EMBRIOLOGIA Docente: Dr. Alessia Ongaro Orario ricevimento: martedì ore 12.00-13.00 Modalità di esame: ORALE Iscrizione: ONLINE all esame di Embriologia Testi consigliati: -Embriologia, Autori: M. Barbieri, P. Carinci, Casa Editrice Ambrosiana (Terza edizione) -Istologia orale, Autore:Ten Cate, Casa Editrice Piccin
L Embriologia studia 2 eventi complementari: GENERAZIONE come un organismo produce un uovo SVILUPPO come un uovo dà origine ad un organismo. Sviluppo è l emergere di strutture organizzate da un gruppo di cellule inizialmente informe cap 1 e 2 del testo consigliato
Quante e quali cellule sono necessarie allo sviluppo di un nuovo individuo? RIPRODUZIONE SESSUATA Gli embrioni si sviluppano da una singola cellula (ZIGOTE) che deriva dalla fusione di 2 cellule (gameti): - un gamete maschile (spermatozoo) e - un gamete femminile (uovo)
Tappe importanti per l embriologia La generazione La generazione di un nuovo individuo comincia con 2 meiosi nelle cellule germinali che originano i gameti si realizza con la fecondazione dei gameti che origina lo ZIGOTE Il numero diploide viene ricostituito alla fecondazione I cromosomi contenuti nel nucleo dello zigote derivano in ugual numero dai 2 nuclei parentali. Aploide (N) Aploide (N) La costanza del numero cromosomico nelle cellule somatiche viene mantenuta, di generazione in generazione mediante una divisione riduzionale (meiosi) che interviene nelle cellule germinali.
Il PROBLEMA DELLO SVILUPPO come un uovo produce un organismo processi fondamentali: Proliferazione cellulare Differenziamento istologico Morfogenesi Apoptosi
Lo studio dello sviluppo è stato tradizionalmente riferito a quella fase della vita di un organismo che è compresa tra la fecondazione e la nascita, (segmentazione, gastrulazione/neurulazione, organogenesi) EMBRIOLOGIA Ma lo sviluppo non termina alla nascita, ma continua in parte anche nell età adulta - Ogni giorno rinnoviamo cellule della cute; il midollo osseo forma milioni di nuovi eritrociti in ogni minuto della nostra vita - Alcuni animali sono capaci di rigenerare parti staccate dal corpo
I processi dello SVILUPPO PROLIFERAZIONE CELLULARE Proliferazione cellulare Processo di grande importanza per tutta la vita dell organismo (dallo zigote a 10.000 miliardi cellule adulto) Durante lo sviluppo le cellule somatiche si dividono per mitosi e la divisione è strettamente regolata nell ambito del ciclo cellulare
I processi dello SVILUPPO Differenziamento cellulare DIFFERENZIAMENTO CELLULARE Un unica cellula, l uovo fecondato, dà origine a centinaia di tipi cellulari differenti: cell. muscolari, nervose, endocrine, ecc. Questa realizzazione della diversità cellulare è detta differenziamento. Poiché ogni cellula di un determinato organismo contiene la stessa serie di geni (equivalenza genomica), come può questa serie uguale di istruzioni genetiche produrre tipi differenti di cellule? L espressione selettiva di geni specifici nei diversi tipi cellulari
NEURONE DIFFERENZIAMENTO I processi dello SVILUPPO DIFFERENZIAMENTO CELLULARE IL DIFFERENZIAMENTO è CELLULA muscolare l acquisizione delle caratteristiche specifiche di una cellula specializzata a svolgere una precisa funzione (FENOTIPO): Caratteristiche morfologiche Caratteristiche biochimiche Caratteristiche funzionali GRANULOCITA EOSINOFILO
I processi dello SVILUPPO DIFFERENZIAMENTO CELLULARE Tipi cellulari differenziati nella struttura e nella funzione caratteristici del corpo dei vertebrati Ogni cellula differenziata esprime un proprio corredo di geni e quindi proteine
Le cellule staminali DEFINIZIONE e proprietà: Cellula non differenziata di origine embrionale, fetale o adulta Cellula in grado di dividersi e quindi di autorinnovarsi (self-renewal) senza differenziarsi Cellula che può originare cellule (cellule progenitrici) che si differenziano andando a costituire i diversi tipi cellulari differenziati dei tessuti. DIFFERENZIAMENTO
