Le istruzioni fornite si riferiscono a Dako EnVision+ Dual Link System-HRP (DAB+).

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1 Dako EnVision + Dual Link System-HRP (DAB+) Codice K4065 Uso previsto Per uso diagnostico In Vitro. Le istruzioni fornite si riferiscono a Dako EnVision+ Dual Link System-HRP (DAB+). Questo kit è destinato all'uso con anticorpi primari di topo e coniglio reperiti dall'utente. Consente di effettuare l'identificazione qualitativa di antigeni mediante microscopia ottica su tessuti normali e patologici fissati in formalina e inclusi in paraffina, tessuti criostatati o preparati cellulari. È possibile utilizzare tessuti trattati con una varietà di fissativi, tra cui etanolo, B-5, Bouin, formalina di zinco e formalina neutra tamponata. Cenni introduttivi Principio della procedura Reagenti forniti EnVision+ Dual Link System-HRP è una tecnica di colorazione IHC a due fasi. basata su un polimero marcato con HRP (perossidasi di rafano) e coniugato con anticorpi secondari. Il polimero marcato non contiene né avidina né biotina, quindi la colorazione aspecifica derivante dall'attività endogena avidina-biotina in fegato, reni, tessuti linfoidi e sezioni criostatate è ridotta in modo significativo. Tutti i reagenti inclusi in EnVision+ Dual Link System-HRP con substrato (ad eccezione del cromogeno-substrato DAB+ liquido) sono pronti all'uso. Dal momento che si tratta di un metodo estremamente sensibile, le diluizioni ottimali dell'anticorpo primario sono fino a 20 volte superiori a quelle usate per la tecnica PAP tradizionale e possono essere notevolmente più alte rispetto ai metodi tradizionali ABC o LSAB. Questo protocollo rappresenta un sistema particolarmente valido con cui generare i segnali per la rivelazione di antigeni presenti in concentrazioni basse o per anticorpi primari a titolazione bassa. Gli anticorpi primari prodotti nel topo o nel coniglio reagiscono bene con il polimero marcato. L'interpretazione della colorazione positiva o dell'assenza di colorazione deve essere integrata con studi morfologici e istologici eseguiti con i controlli opportuni. L'eventuale attività di perossidasi endogena può essere sedata incubando il campione per 5 10 minuti con il prodotto Dual Endogenous Enzyme Block. In seguito, il campione viene incubato con un anticorpo primario di topo o di coniglio adeguatamente caratterizzato e diluito, infine viene incubato con il polimero marcato per 30 minuti ciascuno. Occorre sottolineare che per gli anticorpi che richiedono la digestione dell'enzima o il recupero del bersaglio, può essere necessario aumentare i tempi di incubazione dell'anticorpo primario e del polimero marcato di 5 10 minuti. La colorazione viene completata tramite un'incubazione di 5 10 minuti con l'uso di un cromogeno-substrato DAB+ (3,3'-diaminobenzidina) che genera un precipitato di colore marrone in corrispondenza del sito dell'antigene (per conoscere i possibili effetti cancerogeni del DAB, vedere Precauzioni). Codice K4065 Il kit comprende i seguenti materiali, sufficienti per 150 sezioni di tessuto basate su 100 µl per sezione: Quantità 1x15 ml Descrizione Dual Endogenous Enzyme Block Perossido di idrogeno 0,3% contenente sodio azide e levamisolo. 1x15 ml Polimero marcato Polimero marcato con perossidasi, coniugato con immunoglobuline di capra anti-topo e di capra anti-coniglio, in tampone Tris-HCl con proteina stabilizzante e un agente antimicrobico. 1x18 ml Substrate Buffer (tampone substrato) Soluzione tampone substrato, a ph 7,5, contenente perossido di idrogeno e un conservante. 1x1 ml Cromogeno DAB+ 3,3'-diaminobenzidina in soluzione cromogena. ( ) P04048IT_01/K4065/ p. 1/7

