 0,8-3,1-1,6-0,5 2,9-2,8 n.d. (-3,6) (*) 97 78? 75 (*) 61? 112 0,01 0,194-0,4 0,4 2,8 5,0 1,6-2,6 n.a. 0,8 1,3-2,9 n.a (*) 89 80? 98? 60 0,01 0,096 0,6-0,1-0,2 0,2 0,9-2,9-1,2-1,2 n.a. -0,3-0,4 44 (*) 64 (*) 110 (*) 90 83? 70 (*) ,01 0,179 0,6 0,3-1,4 0,2 1,2 1,4-1,3 0,9-1,1-2,3 4,9 52 (*) (*) 89 85? 71 (*) 101? ,01 0,224 1,4 0,4-0,2 0,3 0,3 n.d. (-3,8) -1,6 1,4 0,3-2,8 n.d. (-3,8) 61 (*) (*) (*) 98? 60 0,01 0,073 0,0 0,3-1,4 0,0 1,0-2,1-1,4 0,7 4,8-1,8 1,8 69 (*) (*) 88 80? 76 (*) 78? ,01* 0,274 0,1-0,1-1,5 0,2 1,2-2,7-1,4 0,4 n.a. -2,8 n.a (*) 94 97? 70 (*) ,025 0,388 0,3-1,4 5,0 1,3-0,5 n.d. (-3,7) -1,0 1,5-1,0-2,9 n.a (*) (*) 63? 40 0,01* 0,275-0,3 0,3-1,2-0,2 1,2 4,0-1,4 1,3-0,9 n.a. -1, (*) 82 86? 79 (*) 86?? 0,05* 0,390-0,1 1,8-0,7 0,5 1,0-2,5-1,2 1,6-0,5 n.a. -1, (*) 72 92? 86 (*) 116?? n analiti target fortificati (n=12) determinati dal Lab % analiti target fortificati determinati dal Lab (90%) Falsi Positivi (n=0) Falsi Negativi (n.d.) n.a. = non analizzato n analiti fortificati che non nello scopo del Lab (n.a.) n z-score Accettabili ( z 2) n z-score Questionabili (2< z 3) n z-score Non Accettabili ( z > 3) n.d. = non determinato, corrispondente ad un falso negativo (*) = correzione per il recupero (Standrd addition / Standards isotopici) analisi NON in routine nel laboratorio z-score (Fit For Purpose, 25%) Lab Lab Lab Laboratori che usano purificazione con GPC Laboratori che usano metodo EN (QuEChERS - tampone citrato) Laboratori che usano purificazione con SPE 6 Lab cat. A 5 Lab z-scores Accettabili 1 Lab molti z-scores Questionabili 5 Lab z-scores Non-accettabili 4 Falsi negativi 8 analiti n.a. ISS - X Convegno

17 Z-Scores dei laboratori italiani - Risultati preliminari (analiti Annex 2) Rrecupero % del grasso dal campione test Principi attivi determinati Boscalid (F) Tetraconazolo (F) Tiacloprid (F) n z-score Accettabili ( z 2) n z-score Questionabili (2< z 3) n z-score Non Accettabili ( z > 3) MRRL Mediana (mg/kg di grasso) Mediana Lab 8 Lab 10 Lab 35 Lab 53 Lab 55 Lab 58 Lab 71 Lab 89 Lab 91 Lab 101 Lab ,1 30,8 29,4 32,0 30,0 28,1 31,0 47,0 25,0 29,0 23,6 7,1 0,05 0,528 n.a. 0,2 n.d. (-3,9) n.a. n.a. n.a. n.a. 0,9 n.a. n.a. n.a ,025 0,275 n.a. n.a. n.a. n.a. n.a. n.a. n.a. 1,3 n.a. n.a. n.a. 0,015 0,392-1,4 n.a. n.a. n.a. n.a. n.a. n.a. 0,4 n.a. n.a. n.a (n.d.) z-score (Fit For Purpose, 25%) 77 Legenda: n.a. = non analizzato n.d. = non determinato, corrispondente ad un falso negativo (*) = correzione per il recupero (Standrd addition / Standards isotopici) analisi NON in routine nel laboratorio (F) = "Fat soluble" determinazione: mg/kg di grasso Lab Lab Lab Laboratori che usano metodo EN (QuEChERS - tampone citrato) Laboratori che usano purificazione con GPC Laboratori che usano purificazione con SPE 1 Lab ha ottenuto tutti z-score Accettabili ed ha analizzato i 3 analiti fortificati (metodo di analisi EN (QuEChERS); determinazione LC-MS/MS (QQQ)) Tutte le determinazioni analitiche sono state fatte con detectors MSD o MS/MS ISS - X Convegno

