DCM018i-0 Ed. 07/2012 Helicobacter pylori IgM per analisi di routine Saggio immunoenzimatico per la determinazione degli anticorpi di classe IgM anti Helicobacter pylori nel siero umano LOT IVD Vedere etichetta esterna Σ = 96 test REF DKI018 DESTINAZIONE D USO Il kit Diametra Helicobacter pylori IgM fornisce materiale per la determinazione degli anticorpi di classe IgM diretti control l'helicobacter pylori nel siero umano, al fine di determinare lo stato sierologico dell'infezione da Helicobacter pylori in pazienti con sintomi gastrointestinali. Il kit Diametra Helicobacter pylori IgM è destinato al solo uso di laboratorio. 1. SIGNIFICATO CLINICO L'Helicobacter pylori è un batterio a spirale coltivato da mucosa gastrica umana scoperto da BJ Marshall nel 1982. Gli studi hanno indicato che la presenza di H. pylori è associata ad una varietà di malattie gastrointestinali quali gastrite, ulcere duodenali e gastriche, dispepsia non ulcerosa, adenocarcinoma gastrico e linfoma. Il microrganismo è presente nel 95-98% dei pazienti con ulcere duodenali e 60-90% dei pazienti con ulcere gastriche. Gli studi hanno inoltre dimostrato che la rimozione del microrganismo mediante terapia antimicrobica è correlata con la risoluzione dei sintomi e la cura della malattia. I pazienti che presentano sintomi clinici relativi al tratto gastrointestinale possono essere diagnosticati per l'infezione da H. pylori tramite due metodi: 1. Tecniche invasive - includono una biopsia seguita da cultura batterica, l'esame istologico della biopsia campione o il rilevamento diretto di ureasi. 2. Tecniche non invasive - includono test dell'urea e metodi sierologici. Tutti i test eseguiti su campioni derivati da biopsia sono soggetti ad errori relativi al campionamento e all'interferenza di altri batteri contaminanti. Il test ELISA per la presenza di anticorpi IgM specifici per H. pylori è una tecnica molto utilizzata per test sierologici per la sua precisione e semplicità. 2. PRINCIPIO DEL TEST Il kit ELISA Diametra Helicobacter pylori IgM è un test immunoenzimatico in fase solida (ELISA). La micropiastra (fase solida) è coattata con antigeni purificati di Helicobacter pylori. I campioni sierici diluiti dei pazienti vengono pipettati nei pozzetti della micropiastra, e gli anticorpi IgM specifici per H. Pylori, se presenti, si legano all'antigene. Dopo l'incubazione i componenti non legati sono lavati via. Successivamente viene aggiunto l'enzima coniugato, che si lega ai complessi anticorpo-antigene. Dopo un secondo step di lavaggio per rimuovere il coniugato non legato, i complessi immunologici formati sono evidenziati mediante incubazione con Substrato TMB. L'intensità del colore è direttamente proporzionale alla quantità di anticorpo IgM anti Helicobacter pylori nel campione del paziente. L'assorbanza a 450 nm viene determinata con un spettrofotometro ELISA per micropiastre. 3. REAGENTI, MATERIALI E STRUMENTAZIONE 3.1 Reagenti e materiali forniti nel kit 1. Calibratori (100 µl/vial) CAL cut-off (H.pylori IgM Index = 1) REF DCE002/01807i-0 2. Controlli (100 µl/vial) Controllo Negativo (siero negativo a H. pylori IgM) REF DCE045/01801i-0 Controllo Positivo (siero positivo a H. pylori IgM) REF DCE045/01802i-0 3. Conjugate (1 flacone, 13 ml) Anticorpi anti IgM umane coniugati a perossidasi di rafano REF DCE002/01802i-0 4. Coated Microplate (1 microplate breakable) Micropiastra coattata con antigeni H. pylori purificati REF DCE002/01803i-0 5. TMB Substrate (1 flacone, 11 ml) H 2 O 2 -TMB (evitare il contatto con la pelle) REF DCE004/01804i-0 6. Stop Solution (1 flacone, 11 ml) Acido cloridrico 1N (evitare il contatto con la pelle) REF DCE005/01805i-0 7. 20X Conc. Wash Solution (1 flacone, 50 ml) Tampone fosfato - Tween 20 REF DCE007/01807i-0 8. Sample diluent (1 flacone, 22 ml) Tampone fosfato REF DCE053/01853i-0 3.2 Reattivi necessari non forniti nel kit Acqua distillata. 3.3 Materiale e strumentazione ausiliare Dispensatori automatici. Lettore per micropiastre (450 nm)