2 Materiali necessari ma non forniti Precauzioni Acqua deionizzata o distillata Etanolo, assoluto e al 95% Xilene, toluene o derivati dello xilene Anticorpi primari e reagente di controllo negativo Vetrini, polilisinati oppure silanizzati del tipo Silanized Slides (codice S3003) (vedere la sezione relativa all'aderenza dei tessuti inclusi in paraffina) Tessuto di controllo positivo e negativo Idrossido di ammonio 15 mol/l, diluito a 0,037 mol/l Colorazione di contrasto; acquosa, ad esempio Mayer s Hematoxylin o Lillie s Modified Mayer s Hematoxylin (codice S3002 per uso automatizzato; codice S3001 per uso manuale) (vedere Preparazione del reagente) Per il montaggio acquoso si consiglia: Faramount, Aqueous Mounting Medium, Ready-to-Use (codice S3025); per il montaggio permanente non acquoso si consiglia: Ultramount (codice S1964) oppure Permanent Mounting Medium (codice S3026) Vetrini coprioggetto Microscopio ottico (20x 800x) Panni assorbenti Vaschette o bagni per la colorazione Contaminuti (per intervalli di 3-40 minuti) Spruzzette Soluzione tampone di lavaggio, ad esempio Automation Buffer (codice S3006), TBS (code S3001) o PBS (code S3024) 1. Per uso professionale. 2. Questo prodotto contiene sodio azide (NaN 3), una sostanza chimica fortemente tossica in forma pura. Sebbene non sia classificato come prodotto a rischio, il contenuto di NaN 3 alle concentrazioni indicate può reagire con il rame e il piombo delle tubature formando azidi metalliche fortemente esplosive. Durante lo smaltimento, sciacquare le tubature con abbondante acqua per prevenire l eventuale accumulo di azide metallica. 3. Non sostituire con reagenti appartenenti ad altri numeri di lotto o a kit di altri produttori. 4. Gli enzimi e i substrati cromogeni possono subire alterazioni se esposti a livelli di luce eccessivi. Evitare di conservare i componenti del kit e di eseguire la colorazione in condizioni di luce intensa, ad esempio sotto la luce diretta del sole. 5. Tempi o temperature di incubazione diversi da quelli indicati potrebbero produrre risultati erronei. Le eventuali modifiche dovranno essere convalidate dall utente Adottare le normali procedure previste per il trattamento dei prodotti di origine biologica. 7. Indossare indumenti di protezione personale adeguati, così da evitare il contatto con gli occhi e la pelle. 8. Smaltire la soluzione inutilizzata nel rispetto delle disposizioni locali, regionali e nazionali in materia. 9. Su richiesta è disponibile una scheda di sicurezza per utenti professionisti. Pericolo Dual Endogenous Enzyme Block: <0.1% 3(2H)-Isothiazolone, 5-chloro-2-methyl-, mixt. with 2-methyl- 3(2H)-isothiazolone H314 Provoca gravi ustioni cutanee e gravi lesioni oculari. H317 Può provocare una reazione allergica cutanea. P280 Indossare guanti protettivi. Fare uso di un dispositivo di protezione degli occhi o del viso. Indossare indumenti protettivi. P261 Evitare di respirare il vapore. P264 Lavare accuratamente le mani dopo l'uso. P272 P304 + P340 + P310 P301 + P310 + P330 + P331 P303 + P361 + P353 + P363 + P310 P302 + P352 P333 + P313 P305 + P351 + P338 + P310 P405 P501 Gli indumenti da lavoro contaminati non devono essere portati fuori dal luogo di lavoro. IN CASO DI INALAZIONE: Trasportare l'infortunato all aria aperta e mantenerlo a riposo in posizione che favorisca la respirazione. Contattare immediatamente un CENTRO ANTIVELENI o un medico. IN CASO DI INGESTIONE: Contattare immediatamente un CENTRO ANTIVELENI o un medico. Sciacquare la bocca. NON provocare il vomito. IN CASO DI CONTATTO CON LA PELLE (o con i capelli): Togliere immediatamente tutti gli indumenti contaminati. Sciacquare la pelle/fare una doccia. Lavare gli indumenti contaminati prima di indossarli nuovamente. Contattare