Le analisi di Patologia Molecolare in ICP: nuovo flusso di lavoro. A che punto siamo: riassunto. A che punto siamo: riassunto

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1 A che punto siamo: riassunto Analisi totali Le analisi di Patologia Molecolare in ICP: nuovo flusso di lavoro N u m e ro te s ts * Pat. Mol. FISH Anni Pannello tiroide: 252 (2013) 192 (2014) Formazione interna ICP A che punto siamo: riassunto Punti critici Tipi di protocolli 30 A n n i Pat.Mol. FISH 1. Quali marcatori analizzare 2. Procedura di accettazione - selezione Numero di protocolli Carcinomi polmonari Criticità Procedure di accettazione, selezione. Nuove regole: EGFR KRAS (solo ex2): mutazioni ALK: FISH su tutti i casi al momento della diagnosi Richiedere 12 sezioni seriate per analisi molecolari (oltre alle sezioni per diagnosi) 1

2 Procedura di accettazione/selezione -Punti critici Il caso non è stato accettato Il caso è stato accettato due volte Il caso è stato accettato sia in citologia sia in istologia Guardiamo al futuro Il materiale scelto non era il più idoneo L HE di riferimento (per sezioni spesse) è stata archiviata L HE di riferimento (per sezioni spesse) non è stata acclusa Sull HE di riferimento (per sezioni spesse) non è stata segnalata la parte Per l analisi dei microsatelliti non è stata selezionata la mucosa sana Sono state tagliate sezioni al posto di preparare la provetta E stata preparata la provetta al posto di tagliare le sezioni La lamella non è stata staccata Tempo: lunedìè la dead-line Flusso di lavoro (1) Richieste esterne Richieste interne Mail (solo FAX segreteria come avviso) telefonate (solo come avviso) Copia richiesta a Biol Mol con nome del patologoa cui è stata data Patologo istologico 3. -Selezionare repere -allegare HE con zona tumorale segnata -indicare % cell tumorali -indicare tipo di marcatore da analizzare 1. Controllo armonia 2. Scelta materiale migliore tra quelli disponibili 4. Compilare NUOVO foglio di richiesta interno (NO FAX) con analisi molecolari da fare e tagli/materiale 5. Segreteria per nuovo numero (cito/isto a seconda del materiale) 6. Portare richiesta a Lab. Istologia per tagli ecc 7. Valutare HE finale 8. Mettere su armadio apposito citologico 3. -Valutare vetri -segnare zone e % cellule tumorali -indicare materiale (citoincluso Striscio PAP ThinPrep) FISH: 1 vetro per marcatore Biol Mol: 1 vetro (valutare microdissezione) Nuovo foglio di lavoro interno Flusso di lavoro (2) FARE SEMPRE HE FINALE dopo i tagli usare solo vetri carichi + -Se richiesta solo FISH o solo Biol Mol DNA: -tutte sezioni in bianco 4 um -Se richiesta FISH + Biol Mol DNA: * per polmone vedi protocollo specifico -Se richiesta HPV : -Se richiesta solo Biol Mol RNA : -Se richiesta solo Biol Mol DNA + RNA : (es Tiroidi) -6 vetri -tutte sezioni in bianco 4 um -10 vetri - come Biol Mol DNA ma cambio lama ( LAMA NUOVA ) -2 sezioni in bianco 10 um (RNA) -6 sezioni in bianco 4 um (DNA) -2 sezioni in bianco 10 um (RNA) 2

3 Dobbiamo ricordarci che Concludendo TAB BIOLOGO MOLECOLARE CITOLOGO ONCOLOGO PATOLOGO CITOGENETISTA aumenta l accuratezza diagnostica! Prima qualche novità logistica Nuova zona di accettazione nel laboratorio PCL Esterna ai locali tecnici Nel corridoio in cima alle scale al primo piano Accettazione materiale in arrivo o in partenza da CIT Esattamente come fin ora. Accettazione materiale in arrivo o in partenza da DM Nuova ubicazione. Sostituisce quella nel locale 108.tavolo archivio vetrini e blocchetti. 3