Note Conservare i reattivi a 2 8 C, al riparo dalla luce. Aprire la busta del reattivo 4 (Coated Microplate) solo dopo averla riportata a temperatura ambiente e chiuderla subito dopo il prelievo delle strip da utilizzare. Il kit aperto mantiene l'attività per 2 mesi se conservato come descritto sopra. 4. AVVERTENZE Questo test kit è per uso in vitro, da eseguire da parte di personale esperto. Non per uso interno o esterno su esseri Umani o Animali. Usare i previsti dispositivi di protezione individuale mentre si lavora con i reagenti forniti. Seguire le Buone Pratiche di Laboratorio (GLP) per la manipolazione di prodotti derivati da sangue. Tutti i reattivi di origine umana usati nella preparazione dei reagenti sono stati testati e sono risultati negativi per la presenza di anticorpi anti- HIV 1&2, per HbsAg e per anticorpi anti-hcv. Tuttavia nessun test offre la certezza completa dell assenza di HIV, HBV, HCV o di altri agenti infettivi. Pertanto, i reagenti devono essere maneggiati come materiali potenzialmente infettivi. Alcuni reagenti contengono piccole quantità di Proclin 300 R come conservante. Evitare il contatto con la pelle e le mucose. Il TMB Substrato contiene un irritante, che può essere dannoso se inalato, ingerito o assorbito attraverso la cute. Per prevenire lesioni, evitare l inalazione, l ingestione o il contatto con la cute e con gli occhi. La Stop Solution è costituita da una soluzione di acido cloridrico diluito. L acido cloridrico è velenoso e corrosivo e può essere tossico se ingerito. Per prevenire possibili ustioni chimiche, evitare il contatto con la cute e con gli occhi. Evitare l esposizione del reagente TMB/H 2 O 2 a luce solare diretta, metalli o ossidanti. Non congelare la soluzione. 5. PRECAUZIONI Si prega di attenersi rigorosamente alla sequenza dei passaggi indicata in questo protocollo. I risultati presentati qui sono stati ottenuti usando specifici reagenti elencati in queste Istruzioni per l Uso. Tutti i reattivi devono essere conservati a temperatura controllata di 2-8 C nei loro contenitori originali. Eventuali eccezioni sono chiaramente indicate. I reagenti sono stabili fino alla data di scadenza se conservati e trattati seguendo le istruzioni fornite. Prima dell uso lasciare tutti i componenti dei kit e i campioni a temperatura ambiente (22-28 C) e mescolare accuratamente. Non scambiare componenti dei kit di lotti diversi. Devono essere osservate le date di scadenza riportate sulle etichette della scatola e di tutte le fiale. Non utilizzare componenti oltre la data di scadenza. Qualora si utilizzi strumentazione automatica, è responsabilità dell utilizzatore assicurarsi che il kit sia stato opportunamente validato. Un lavaggio incompleto o non accurato dei pozzetti può causare una scarsa precisione e/o un elevato background. Per la riproducibilità dei risultati, è importante che il tempo di reazione di ogni pozzetto sia lo stesso. Per evitare il time shifting durante la dispensazione degli reagenti, il tempo di dispensazione dei pozzetti non dovrebbe estendersi oltre i 10 minuti. Se si protrae oltre, si raccomanda di seguire lo stesso ordine di dispensazione. Se si utilizza più di una piastra, si raccomanda di ripetere la curva di calibrazione in ogni piastra. L addizione del TMB Substrato dà inizio ad una reazione cinetica, la quale termina con l addizione della Stop Solution. L addizione del TMB Substrato e della Stop Solution deve avvenire nella stessa sequenza per evitare tempi di reazione differenti. Osservare le linee guida per l esecuzione del controllo di qualità nei laboratori clinici testando controlli e/o pool di sieri. Osservare la massima precisione nella ricostituzione e dispensazione dei reagenti. Non usare campioni microbiologicamente contaminati, altamente lipemici o emolizzati. I lettori di micropiastre leggono l assorbanza verticalmente. Non toccare il fondo dei pozzetti. 