immediatamente un CENTRO ANTIVELENI o un medico. IN CASO DI CONTATTO CON LA PELLE: lavare abbondantemente con acqua/ In caso di irritazione o eruzione della pelle: consultare un medico. IN CASO DI CONTATTO CON GLI OCCHI: Sciacquare accuratamente per parecchi minuti. Togliere le eventuali lenti a contatto se è agevole farlo. Continuare a sciacquare. Contattare immediatamente un CENTRO ANTIVELENI o un medico. Conservare sotto chiave. Smaltire il prodotto e il recipiente in conformità a tutte le normative locali, regionali, nazionali e internazionali. ( ) P04048IT_01/K4065/ p. 2/7

3 Pericolo DAB+ Chromogen: 1 5% biphenyl-3,3',4,4'-tetrayltetraammonium tetrachloride H350 Può provocare il cancro. H341 Sospettato di provocare alterazioni genetiche. P201 Procurarsi istruzioni specifiche prima dell uso. P202 Non manipolare prima di avere letto e compreso tutte le avvertenze. P280 Indossare guanti protettivi. Fare uso di un dispositivo di protezione degli occhi o del viso. Indossare indumenti protettivi. P308 + P313 IN CASO di esposizione o di possibile esposizione: Richiedere assistenza medica. P405 Conservare sotto chiave. P501 Smaltire il prodotto e il recipiente in conformità a tutte le normative locali, regionali, nazionali e internazionali. Come regola generale, le persone di età inferiore a 18 anni non sono autorizzate all'utilizzo di questo prodotto. Gli utenti devono essere accuratamente informati sulle procedure operative, sulle proprietà pericolose del prodotto e sulle istruzioni di sicurezza necessarie. Conservazione I reagenti del EnVision+ Dual Link System-HRP devono essere conservati a 2 8 C. Non congelare. Non utilizzare dopo la data di scadenza stampata sulle fiale dei reagenti e sulla confezione del kit. In caso di conservazione dei reagenti in condizioni diverse da quelle specificate, è necessaria la convalida da parte dell'utente. 1 Se l'aspetto di un reagente dovesse alterarsi, ad esempio con la comparsa di un precipitato, le possibili cause vanno ricercate nell'instabilità o nel deterioramento del prodotto. In tale eventualità, evitare di utilizzare il reagente o i reagenti in questione. Non sono stati osservati segni evidenti che suggeriscano l'instabilità di questi prodotti. Pertanto è opportuno analizzare un controllo positivo e un controllo negativo contemporaneamente ai campioni dei pazienti. Qualora si ottenga una colorazione imprevista, che non sia giustificata da un cambiamento delle procedure di laboratorio ma sia dovuta ad un probabile problema del kit per analisi, contattare l'assistenza Tecnica Dako. Preparazione dei campioni Preparazione dei reagenti Prima che la colorazione IHC abbia luogo, i tessuti devono essere fissati e trattati. La fissazione impedisce l'autolisi e la putrefazione dei tessuti asportati, preserva l'antigenicità, migliora l'indice di rifrazione dei costituenti del tessuto e aumenta la resistenza degli elementi cellulari al trattamento del tessuto. Il tessuto viene sottoposto a disidratazione, diafanizzazione degli agenti disidratanti, infiltrazione di mezzi inclusivi, inclusione e infine sezionamento. Queste informazioni sono fornite esclusivamente come linee guida. Le procedure ottimali dovranno essere definite e verificate dall utente. Per informazioni specifiche sulla preparazione del reagente di controllo negativo, fare riferimento a Istruzioni generali per la colorazione immunoistochimica di Dako. Soluzione tampone di lavaggio Indagini hanno dimostrato che l'uso della soluzione Tris-HCl 0,05 mol/l a ph 7,6, contenente NaCl 0,15 mol/l e Tween 20 allo 0,05%, senza sodio azide, assicura una riduzione significativa della colorazione del fondo. Il tampone di lavaggio consigliato è Automation Buffer (codice S3006). I tamponi di lavaggio a base di sodio azide rendono inattiva la perossidasi di rafano, producendo una colorazione negativa. Conservare il tampone inutilizzato a 2 8 C. Eliminare la soluzione tampo ne se appare torbida. COLORAZIONE MANUALE Le sezioni di tessuto devono essere lavate in tre bagni freschi con Automation Buffer (codice S3006), TBS (codice S3001) o PBS (codice S3024) per 3-5 minuti tra ogni fase del protocllo di colorazione EnVision+ Dual Link System. Anticorpo primario Gli anticorpi per EnVision+ Dual Link System pronti all'uso sono disponibili presso Dako. Gli anticorpi concentrati sono disponibili anche presso Dako; tuttavia, i rapporti di diluizione ottimali devono essere determinati in modo sperimentale dall'utente. A causa dell'elevata sensibilità di EnVision+ Dual Link System, le diluizioni degli anticorpi primari possono essere da 5 a 20 volte maggiori di quelle utilizzate con i metodi IHC tradizionali. Nel caso si debbano utilizzare anticorpi concentrati, le diluizioni devono essere preparate con Antibody Diluent (codice S0809). Per la maggior parte degli anticorpi primari impiegati con questo kit è sufficiente un tempo di incubazione di 30 minuti. ( ) P04048IT_01/K4065/ p. 3/7

4 Reagente di controllo negativo Un reagente di controllo negativo ideale dovrebbe contenere un anticorpo che non manifesti una reattività specifica con i tessuti umani o il siero normale/non immune nella stessa matrice/soluzione dell'anticorpo primario diluito. Il reagente di controllo negativo dovrebbe appartenere alla stessa sottoclasse e specie animale a cui appartiene l'anticorpo primario e dovrebbe essere diluito alla stessa concentrazione di immunoglobuline o proteine che è propria dell'anticorpo primario, naturalmente con lo stesso diluente. Il periodo di incubazione del reagente di controllo negativo deve corrispondere a quello dell'anticorpo primario. Per ragioni di comodità, Dako mette a disposizione i seguenti prodotti pronti all'uso: reagente di controllo negativo universale per anticorpi primari di topo e reagente di controllo negativo universale per anticorpi primari di coniglio. Per informazioni specifiche sulla preparazione del reagente di controllo negativo, fare riferimento a Istruzioni generali per la colorazione immunoistochimica di Dako. Soluzione cromogeno-substrato Il seguente protocollo per la preparazione di 1 ml di soluzione substrato-cromogeno DAB+ è sufficiente per 10 sezioni di tessuto o per 5 strisci cellulari. FASE 1 FASE 2 A seconda del numero di vetrini da colorare, trasferire un numero sufficiente di aliquote da 1 ml di tampone substrato in un contenitore di dimensioni adeguate. Per ciascuna aliquota di 1 ml di tampone, aggiungere una gocca (20 µl) di cromogeno liquido DAB+. Miscelare subito. Il substrato-cromogeno DAB+ così preparato è stabile per 5 giorni circa, se conservato a 2 8 C. Misce lare accuratamente questa soluzione prima dell'uso. L'eventuale presenza di precipitato nella soluzione non altera la qualità della colorazione. In totale, i 18 ml di tampone substrato forniscono un volume sufficiente per 150 test. Può rimanere un eccesso di volume. Mezzi di montaggio Faramount, Aqueous Mounting Medium, Ready-to-use (codice S3025) è consigliato per il montaggio acquoso. Per il montaggio permanente, è possibile utilizzare i prodotti Ultramount (codice S1964) o Permanent Mounting Medium (codice S3026). Procedura di colorazione Note sulla procedura Prima dell'uso, l'utente deve leggere attentamente le istruzioni fornite di seguito e studiare il contenuto del kit. Vedere la sezione Precauzioni. La Dual Endogenous Enzyme Blocking Solution e il polimero EnVision+ Dual Link System devono essere equilibrati