18 EUPT AO-07 Falsi positivi riscontrati Antiparassitari Fortificati Possibili errori Coeluizioni (es: orpirifos/paration; alpha-endosulfan/ cis-ordano; 4,4 - Metossicloro/ Bifentrin) Interferenti Standards IMPORTANTI VALUTAZIONI PER L IDENTIFICAZIONE Tecnica di conferma (MSD; MS/MS) 1.Bifentrin 2.cis-ordano 3.trans-ordano 4.p,p -DDE 5.Deltametrina 6.Diazinone 7.Endosulfan Solfato 8.HCB 9.alfa-HCH 10.beta-HCH 11.gamma-HCH 12.Paration (-etile) Selezione m/z adeguate (selettive e non interferite) Rapporto delle abbondanze degli ioni ISS - X Convegno

19 Falsi positivi: alfa-endosulfan (in presenza di cis-ordano) TR vicini Pulizia del sistema cromatografico m/z uguali Rapporto delle abbondanze degli ioni ISS - X Convegno

20 Falsi positivi: alfa-endosulfan in presenza di cis-ordano 100 alfa-endosulfan DataPool: m/z = O S O O (mainlib) Endosulfan I 241 cis-ordano DataPool: m/z = (mainlib) cis-chlordane ISS - X Convegno

21 Falsi positivi: alfa-endosulfan in presenza di cis-ordano Rapporto delle abbondanze degli ioni 100 alfa-endosulfan? DataPool: m/z = O S O O O S O O (mainlib) Endosulfan I (mainlib) Endosulfan I Analita presente nel campione 30 cis-ordano DataPool: m/z = (mainlib) cis-chlordane (mainlib) cis-chlordane 241 ISS - X Convegno

22 Falsi positivi: alfa-endosulfan in presenza di cis-ordano Rapporto delle abbondanze degli ioni alfa-endosulfan? DataPool: m/z = O O S O O 85 S O O (mainlib) Endosulfan I (mainlib) Endosulfan I Analita presente nel campione cis-ordano DataPool: m/z = (mainlib) cis-chlordane (mainlib) cis-chlordane 373 ISS - X Convegno

23 Determinazione del grasso da panna liquida Distribuzione dei risultati dei laboratori partecipanti all EUPT AO dati degli altri Lab italiani Dati non accurati: metodi interni o non specifici per la matrice test 105 ISS - X Convegno

24 EUPT AO-07 - Confronto dei risultati preliminari dei laboratori italiani ed europei Laboratori italiani n di laboratori italiani partecipanti = 11 Laboratori europei n di laboratori totali (UE+EFTA) partecipanti = 102 asse Principi attivi determinati n n.d. n n.a. Lab che hanno fornito dati % Lab che analizzano l'analita target % z-score Accettabile % z-score Questionabile % z-score Non accettabile n n.d. n n.a. Lab che hanno fornito dati % Lab che analizzano l'analita target % z-score Accettabile % z-score Questionabile % z-score Non accettabile Analiti nello scopo dell'eupt AO-07 da ricercare in manieara obbligatoria (Annex 1 del protocollo) OC PYR OP cis-ordano trans-ordano p,p'-dde Endosulfan Solfato HCB alfa-hch beta-hch gamma-hch Bifentrin Deltametrina Diazinon Paration (-etile) Analiti nello scopo dell'eupt AO-07 da ricercare su base volontaria (Annex 2 del protocollo) Boscalid (F) Tetraconazolo (F) Tiacloprid (F) CONSIDERAZIONI COMUNI OC ed OP: analizzati da più del 90% dei laboratori Legenda: n.a. = non analizzato n.d. = non determinato, corrispondente ad un falso negativo (F) = "Fat soluble" determinazione: mg/kg di grasso PYR: ricercati da ca % dei laboratori (molti n.a.) Analiti dell Annex 2: analizzati da un minor numero di laboratori ISS - X Convegno

25 Endosulfan Solfato: esempio OC (risultati preliminari) Laboratori italiani 9 Lab che hanno fornito dati (82% Lab IT) 2 - n.a. 0 - n.d. (Falsi negativi) 5 - Z-Scores Accettabili (56%, Lab IT) 3 - Z-Scores Questionabili (33%, Lab IT) 1 - Z-Scores Non accettabile (11%, Lab IT) Lab 8 Lab 10 Lab 35 Lab 53 Lab 55 Lab 58 Lab 71 Lab 89 Lab 91 Lab 101 Lab 105-0,4 0,4 2,8 5,0 1,6-2,6 n.a. 0,8 1,3-2,9 n.a. ISS - X Convegno

26 Bifentrin: esempio PYR (risultati preliminari) Laboratori italiani 9 - Lab che hanno fornito dati (82% Lab IT) 2 - n.a. 0 - n.d. (Falsi negativi) 7 - Z-Scores Accettabili (78%, Lab IT) 2 - Z-Scores Questionabili (22%, Lab IT) 0 - Z-Scores Non accettabile (0%, Lab IT) Lab 8 Lab 10 Lab 35 Lab 53 Lab 55 Lab 58 Lab 71 Lab 89 Lab 91 Lab 101 Lab 105 0,1-0,1-1,5 0,2 1,2-2,7-1,4 0,4 n.a. -2,8 n.a. ISS - X Convegno