6. PROCEDIMENTO 6.1. Preparazione della soluzione di lavaggio Prima dell uso, diluire il contenuto di ogni fiala di "20X Conc. Wash Solution" con acqua distillata fino al volume di 1000 ml. Per preparare volumi minori rispettare il rapporto di diluizione di 1:20. La soluzione di lavaggio diluita è stabile a 2 8 C per 30 giorni. 6.2. Preparazione del Campione Il siero deve essere preparato da un campione di sangue intero ottenuto con tecniche mediche accettate. Questo kit deve essere utilizzato con campioni di siero privi di additivi. Tutti i campioni di siero, il controllo negativo, controllo positivo e il calibratore devono essere diluiti 1:40 con Sample diluent (per esempio, diluire 5 µl in 195 µl di Sample diluent). Mescolare bene. I campioni possono essere conservati in frigorifero a 2-8 C per un massimo di 7 giorni oppure congelati per un massimo di 6 mesi. Evitare ripetuti congelamenti e scongelamenti dei campioni di siero. 6.3. Procedimento Portare tutti i reagenti a temperatura ambiente (22-28 C). Le strisce di pozzetti non utilizzate devono essere rimesse immediatamente nella busta richiudibile contenente il materiale essicante e conservate a 2-8 C. Per evitare potenziali contaminazioni microbiche e/o chimiche non rimettere i reagenti inutilizzati nei flaconi originali; utilizzare puntali per pipette usa e getta nuovi per ogni Calibratore, Controllo e campione, e dispensare il coniugato con precisione sul fondo dei pozzetti.
Al fine di aumentare l accuratezza dei risultati del test è necessario operare in doppio, allestendo due pozzetti per ogni Calibratore, due per ogni Controllo, due per ogni Campione ed uno per il Bianco. Reagenti Calibratori e Controlli, diluiti Campioni diluiti Sample diluent Calibratori Campioni /Controllo Bianco 100 µl / / / 100 µl / / / 100 µl Agitare delicatamente per 10 secondi. Incubare per 30 minuti a temperatura ambiente (22-28 C). Svuotare il contenuto dei pozzetti. Lavare i pozzetti 4 volte con la Wash Solution diluita (300 µl per pozzetto) e successivamente 1 volta con acqua distillata. Nota importante: La procedura di lavaggio è critica. Un lavaggio insufficiente può portare a risultati errati. Conjugate 100 µl 100 µl 100 µl Agitare delicatamente per 10 secondi. Incubare per 30 minuti a temperatura ambiente (22-28 C). Svuotare il contenuto dei pozzetti. Lavare i pozzetti 4 volte con la Wash Solution diluita (300 µl per pozzetto) e successivamente 1 volta con acqua distillata. TMB Substrate 100 µl 100 µl 100 µl Agitare delicatamente per 10 secondi. Incubare per 20 minuti a temperatura ambiente (22-28 C) al buio. Stop Solution 100 µl 100 µl 100 µl Agitare delicatamente per 30 secondi. Assicurarsi che il colore blu viri totalmente al giallo. Leggere la densità ottica a 450 nm entro 15 minuti. 7. CONTROLLO DI QUALITÀ Il dosaggio può essere considerato valido se sono soddisfatti i seguenti criteri: 1. il valore di OD del bianco deve essere minore di 0.250. 2. il valore di OD del Calibratore Cut-off deve essere maggiore di 0.250. 8. RISULTATI 8.1. Calcolo dei risultati quantitativi 1. Calcolare la media dei duplicati del calibratore (Xc). 