a temperatura ambiente prima dell'immunocolorazione. Analogamente, tutte le fasi di incubazione sono ottimizzate per l'esecuzione a temperatura ambiente. Le istruzioni e i reagenti forniti in questo kit sono stati studiati per assicurare prestazioni ottimali. L'ulteriore diluizione dei reagenti o una variazione dei tempi o delle temperature di incubazione potrebbero generare risultati erronei. Evitare che le sezioni di tessuto si secchino durante la procedura di colorazione, altrimenti si potrebbe assistere ad un aumento del fenomeno di colorazione aspecifica. Coprire i vetrini per proteggerli dalle correnti d'aria. Se le incubazioni devono protrarsi nel tempo, collocare i tessuti in un ambiente umido. La sensibilità di EnVision+ Dual Link System-HRP può esere ulteriormente aumentata allungando i tempi di incubazione delle fasi 2 e 3 di 5-10 minuti. PROTOCOLLO DI COLORAZIONE MANUALE FASE 1 BLOCCO DEGLI ENZIMI ENDOGENI Picchiettare per eliminare il tampone in eccesso. Utilizzando carta bibula (ad esempio Kimwipe o carta di tessuto assorbente), asciugare accuratamente il vetrino attorno al campione per rimuovere il liquido in eccesso e mantenere i reagenti all interno dell area prescritta. Applicare una quantità di Dual Endogenous Enzyme Block sufficiente a coprire il campione. Incubare per 5 10 (±1) minuti. Sciacquare delicatamente con acqua distillata o soluzione tampone da una spruzzetta (fare attenzione a non indirizzare il flusso direttamente sul tessuto) e collocare in un bagno tampone fresco. FASE 2 ANTICORPO PRIMARIO O REAGENTE DI CONTROLLO NEGATIVO Picchiettare per eliminare il tampone in eccesso e asciugare i vetrini come descritto precedentemente. Applicare una quantità di anticorpo primario diluito in modo ottimale oppure di reagente di controllo negativo sufficiente per ricoprire il campione. Incubare per 30 (±1) minuti. Sciacquare delicatamente con soluzione tampone da una spruzzetta (fare attenzione a non indirizzare il flusso direttamente sul tessuto) e collocare in un bagno tampone fresco. Se la procedura di colorazione deve essere interrotta, i vetrini devono essere conservati in un bagno tampone in seguito all'incubazione dell'anticorpo primario (fase 2) per almeno un'ora a temperatura ambiente al fine di non alterare le prestazioni della colorazione. FASE 3 POLIMERO MARCATO con HRP Picchiettare per eliminare il tampone in eccesso e asciugare i vetrini come descritto precedentemente. Applicare una quantità di polimero marcato sufficiente a coprire il campione. Incubare per 30 (±1) minuti. ( ) P04048IT_01/K4065/ p. 4/7

5 Sciacquare i vetrini come nella fase 2 e collocare in un bagno tampone per 5 (±1) minuti. FASE 4 SUBSTRATO-CROMOGENO Asciugare i vetrini come descritto precedentemente. Applicare una quantità di soluzione substrato cromogeno sufficiente per ricoprire il campione (vedere Preparazione del reagente). Incubare per 5 10 (±1) minuti. Sciacquare delicatamente con acqua distillata da una spruzzetta (fare attenzione a non dirigere il flusso direttamente sul tessuto). Raccogliere il substrato cromogeno di scarto in un contenitore per materiali pericolosi e smaltire in modo appropriato. FASE 5 COLORAZIONE DI CONTRASTO CON EMATOSSILINA (facoltativa) Immergere i vetrini in un bagno di ematossilina acquosa. La durata dell'incubazione varia a seconda della potenza dell'ematossilina usata. Sciacquare delicatamente in un bagno di acqua distillata. Immergere i vetrini 10 volte in un bagno di ammoniaca 0,037 mol/l o in un agente con analoghe proprietà di colorazione blu. Sciacquare i vetrini in un bagno di acqua distillata o deionizzata per 2-5 minuti. Procedere al montaggio. Montaggio È possibile applicare la colorazione di