4 Accettazione richiesta di analisi ICH, colorazioni istochimiche, N, NR Nuova ubicazione. Sostituisce quella nel locale 109, vicino ai lavandini. Il personale PCL assicura la presa a carico entro i termini previsti. Nuovo flusso per analisi DM Accettazione Il MP lascia le richieste nella zona di accettazione, cassetto DM in arrivo Per ogni caso, un plateau dedicato, con HE originale (= HE scelta da MP in archivio) marcata e formulario di richiesta. TAB responsabile Il TAB jolly, designato dal piano settimanale PCL, è responsabile di prendere a carico le richieste il più presto possibile Il lunedì, entro le 12:00 (prima TAB microtomo 1 responsabile analisi Biol Mol e TAB immuno responsabile FISH) Stampa dei vetri I vetri sono preparati con le stampanti PC115 e PC133, tracciando in Armonia le prestazioni erogate. Nuovo: C è un computer per ogni stampante, così da garantire la stampa veloce (e non in coda) dei vetri necessari. 4

5 Defect.le due macchine, saranno fornite a breve.ma attualmente le due stampanti sono attivate da una sola macchina. La velocità di stampa è determinata dalle stampe in corso Microtomo dedicato Tutte le analisi per DM sono trattate nel locale 108, sul microtomo dedicato, davanti alla finestra. Novità Sono definitivamente abolite i tagli in provetta. Unificato il tipo di vetro (carico +) Histobond. Unificato lo spessore a 4 micron per tutti i tipi di analisi Biol Mol e FISH (eccezione Biol Mol RNA a 10 micron). Novità: HE finale (HE fin) L ultima sezione prelevata, dopo le sezioni allestiste sui vetri Biol Mol o FISH, è destinata alla colorazione HE (vetro nominato HE fin) Novità: nuove denominazioni per vetri FISH/DNA = sezione a spessore 4 micron HPV = sezione a spessore 4 micron, modalità tutto pulito Tabella riassuntiva Riferirsi alla tabella riassuntiva per preparare le sezioni necessarie per esami Biol Mol o FISH RNA= spessore 10 micron 5

6 FARE SEMPRE HE FINALE dopo i tagli usare solo vetri Histobond -Se richiesta solo FISH o solo Biol Mol DNA: -Se richiesta FISH + Biol Mol DNA: * per polmone vedi protocollo specifico -Se richiesta HPV : -Se richiesta solo Biol Mol RNA : -Se richiesta solo Biol Mol DNA + RNA : 6 sezioni in bianco a 4 um allestite su 6 vetri (FISH/DNA) 10 sezioni in bianco a 4 um allestite su 10 vetri (FISH/DNA) 6 sezioni in bianco a 4 um allestite su 6 vetri (HPV) ) tutto pulito 2 sezioni in bianco a 10 um allestite su 2 vetri (RNA) + HE finale 6 sezioni in bianco a 4 um (FISH/DNA) 2 sezioni in bianco a 10 um (RNA) Casi in stand by in PCL fino a completamento I vetri HE finsono avviati alla colorazione automatica. Il resto dei vetri (+ richiesta), rimane in stand by su plateau aperto (asciuga) sul davanzale di fronte al microtomo, fino al termine della colorazione HE. (Abolita l incubazione in stufa a 37 C) Caso completo Appena HE finè colorato, viene trasferito su plateau e il caso completo viene consegnato al MP indicato sulla richiesta come patologo richiedente. Casi con IHC richiesta in parallelo I vetri IHC sono avviati alle colorazioni immunoistochimiche segnalando al TAB di turno in immuno che il resto del caso è in stand by su davanzale. Appena IHC terminata, si trasferisce su plateau e il caso completo viene consegnato al MP indicato sulla richiesta come patologo richiedente. Il caso passa in DM Il MP segna HE fin, e/o interpreta IHC e porta il caso completo nella zona accettazione, cassetto DM in partenza. Lunedì entro le 14:00, altrimenti perde il turno quindi perde una settimana. Protocollo polmoni In aggiunta ai marcatori IHC richiesti, il TAB allestisce 12 sezioni native seriate, prima di HE fin. Marcatori IHC colorati e sezioni native seriate, sono consegnate al MP richiedente sul plateau. (lasciare asciugare le sezioni native durante il ciclo di colorazione IHC) 6

7 Grazie per l attenzione 7