Localizzazione delle cellule staminali tipo Descrizione Esempio Totipotente Pluripotenti Multipotenti Unipotenti cellule staminali embrionali cellule staminali nell adulto Può originare un intero individuo (tessuti embrione e annessi embrionali) Cellule che possono originare tutti i diversi tipi cellulari di un organismo Cellule che possono originare pochi o un solo tipo cellulare differenziato Cellule embrionali precoci (morula) cellule nodo embrionale della blastocisti Tessuti fetali, tessuti adulto
Cellule e differenziamento Il differenziamento è un processo graduale che avviene per stadi. Il primo stadio è la determinazione cellulare in cui la cellula non differenziata diventa destinata solo ad alcuni tipi di differenziamento (COMMITTED CELL). Si realizza tramite modificazioni successive nella espressione genica e quindi nei componenti molecolari prodotti dalla cellula
Dinamica del DIFFERENZIAMENTO CELLULARE -Lo sviluppo di tipi cellulari specializzati è il differenziamento - Queste modificazioni nella biochimica e nella funzione della cellula sono precedute da un processo: il preordinamento (commitment) della cellula per un determinato destino - Una cellula committed non differisce fenotipicamente dal suo stato non commissionato, ma il suo destino di sviluppo è limitato Il processo del commitment è suddiviso in due stadi: I specificazione (le cellule sono in grado di differenziarsi in modo autonomo se vengono poste in un ambiente neutro; però a questo stadio il loro destino può ancora essere modificato). II determinazione (le cellule si differenziano secondo il loro destino anche se in un ambiente che le indirizzerebbe in altro tipo cellulare; il loro destino non può più essere modificato). Sono commissionate in modo irreversibile.
Cellule e differenziamento: Un esempio Cellule dei somiti embrionali (mesoderma) si differenziano in mioblasti. I mioblasti sono i precursori delle cellule muscolari Precursori staminali embrionali mesodermici myod Altri geni muscolo-specifici off off mioblasto Determinazione: espressione myod o mef2 myod proteina off off Cellula muscolare (differenziata) Differenziamento: Espressione dei geni specifici della cellula muscolare myod Altri fattori di trascrizione (TFs) Miosina e altre Proteine muscolari
Quali sono i meccanismi alla base del DIFFERENZIAMENTO CELLULARE? Molecole segnale Prodotte ALL INTERNO delle cellule che si differenziano AUTODIFFERENZIAMENTO Trasmesse da un tessuto (INDUTTORE) ad un gruppo di cellule (RICEVENTE) INDUZIONE
INDUZIONE E il processo attraverso il quale un gruppo di cellule o di tessuti (INDUTTORE) agisce su un altro gruppo (RICEVENTE) per cambiare il loro destino. La capacità di rispondere è chiamata COMPETENZA. I SEGNALI CELLULARI sono essenziali per l induzione, per conferire la competenza alla risposta e per il dialogo tra cellule inducenti e riceventi Interazioni PARACRINE Interazioni IUXTACRINE
INTERAZIONI PARACRINE Le proteine sintetizzate da una cellula diffondono a breve distanza per interagire con altre cellule. I FATTORI PARACRINI attivano le vie di trasduzione del segnale
Fattori PARACRINI -FATTORI DI CRESCITA FIBROBLASTICI (FGF): angiogenesi, crescita assonica, differenziazione mesodermica; -Proteine WNT: sviluppo degli arti, del mesencefalo, somiti, apparato urogenitale; -Proteine hedgehog: nei mammiferi, 3 geni hedgehog: desert, indian e sonic, sviluppo arti, tubo neurale, Regionalizzazione intestino; -FATTORI DI CRESCITA TRASFORMANTI (TGF-β): include BMP, attivine, fattore inibente mulleriano, formazione ECM, ramificazione epiteliale nello sviluppo di polmoni, reni, gh salivari, formazione dell osso.