2. Calcolare la media dei duplicati del controllo positivo, del controllo negativo e dei campioni 3. Calcolare l'"indice per H.pylori IgM" per ogni determinazione, dividendo il valore medio di ogni campione per il valore medio del Calibratore (Xc). Esempio: Indice H. pylori IgM del Calibratore Cut-off = 1 1. OD Calibratore Cut-off = 0.650, 0.630 x c = 0.640 2. OD Controllo Negativo = 0.210, 0.230 x n = 0.220 Indice H. pylori IgM = x n / x c = 0.220 / 0.640 = 0.340 3. OD Controllo Positivo = 1.105, 1.210 x p = 1.200 Indice H. pylori IgM = x p / x c = 1.200 / 0.640 = 1.80 4. OD campione = 1.501, 1.670 x s = 1.600 Indice H. pylori IgM = x s / x c = 1.600 / 0.640 = 2.50 8.2. Interpretazione dei risultati Negativo Equivoco Positivo Un'Indice H. pylori IgM minore di 0.90 è negativo per gli anticorpi IgM anti H.pylori. Il campione potrebbe essere stato prelevato troppo presto. Un'Indice H. pylori IgM compreso tra 0.91 e 0.99 è equivoco. Ridosare il paziente utilizzando un nuovo prelievo sierico ottenuto dopo 3 settimane. Un'Indice H. pylori IgM maggiore di 1.00 (o uguale) è positivo. 9. LIMITAZIONI DELLA PROCEDURA 1. Risultati affidabili e riproducibili si ottengono quando la procedura del test è effettuata attraverso una completa comprensione delle istruzioni per l'uso e seguendo le buone pratiche di laboratorio. 2. La procedura di lavaggio è critica. Un lavaggio insufficiente comporta una scarsa precisione e letture di assorbanza falsamente elevate. 3. Sieri che mostrano lipemia, emolisi o torbidità non devono essere utilizzati con questo test. 4. I risultati ottenuti con l'uso di questo kit devono essere usati solo in aggiunta ad altre procedure diagnostiche e alle informazioni a disposizione del medico.
10. PARAMETRI CARATTERISTICI 10.1. Specificità Diagnostica La specificità diagnostica é definita come la probabilità del test di fornire un risultato negativo in assenza di anticorpi specifici. La specificità diagnostica è 96%. 10.2. Sensibilità Diagnostica La sensibilità diagnostica è definita come la probabilità di fornire un risultato positivo in presenza di anticorpi specifici. La sensibilità diagnostica è 97%. 11. DISPOSIZIONI PER LO SMALTIMENTO I reagenti devono essere smaltiti in accordo con le leggi locali. BIBLIOGRAFIA 1. Marshall, B.J. and J.R. Warren. Unidentified curved bacilli in the stomach of patients with gastritis and Peptic ulceration. Lancet 1: 1311-1314, 1984. 2. Ruaws, E.A.J. and G.N.J. Tytgat. Cure of duodenal ulcer associated with eradication of Helicobacter pylori, Lancet 335: 1233-35, 1990. 3. Perez-Perez, G.I., S.S. Wilkin, M.D. Decker and M.J. Blaswer. Seroprevalence of Helicobacter pylori infection in couples. J. Clin. Microbiol. 29:642-644, 1991. Ed. 07/2012 DCM018i-0 DiaMetra S.r.l. Headquater: Via Garibaldi, 18 20090 SEGRATE (MI) Italy Tel. 0039-02-2139184 02-26921595 Fax 0039 02 2133354. Manufactory: Via Pozzuolo 14, 06038 SPELLO (PG) Italy Tel. 0039-0742 2485 Fax 0039 0742 316197 E-mail: info@diametra.com
DCM018i-0 Ed. 07/2012 Helicobacter pylori IgM for routine analysis Enzyme immunoassay for the detection of IgM antibodies to Helicobacter pylori in human serum. IVD LOT See external label Σ = 96 tests REF DKI018 INTENDED USE Diametra ELISA Helicobacter pylori IgM kit provides materials for the detection of IgM class antibodies to Helicobacter pylori in human serum, to evaluate the serologic status to Helicobacter pylori infection in patients with gastrointestinal symptoms. Helicobacter pylori IgM kit is intended for in vitro diagnostic use only. 1. CLINICAL SIGNIFICANCE Helicobacter pylori is a spiral bacterium cultured from human gastric mucosa discovered by B.J. Marshall in 1982. Studies have indicated that the presence of H. pylori is associated with a variety of gastrointestinal diseases including gastritis, duodenal and gastric ulcers, non-ulcer dyspepsia, and gastric adenocarcinoma and lymphoma. The organism is present in 95-98% of patients with duodenal ulcers and 60-90% of patients with gastric ulcers. The studies have also demonstrated that removal of the organism by anti-microbial therapy is correlated with the resolution of symptoms and cure of diseases. Patients who present clinical symptoms relating to the gastrointestinal tract can be diagnosed for H. pylori infection by two methods: 1. Invasive techniques include biopsy followed by culture or histologic examination of biopsy specimen or direct detection of urease activity. 