contrasto al campione e montare un vetrino coprioggetto utilizzando prodotti di montaggio come Faramount, Aqueous Mounting Medium, Ready-to-use (code S3025). Per il montaggio permanente, è possibile utilizzare i prodotti Ultramount (codice S1964) o Permanent Mounting Medium (codice S3026). Nota È possibile leggere i vetrini in qualunque momento. tuttavia se i vetrini sono esposti alla luce intensa per una settimana, si potrebbe assistere ad un certo grado di scolorimento. Per evitare che ciò accada, conservare i vetrini al buio a temperatura ambiente (20 25 C). Controllo della qualità Le differenze che esistono tra i laboratori (per quanto riguarda il modo di trattare il tessuto o di eseguire le procedure tecniche) possono determinare una certa variabilità dei risultati, per cui si rendono necessari controlli interni periodici. Per ulteriori informazioni, consultare le linee guida sul controllo della qualità stabilite nel "College of American Pathologists (CAP) Certification Program for Immunohistochemistry" e i riferimenti bibliografici (voci dalla 3 alla 5). Per informazioni dettagliate sulla sensibilità e l'immunoreattività, fare riferimento ai foglietti illustrativi dei singoli anticorpi primari. Per ulteriori informazioni sui controlli positivi e negativi, fare riferimento alle Istruzioni generali per la colorazione immunoistochimica di Dako. Interpretazione della colorazione Limiti generali Limiti specifici del prodotto Per conoscere le linee guida sull'interpretazione dei risultati, fare riferimento a Istruzioni generali per la colorazione immunoistochimica di Dako. Per conoscere i limiti generali della procedura, fare riferimento a Istruzioni generali per la colorazione immunoistochimica di Dako. L'uso di fissativi scaduti o non tamponati e l'esposizione dei tessuti ad un calore eccessivo (superiore a 60 C) durante il trattamento potrebbero provocare una ridotta sensibilità alla colorazione. L'attività endogena di perossidasi o pseudoperossidasi è osservabile nelle emoproteine quali l'emoglobina, la mioglobina, il citocromo e la catalasi, oltre che negli eosinofili. 2,3 Questa attività può essere inibita incubando i campioni con Dual Endogenous Enzyme Block di EnVision+ Dual Link System-HRP per cinque-dieci minuti prima dell'applicazione dell'anticorpo primario. Anche gli strisci di midollo osseo e sangue e i tessuti congelati possono essere trattati con questo reagente. In alternativa è possibile utilizzare una soluzione di metanolo e perossido di idrogeno. Alcuni antigeni possono denaturarsi per effetto di questo trattamento. I tessuti delle persone infette dal virus dell epatite B e contenenti l antigene di superficie dell epatite B (HBsAg) possono essere interessati da una colorazione aspecifica con la perossidasi di rafano. 4 Il siero normale/non immune proveniente dalla stessa fonte animale dell'antisiero secondario impiegato nelle fasi di bloccaggio potrebbe generare risultati falsi-negativi o falsi-positivi per effetto degli auto-anticorpi o degli anticorpi naturali. I reagenti forniti nel kit sono stati diluiti in proporzioni ottimali. Un'ulteriore diluizione potrebbe ridurre la capacità di rivelazione dell'antigene. ( ) P04048IT_01/K4065/ p. 5/7