INTERAZIONI IUXTACRINE Sono mediate dalla via di trasduzione del segnale anche se NON coinvolge fattori diffusibili. Esistono 3 vie del segnale iuxtacrino: 1. Proteina di superficie interagisce con il recettore di una cellula adiacente (via di Notch) 2. Ligandi della matrice extracellulare che interagiscono con i loro recettori posti su cellule confinanti 3. Segnale diretto tra una cellula e l altra attraverso GIUNZIONI GAP
La regolazione della espressione delle molecole coinvolte negli eventi dello sviluppo fattori paracrini fattori iuxtacrini Molecole che possono specificare e differenziare un tipo cellulare possono essere definite molecole induttrici o morfogeni.
Induzione (identificata nei primi anni 1900) Es: Processo di induzione durante lo sviluppo dell occhio: Futuro encefalo Vescicola ottica Ectoderma del cristallino Peduncolo ottico Calice ottico Cornea Cristallino Futura retina 1 osservazione: rimuovendo la vescicola ottica non si forma il cristallino 2 osservazione: trapiantando la vescicola ottica in una zona dove si forma ectoderma, si forma un cristallino CONCLUSIONI: la vescicola ottica induce il cristallino nell ectoderma
Ma l induzione non è tutto
MORFOGENESI migrazioni cellulari Migrazione di cellule. Interazione tra cellule e ambiente: Proteine della matrice - laminina, fibronectina Molecole di adesione integrine proteine del citoscheletro Cellule embrionali (creste neurali) in migrazione Una cellula che migra aderendo all ambiente
I processi dello SVILUPPO MORFOGENESI MORFOGENESI (CAMBIAMENTI della FORMA): - organizzazione delle cellule nei tessuti e negli organi - creazione della forma interna ed esterna dell embrione Si realizza mediante: migrazioni cellulari aggregazioni cellulari ripiegamenti invaginazioni Eventi spiegabili a livello molecolare identificando le molecole coinvolte
MORFOGENESI adesioni fra cellule Adesione differenziale tra cellule embrionali 1 a dimostrazione di Holtfreter (1955) Proteine di adesione cellula-cellula: caderine
Proteine di adesione cellula-cellula: caderine Cellule epiteliali E-caderina Cellule neurali N-caderina
Un esempio di MORFOGENESI Ripiegamenti cellulari molecole coinvolte? - proteine del citoscheletro Cellule epiteliali E-caderina Cellule neurali N-caderina - molecole di adesione cellulare: caderine
MORFOGENESI apoptosi Un processo determinante per lo sviluppo embrionale è la morte cellulare programmata o apoptosi Apoptosi durante lo SVILUPPO della zampa di topo Cellula suicida La cellula morta viene fagocitata e digerita da una cellula adiacente
migrazione differenziamento Ogni evento descritto è legato alla produzione, nelle cellule interessate, delle molecole specificamente coinvolte nel processo stesso
Nel corpo tessuti e organi specializzati devono differenziarsi e prendere forma, ciascuno al posto giusto. Anteriore Embrione di uccello Ventrale Dorsale Abbozzo dell arto Distale Prossimale L abbozzo dell arto si sviluppa Posteriore Ala normale devono essere definiti gli assi principali dell embrione. Asse antero - posteriore (A-P) o cefalo-caudale Asse dorso ventrale (D-V) Asse dx-sin Le diverse parti del corpo devono costituire una porzione specifica del corpo Braccio e gamba, Braccio dx e sin, parte prossimale del braccio o distale (dita)