2. Non-invasive techniques include urea breath tests and serological methods. All of the testing performed on biopsy samples is subject to errors related to sampling and interference of contaminated bacteria. An ELISA test for the presence of H. pylori specific IgM antibody is the technique of choice for serologic tests because of its accuracy and simplicity. 2. PRINCIPLE OF THE METHOD Purified H. pylori antigen is coated on the surface of microwells. Diluted patients serum is added to the wells, and the H. pylori IgM specific antibody, if present, binds to the antigen. All unbound materials are washed away. Enzyme conjugate is added, which binds to the antibody-antigen complex. Excess enzyme conjugate is washed off and a solution of TMB Reagent is added. The enzyme conjugate catalytic reaction is stopped at a specific time. The intensity of the color generated is proportional to the amount of IgM-specific antibody in the sample. The results are read by a microwell reader compared in a parallel manner with calibrator and controls. 3. REAGENTS, MATERIALS AND INSTRUMENTATION 3.1 Reagents and Materials Supplied in the Kit 1. Calibrator (100 µl/vial) CAL cut-off (H. pylori IgM Index = 1) REF DCE002/01807i-0 2. Controls (100 µl/vial) Negative Control (H. pylori IgM negative serum) REF DCE045/01801i-0 Positive Control (H. pylori IgM positive patient serum) REF DCE045/01802i-0 3. Conjugate (1 vial, 13 ml) Antibody to human IgM conjugated to horseradish peroxidase REF DCE002/01802i-0 4. Coated Microplate (1 breakable microplate) Microplate coated with purified H. pylori antigen REF DCE002/01803i-0 5. TMB Substrate (1 vial, 11 ml) H 2 O 2 -TMB (avoid any skin contact) REF DCE004/01804i-0 6. Stop Solution (1 vial, 11 ml) Hydrochloric acid 1N (avoid any skin contact) REF DCE005/01805i-0 7. 20X Conc. Wash Solution (1 vial, 50 ml) Phosphate buffer - Tween 20 REF DCE007/01807i-0 8. Sample diluent (1 vial, 22 ml) Phosphate buffer REF DCE053/01853i-0 3.2 Reagents necessary not supplied Distilled water. 3.3 Auxiliary materials and instrumentation Automatic dispenser. Microplates reader (450 nm) Note Store all reagents at 2 8 C in the dark. Open the bag of reagent 4 (Coated Microplate) only when it is at room temperature and close it immediately after use. Opened kit retains activity
until the expiry date shown, provided it is stored as described above. 4. WARNINGS This kit is intended for in vitro use by professional persons only. Not for internal or external use in Humans or Animals. Use appropriate personal protective equipment while working with the reagents provided. Follow Good Laboratory Practice (GLP) for handling blood products. All human source material used in the preparation of the reagents has been tested and found negative for antibody to HIV 1&2, HbsAg, and HCV. No test method however can offer complete assurance that HIV, HBV, HCV or other infectious agents are absent. Therefore, the reagents should be handled in the same manner as potentially infectious material. Some reagents contain small amounts of Proclin 300 R as preservative. Avoid the contact with skin or mucosa. The TMB Substrate contains an irritant, which may be harmful if inhaled, ingested or absorbed through the skin. To prevent injury, avoid inhalation, ingestion or contact with skin and eyes. The Stop Solution consists of a diluted hydrochloric acid solution. Hydrochloric acid is poisonous and corrosive and can be toxic if ingested. To prevent chemical burns, avoid contact with skin and eyes. Avoid the exposure of reagent TMB/H 2 O 2 to directed sunlight, metals or oxidants. Do not freeze the solution. 