6 Risoluzione dei problemi MANUALE Problema Probabile causa Intervento consigliato 1. Nessuna 1a. I reagenti non sono stati 1a. Rivedere l applicazione dei reagenti. colorazione dei vetrini. utilizzati nell ordine corretto. 1b. È presente sodio azide nel 1b. Utilizzare un tampone fresco, privo di azide. 2. Colorazione debole di tutti i vetrini. 3. Eccessivo fondo in tutti i vetrini. bagno tampone. 2a. Le sezioni trattengono troppa soluzione dopo il bagno di lavaggio. 2b. Tempi di incubazione con anticorpi o substrato troppo brevi. 3a. Campioni con un'elevata attività di perossidasi. 3b. La paraffina è stata rimossa parzialmente. 3c. I vetrini sono stati risciacquati male. 3d. Reazione substrato più veloce del normale, causata da una temperatura ambiente eccessiva. 3e. Le sezioni si sono asciugate durante la procedura di colorazione. 3f. Legami aspecifici dei reagenti con la sezione di tessuto. 3g. Anticorpo troppo concentrato. 2a. Eliminare la soluzione in eccesso picchiettando delicatamente prima di asciugare attorno alla sezione. 2b. Rivedere i tempi di incubazione consigliati. 3a. Impostare tempi di incubazione più lunghi per Dual Endogenous Enzyme Block. 3b. Utilizzare bagni di xilene o toluene freschi. Se si devono colorare più vetrini simultaneamente, il secondo bagno di xilene deve contenere xilene fresco. 3c. Utilizzare soluzioni fresche in bagni tampone e spruzzette.usare Automation Buffer come tampone di lavaggio (vedere Preparazione del reagente). 3d. Abbreviare i tempi di incubazione con la soluzione substrato-cromogeno. 3e. Utilizzare la camera umidificata. Asciugare solo 3 o 4 vetrini per volta prima di applicare il reagente. 3f. Applicare una soluzione bloccante contenente una proteina non rilevante (vedere Interpretazione della colorazione). 3g. Utilizzare una diluizione maggiore per l'anticorpo primario. NOTA Se il problema non è imputabile a nessuna di queste cause o se l'intervento correttivo consigliato non si rivela efficace, contattare l'assistenza Tecnica Dako per ricevere ulteriori suggerimenti. Ulteriori informazioni sulle tecniche di colorazione e sulla preparazione dei campioni sono contenute in Handbook -Immunochemical Staining Methods 5 (disponibile presso Dako), Atlas of Immunohistology 6 e Immunoperoxidase Techniques, A Practical Approach to Tumor Diagnosis. 7 Bibliografia Altre fonti bibliografiche 1. National Committee for Clinical Laboratory Standards. Internal quality control testing: principles and definitions; approved guideline. Villanova, PA 1991; Order Code C24-A:4 2. Escribano LM, et al. Endogenous peroxidase activity in human cutaneous and adenoidal mast cells. J Histochem Cytochem 1987; 35: Elias JM. Immunohistopathology: A practical approach to diagnosis. Chicago: Amer Soc of Clin Pathol Press 1990; Omata M, et al. Nonimmunologic binding of horseradish peroxidase to hepatitis B surface antigen: A possible source of error in immunohistochemistry. Amer J Pathol 1980; 73: Boenisch T, Farmilo AJ, Stead RH. Handbook-immunochemical staining methods. Carpinteria 3rd Edition. Dako Tubbs RR, et al. Atlas of Immunohistology. Chicago: Amer Soc Clin Pathol Press Nadji M and Morales AR. Immunoperoxidase techniques, a practical approach to tumor diagnosis. Chicago: Amer Soc Clin Pathol Press 1986 Cartun RW. Immunohistochemistry of infectious diseases. J Histotechnol 1995; 18(3):195 Heras A, et al. Enhanced labelled-polymer system for immunohistochemistry. XVth Eur Cong Pathol. Copenhagen, Denmark 1995; Sept 3-8 Bisgaard K and Pluzek K-P. Use of polymer conjugates in immunohistochemistry: A comparative study of a traditional staining method to a staining method utilizing polymer conjugates. Abstract. XXI Intl Cong Intl Acad Pathol and 12th World Cong Acad Environ Pathol. Budapest, Hungary 1996; Oct Pileri SA, et al. EnVision Plus: A new powerful tool for diagnosis and research. Symposium. XXI Intl Cong Intl Acad Pathol and 12th World Cong Acad Environ Pathol. Budapest, Hungary 1996; Oct Bisgaard K. EnVision Plus-Introduction to a new technology. Abstract. Dako Symposium. XXI Intl Cong Intl Acad Pathol. Budapest, Hungary 1996; Oct ( ) P04048IT_01/K4065/ p. 6/7

7 Edition 07/15 ( ) P04048IT_01/K4065/ p. 7/7