I processi dello SVILUPPO FORMAZIONE DEL PATTERN FORMAZIONE del PATTERN (ORGANIZZAZIONE SPAZIALE del piano corporeo) Nello sviluppo deve essere disegnato il piano corporeo complessivo (progetto architettonico). Anche se - sono costituiti dagli stessi tessuti - le differenze sono associate ad una diversa distribuzione degli stessi tipi di cellule (organizzazione) nello spazio Geni del differenziamento Geni della determinazione Spaziale (del pattern)
Organizzazione spaziale del piano corporeo Quali meccanismi determinano come organizzare le cellule nelle diverse parti del corpo? -Clusters di geni specifici (HOX GENES) -Fattori di trascrizione specifici -Espressione di proteine lungo l asse anteroposteriore in modo regionalizzato
facciamo un passo indietro DNA RNA PROTEINE Trascrizione Traduzione GENE x mrna x Proteina X
I fattori di trascrizione specifici : Si legano a sequenze specifiche sul promotore tramite il dominio di legame al DNA Facilitano l assemblaggio del macchinario basale di trascrizione
Come i fattori di trascrizione possono riconoscere i loro siti di legame sul DNA?
Domini di legame al DNA Homeodominio A dita di zinco (Zinc-Finger) Basico- a cerniera di leucine (Basic- Leucine Zipper) Elica-ansa-elica (Helix-Loop-Helix)
L omeodominio caratteristici dei geni omeotici (antennapedia, Oct-1 or -2, Hox) sequenza altamente conservata di 60 aa che forma una struttura a elica-ansa-elica-giro-elica (omeobox) si lega ad una sequenza consenso conservata : atta(taat) Gli omeodomini determinano il gene o i geni che ogni proteina andrà a regolare Gene omeobox (HOX) Proteina omeodominio
Lo studio dello sviluppo e della genetica dello sviluppo si avvale di modelli animali Embrioni facilmente osservabili Brevi cicli vita Genomi relativamente piccoli
Alcuni geni regolano complessi programmi di sviluppo Drosophila Melanogaster (moscerino della frutta) Mutante Antennapedia: mutata la regione regolatrice del gene, che ora si esprime nella testa: si sviluppano zampe invece di antenne
I geni HOX -Sequenza di 180 nucleotidi, detta homeobox, che codifica per una catena di 60 aminoacidi, detta omeodominio, presente negli invertebrati ma anche nei vertebrati -partecipano alla costruzione del piano corporeo e allo sviluppo dei componenti lungo l asse antero-posteriore -i geni Hox controllano altri geni durante lo sviluppo embrionale per mezzo di proteine che si attaccano fisicamente ad alcuni tratti di DNA e ne regolano la trascrizione
Geni selettori OMEOTICI Determinano le strutture fenotipiche, caratteristiche di ciascun segmento In Drosophila sono localizzati sul cromosoma 3 dove formano 2 complessi genici: - Antennapedia (ANT-C): 5 geni che determinano la struttura della testa e del torace - Bithorax (BX-C): determina le strutture del 3 segmento toracico e addome L insieme di questi due complessi è definito HOM
Geni selettori OMEOTICI nei VERTEBRATI I Vertebrati possiedono non 1 ma 4 complessi di geni con omeobox denominati HOX A, HOX B, HOX C, HOX D. I geni HOX sono allineati nello stesso ordine delle regioni del corpo di cui controllano lo sviluppo embrionale e i loro omeobox presentano forte omologia con Antennapedia ed Ultrabithorax.