5. PRECAUTIONS Please adhere strictly to the sequence of pipetting steps provided in this protocol. The performance data represented here were obtained using specific reagents listed in this Instruction For Use. All reagents should be stored refrigerated at 2-8 C in their original container. Any exceptions are clearly indicated. The reagents are stable until the expiry date when stored and handled as indicated. Allow all kit components and specimens to reach room temperature (22-28 C) and mix well prior to use. Do not interchange kit components from different lots. The expiry date printed on box and vials labels must be observed. Do not use any kit component beyond their expiry date. If you use automated equipment, the user has the responsibility to make sure that the kit has been appropriately tested. The incomplete or inaccurate liquid removal from the wells could influence the assay precision and/or increase the background. It is important that the time of reaction in each well is held constant for reproducible results. Pipetting of samples should not extend beyond ten minutes to avoid assay drift. If more than 10 minutes are needed, follow the same order of dispensation. If more than one plate is used, it is recommended to repeat the dose response curve in each plate Addition of the TMB Substrate solution initiates a kinetic reaction, which is terminated by the addition of the Stop Solution. Therefore, the TMB Substrate and the Stop Solution should be added in the same sequence to eliminate any time deviation during the reaction. Observe the guidelines for performing quality control in medical laboratories by assaying controls and/or pooled sera. Maximum precision is required for reconstitution and dispensation of reagents. Samples microbiologically contaminated, highly lipemic or haemolysed should not be used in the assay. Plate readers measure vertically. Do not touch the bottom of the wells. 6. PROCEDURE 6.1. Preparation of the Wash Solution Dilute the content of each vial of the "20X Conc. Wash Solution" 1:20 with distilled water; for example dilute 50 ml of "20X Conc. Wash Solution" in 950 ml of distilled water. For smaller volumes respect the 1:20 dilution ratio. The diluted wash solution is stable for 1 month at 2 8 C. 6.2. Preparation of the sample Serum should be prepared from a whole blood specimen obtained by acceptable medical techniques. This kit is for use with serum samples without additives only. All serum samples, Negative Control, Positive Control and the Calibrator must be diluted 1:40 with the Sample Diluent (for example, dilute 5 µl in 195 µl of sample diluent). Mix well. Specimens may be refrigerated at 2-8 C for up to 7 days or frozen for up to 6 months. Avoid repetitive freezing and thawing of serum sample. 6.3. Procedure Allow all reagents to reach room temperature (22-28 C). Unused coated microwell strips should be released securely in the foil pouch containing desiccant and stored at 2-8 C. To avoid potential microbial and/or chemical contamination, unused reagents should never be transferred into the original vials; use new disposal plastic pipette tips for each Calibrator, Control and sample, and dispense conjugate without splashing accurately to the bottom of wells. As it is necessary to perform the determination in duplicate in order to improve accuracy of the test results, prepare two wells for the Calibrator, two for each Control, two for each sample, one for Blank.