27 Paration(-etile): esempio OP (risultati preliminari) Laboratori italiani 10 - Lab che hanno fornito dati (91% Lab IT) 1 - n.a. 0 - n.d. (Falsi negativi) 9 - Z-Scores Accettabili (90%, Lab IT) 1 - Z-Scores Questionabili (10%, Lab IT) 0 - Z-Scores Non accettabile (0%, Lab IT) Lab 8 Lab 10 Lab 35 Lab 53 Lab 55 Lab 58 Lab 71 Lab 89 Lab 91 Lab 101 Lab 105-0,1 1,8-0,7 0,5 1,0-2,5-1,2 1,6-0,5 n.a. -1,9 ISS - X Convegno

28 Boscalid e Tetraconazolo: esempio di analiti dell Annex 2 (risultati preliminari) Composti dell Annex 2: analizzati da ca % dei partecipanti all EUPT AO-07 Boscalid Tecniche analitiche usate per il Boscalid e Tetraconazolo: GC-ECD GC-MSD LC-MSD Tetraconazolo La distribuzione dei risultati è analogamente ripartita tra le varie tecniche di determinazione ISS - X Convegno

29 EUPT AO-07 - Deviazione Standard Relativa robusta (Q) Q = Deviazione Standard robusta calcolata con l algoritmo Q (DIN :2003) Buona stima della Deviazione Standard, con minima influenza di risultati isolati OC OP PYR EUPT AO-07 OC % OP % PYR % Annex % da Annex 2 ISS - X Convegno

30 Partecipazione Conclusioni EUPT AO-07 Buona partecipazione dei laboratori italiani; tutti i laboratori registrati hanno fornito dati Numero dei LU di settore è aumentato (IZS, ARPA, APPA) Necessaria la partecipazione di tutti i laboratori di controllo ufficiale (art. 28 Reg. (CE) n. 396/2005) Prestazioni dei laboratori Analiti analizzati Annex 1: in generale, ampliato il numero degli analiti (OC, OP e PYR) scopo del laboratorio Annex 2: scarsamente analizzati (su base volontaria) Determinazione del grasso nel campione test: usare metodi più accurati/robusti (problema IT-EU) Lab in categoria A: anmentato il numero dei laboratori con prestazioni adeguate Z-Scores: riscontrati alcuni z-scores Non accettabili ; falsi positivi (2) e falsi negativi (4) Obiettivi di miglioramento (compatibilmente con le risorse dei laboratori) Incrementare il numero di analiti nello scopo del laboratorio: includere i composti dell Annex 2 (Programma coordinato di controllo pluriennale dell Unione Europea, analisi su base volontaria) Applicare le procedure interne di controllo qualità per tenere sotto controllo la prestazione del laboratorio Miglioramento dei metodi analitici Determinazione del grasso del campione test MSD e MS/MS come tecnica di conferma Determinazione in LC/MSD Miglioramento del recupero degli analiti (alcuni laboratori) Metodi multi classe e multi residuo (alcuni laboratori) ISS - X Convegno

31 Proficiency Tests (PT) in programmazione nel 2013 PT Europeo: EUPT AO-08 Organizzatori: EURL-AO Partecipanti: LNR-AO e LU di settore dei Paesi europei Date: Pubblicazione protocollo e lista dei composti nello scopo del PT: Dicembre 2012 Registazione (obbligatoria): Gennaio 2013 Invio materiale test: 4 Marzo 2013 Scadenza risultati da inviare: 8 Aprile 2013 Matrice: carne di pollo (cruda) Antiparassitari scopo dell EUPT: analiti scopo del precedente EUPT AO-07 (OC, OP, PYR ed altri composti) Annex 1 (composti da analizzare obbligatoriamente) Annex 2 (analiti da determinare su base volontaria) Commissione: aumentare gli analiti da determinare e le tecniche di determinazione usate (GC - LC) ISS - X Convegno

32 Proficiency Tests (PT) in programmazione nel 2013 PT Nazionali: Olio di oliva: COIPT-12 (2012) COIPT-13 (2013) Strutto (2012, rinviato nel 2013) Organizzatori: LNR-AO italiano Partecipanti: - LNR-AO e LU e Laboratori privati di settore italiani - LNR-AO e LU di settore dei Paesi europei Date e matrici: - Primavera 2013 (PT su olio di oliva) - Autunno 2013 (PT su strutto) Antiparassitari scopo dei PT: Selezionati dagli organizzatori ISS - X Convegno

33 Organizzazione di PT da parte del LNR-AO Proficiency Test su strutto PT programmato nell autunno 2012 Riunione EURL-AO/NRLs-AO (9-10 Ottobre 2012): possibilità che il EURL-AO selezionasse lo strutto come matrice per il EUPT AO-08 (2013) LNR-AO: PT su strutto rinviato! Dicembre 2012: pubblicazione sul portale EURLs del calendario dell EUPT AO-08 (annuncio della matrice: carne di pollo cruda) Proficiency Test su strutto: Autunno 2013 ISS - X Convegno

34 Grazie per l attenzione! Domande? Patrizia Pelosi patrizia.pelosi@iss.it ISS - X Convegno