CICLO VITALE dei METAZOI Metazoi : tutti gli organismi pluricellulari appartenenti al regno animale Protisti: eucarioti unicellulari I processi che vanno dalla generazione di un individuo alla sua riproduzione definiscono il CICLO VITALE. 7 FASI SUCCESSIVE conservate nel corso dell evoluzione 1. GAMETOGENESI 2. FECONDAZIONE Formazione dello zigote
CICLO VITALE dei METAZOI 3. SEGMENTAZIONE Mitosi successive dello zigote che originano cellule (BLASTOMERI) sempre più piccole Termina quando si è raggiunto il rapporto Nucleo/Citoplasma caratteristico della specie. NB Crea le prime DETERMINAZIONI differenziamento invisibile
CICLO VITALE dei METAZOI 4. GASTRULAZIONE Un insieme di movimenti che gettano le basi della architettura del futuro individuo MOVIMENTI MORFOGENETICI origina i tre foglietti: ECTODERMA: epidermide, tessuto nervoso MESODERMA: connettivo, derma, muscoli, rene, gonadi, cuore, sangue ENDODERMA : rivestimento del tubo digerente e organi annessi DIFFERENZIAMENTO
CICLO VITALE dei METAZOI 5. ORGANOGENESI: grandi cambiamenti morfogenetici Il corpo dell embrione viene suddiviso in aree dove vengono costruiti gli abbozzi degli organi. Si crea la struttura tridimensionale in cui si possono riconoscere le varie parti del futuro organismo. Nell uomo questo stadio è raggiunto all inizio del terzo mese: FETO
CICLO VITALE dei METAZOI 6. CRESCITA Gli abbozzi aumentano di volume ORGANI Le cellule acquistano nuova struttura e funzione DIFFERENZIAMENTO Al TERMINE L organismo diventa capace di vita indipendente
CICLO VITALE dei METAZOI 7. MATURITA SESSUALE L organismo acquista la capacità di produrre gameti e di riprodursi. Inizia un nuovo ciclo vitale
ANNESSI EMBRIONALI VERTEBRATI SUPERIORI (RETTILI; UCCELLI; MAMMIFERI ): solo una piccola parte dei blastomeri forma l embrione; il resto forma strutture che avvolgono, nutrono e proteggono l embrione Nei rettili e negli uccelli sono 4: AMNIOS - sacco che avvolge l embrione e gli permette di crescere nel liquido amniotico SACCO VITELLINO contiene il tuorlo, - sostanze che nutrono l embrione ALLANTOIDE formerà, con altri ts, cordone ombelicale CORION membrana che avvolge tutti gli altri, media gli scambi gassosi
Sono i mammiferi più evoluti ed hanno un 5 o annesso embrionale: la PLACENTA Mammiferi placentati Alla sua formazione contribuiscono sia la madre che l embrione. Lo sviluppo dell individuo avviene all interno del corpo della madre che attraverso la placenta fornisce nutrimento placenta
Riprendiamo il CICLO VITALE: nei MAMMIFERI Nei mammiferi segmentazione e gastrulazione sono separate da una fase di IMPIANTO dell embrione nell utero. L impianto realizza il contatto fisico tra embrione e utero La riga tratteggiata indica che parallelamente allo sviluppo dell embrione si sviluppano gli annessi
CICLO VITALE: nei MAMMIFERI N.B: Nei mammiferi segmentazione e gastrulazione sono separate da una fase di IMPIANTO dell embrione nell utero. Questa separazione significa che non può cominciare la gastrulazione se non è avvenuto l impianto Il primo scopo dell impianto è produrre un segnale (la gonadotropina corionica) che entra nel circolo sanguigno della madre, raggiunge le gonadi e modifica la secrezione ormonale in modo da impedire la mestruazione e con essa l eliminazione dell embrione stesso.
«Il genoma rappresenta un DIZIONARIO completo dell individuo, ma da tale dizionario non possiamo costruire un organismo più di quanto possiamo costruire un opera di Shakespeare da un dizionario delle parole inglesi» COMPITO DELL EMBRIOLOGIA Scoprire come viene usato il dizionario del genoma per scrivere il libro del corpo umano!