Reagent Diluted Calibrator and Controls Diluted Sample Sample Diluent Calibrator Sample/ Control Blank 100 µl / / / 100 µl / / / 100 µl Tap the holder to remove air bubbles from the liquid and mix well for 10 seconds. Incubate for 30 minutes at room temperature (22-28 C). Briskly shake out the contents of the wells. Rinse the wells 4 times with the diluted Wash Solution (300 µl per well), and then 1 time with distilled water (please do not use tap water). Important note: The wash procedure is critical. Insufficient washing will result in improper color development. Conjugate 100 µl 100 µl 100 µl Mix gently for 10 seconds. Incubate for 30 minutes at room temperature (22-28 C). Briskly shake out the contents of the wells. Rinse the wells 4 times with the diluted Wash Solution (300 µl per well), and then 1 time with distilled water (please do not use tap water). TMB Substrate 100 µl 100 µl 100 µl Mix gently for 10 seconds. Incubate for 20 minutes at room temperature (22-28 C) in the dark. Stop Solution 100 µl 100 µl 100 µl Mix gently for 30 seconds. It is important to make sure that all the blue color changes to yellow color completely. Read the optical density at 450 nm within 15 minutes with a microtiter plate reader. 7. QUALITY CONTROL The test run may be considered valid provided the following criteria are met: 1. The O.D. value of the reagent blank against air from a microwell reader should be less than 0.250. 2. If the O.D. value of the Cut-off Calibrator is lower than 0.250, the test is not valid and must be repeated. 8. RESULTS 8.1. Calculation of results 1. Calculate the mean of duplicate calibrator value (x c ). 2. Calculate the mean of duplicate positive control, negative control and patient samples. 3. Calculate the H. pylori IgM EIA Index of each determination by dividing the mean values of each sample by calibrator mean value (x c ). Example of typical results Cut-off Calibrator H. pylori IgM EIA Index = 1 5. Cut-off Calibrator O.D. = 0.650, 0.630 x c = 0.640 6. Negative Control O.D. = 0.210, 0.230 x n = 0.220 H. pylori IgM EIA Index = x n / x c = 0.220 / 0.640 = 0.340 7. Positive Control O.D. = 1.105, 1.210 x p = 1.200 H. pylori IgM EIA Index = x p / x c = 1.200 / 0.640 = 1.80 8. Patient sample O.D. = 1.501, 1.670 x s = 1.600 H. pylori IgM EIA Index = x s / x c = 1.600 / 0.640 = 2.50 8.2. Interpretation of results Negative Equivocal Positive H. pylori IgM EIA Index less than 0.90 is seronegative for IgM antibody to H. pylori. The serum sample may have been taken too early. H. pylori IgM EIA Index between 0.91-0.99 is equivocal. Retest in a parallel fashion with a new serum sample drawn 3 weeks later. H. pylori IgM EIA Index of 1.00 or greater is seropositive. 9. LIMITATIONS OF USE 1. Reliable and reproducible results will be obtained when the assay procedure is carried out with a complete understanding of the package insert instructions and with adherence to good laboratory practice. 2. The wash procedure is critical. Insufficient washing will result in poor precision and falsely elevated absorbance readings. 3. Serum samples demonstrating gross lipemia, gross hemolysis, or turbidity should not be used with this test. 4. The results obtained from the use of this kit should be used only as an adjunct to other diagnostic procedures and information available to the physician.
10. PERFORMANCE AND CHARACTERISTICS 10.1. Diagnostic Specificity The diagnostic specificity is defined as the probability of the assay of scoring negative in the absence of the specific analyte. It is 96%. 10.2. Diagnostic Sensitivity The diagnostic sensitivity is defined as the probability of the assay of scoring positive in the presence of the specific analyte. It is 97%. 11. WASTE MANAGEMENT Reagents must be disposed off in accordance with local regulations. BIBLIOGRAPHY 1. Marshall, B.J. and J.R. Warren. Unidentified curved bacilli in the stomach of patients with gastritis and Peptic ulceration. Lancet 1: 1311-1314, 1984. 2. Ruaws, E.A.J. and G.N.J. Tytgat. Cure of duodenal ulcer associated with eradication of Helicobacter pylori, Lancet 335: 1233-35, 1990. 3. Perez-Perez, G.I., S.S. Wilkin, M.D. Decker and M.J. Blaswer. Seroprevalence of Helicobacter pylori infection in couples. J. Clin. Microbiol. 29:642-644, 1991. Ed. 07/2012 DCM018i-0 DiaMetra S.r.l. Headquater: Via Garibaldi, 18 20090 SEGRATE (MI) Italy Tel. 0039-02-2139184 02-26921595 Fax 0039 02 2133354. Manufactory: Via Pozzuolo 14, 06038 SPELLO (PG) Italy Tel. 0039-0742 24851 Fax 0039 0742 316197 E-mail: info@diametra.com