ZytoLight SPEC 13/CEN 18/SPEC 21 Triple Color Probe Z-2095-200 Z-2095-50 20 (0.2 ml) 20 (0.05 ml) For the detection of human chromosome 13 specific sequences, alpha-satellites of chromosome 18, and chromosome 21 specific sequences by fluorescence in situ hybridization (FISH).... In vitro diagnostic medical device according to EU directive 98/79/EC
Fluorescence-labeled labeled polynucleotide probe for the detection of human chromosome ome 13 and 21 specific sequences, and alpha-satellites of chromosome 18 centromeres, ready to use Product Description Content: Product: ZytoLight SPEC 13/CEN 18/SPEC 21 Triple Color Probe EmiNQPF in hybridization buffer. The probe contains green-labeled polynucleotides (ZyGreen: excitation at 503 nm and emission at 528 nm, similar to FITC), which target chromosome 13 specific sequences, blue-labeled polynucleotides (ZyBlue: excitation at 426 nm and emission at 480 nm, similar to DEAC) which target alphasatellite-sequences of the centromere of chromosome 18, and orange-labeled polynucleotides (ZyOrange: excitation at 547 nm and emission at 572 nm, similar to rhodamine), which target chromosome 21 specific sequences. Z-2095-200: 0.2 ml (20 reactions of 10 µl each) Z-2095-50: 0.05 ml (5 reactions of 10 µl each) Specifici city: The ZytoLight SPEC 13/CEN 18/SPEC 21 Triple Color Probe EmiNQPF is designed to be used for the detection of human chromosome 13q12 specific sequences as well as chromosome 18 alpha-satellites and chromosome 21q22 specific sequences in formalin-fixed, paraffin-embedded tissue or cells by fluorescence in situ hybridization (FISH). Storage/Stability: The ZytoLight SPEC 13/CEN 18/SPEC 21 Triple Color Probe EmiNQPF must be stored at -16-22 C in the dark (short-time storage at 2 8 C is possible) and is stable through the expiry date printed on the label. - 1 -
Use: Safety Preca recautions: This product is designed for in vitro diagnostic use (according to EU directive 98/79/EC). Interpretation of results must be made within the context of the patient s clinical history with respect to further clinical and pathologic data of patient by a qualified pathologist! Read the operating instructions prior to use! Do not use the reagents after the expiry date has been reached! This product contains substances (in low concentrations and volumes) that are harmful to health. Avoid any direct contact with the reagents. Take appropriate protective measures (use disposable gloves, protective glasses, and lab garments)! If reagents come into contact with skin, rinse skin immediately with copious quantities of water! A material safety data sheet is available on request for the professional user! Principle of the Method The presence of certain nucleic acid sequences in cells or tissue can be detected by in situ hybridization using labeled DNA probes. The hybridization results in duplex formation of sequences present in the test object with the labeled DNA probe. Duplex formation (with sequences of chromosomes 13 and 21, and chromosome 18 alpha-satellites in the test material) is directly detected by using the tags of fluorescence-labeled polynucleotides. - 2 -
Instructions Pretreatment (dewaxing, proteolysis, post-fixation) should be carried out according to the needs of the user. Denaturation and hybridization of probe: NK Pipette 10 µl ZytoLight SPEC 13/CEN 18/SPEC 21 Triple Color Probe EmiNQPF each onto individual samples A gentle warming of the probe, as well as using a pipette tip which has been cut off to increase the size of the opening, can make the pipetting process easier. Avoid long exposure of the probe to light. OK Avoiding trapped bubbles, cover the samples with a coverslip (22 mm x 22 mm). Seal the coverslip, e.g. with a layer of hot glue from an adhesive pistol or with rubber cement PK= Denature the slides at 75 C (±2 C) for 10 min, e.g. on a hot plate Depending upon the age of the sample and variations in the fixation stage, it may be necessary to optimize the denaturing temperature (73 C- 77 C). QK= Transfer the slide to a humidity chamber and hybridize overnight at 37 C (e.g. in a hybridization oven) It is essential that the tissue/cell samples do not dry out during the hybridization step. Further processing, such as washing and counter-staining, can be completed according to the user s needs. For a particularly user-friendly performance, we recommend the use of a ZytoLight FISH system by ZytoVision. These systems were also used for the confirmation of appropriateness of the ZytoLight SPEC 13/CEN 18/SPEC 21 Triple Color Probe EmiNQPF. - 3 -
Results With the use of appropriate filter sets, the hybridization signals of labeled chromosome 13 specific sequences appear green; the hybridization signals of labeled alpha-satellite-sequences of the centromere of chromosome 18 appear blue, and the hybridization signals of labeled chromosome 21 specific sequences appear orange. In interphases of normal cells or cells without aberrations of chromosomes 13, 18, and 21, two chromosome 13, two chromosome 18, and two chromosome 21 signals appear. In cells with an aneuploidy of one of the chromosomes mentioned above, a different signal pattern is visible in interphases. In order to judge the specificity of the signals, every hybridization should be accompanied by controls. We recommend using at least one control sample in which the chromosome 13, 18, and 21 copy number is known. Care should be taken not to evaluate overlapping cells, in order to avoid false results, e.g. an amplification of genes. Due to decondensed chromatin, single FISH signals can appear as small signal clusters. Thus, two or three signals of the same size, separated by a distance equal to or less than the diameter of one signal, should be counted as one signal. Our experts are available to answer your questions. - 4 -
Literature Kievits T, et al. (1990) Cytogenet Cell Genet 53: 134-6. Waye JS, Willard HF (1987) Nucleic Acids Res 15: 7549-69. Wilkinson DG: In Situ Hybridization, A Practical Approach, Oxford University Press (1992) ISBN 0 19 963327 4. As of: September 20, 2010 (4.6) Trademarks: ZytoVision and ZytoLight are trademarks of ZytoVision GmbH. - 5 -
Bio Optica Milano S.p.A. via San Faustino 58 I-20134 Milano Tel. +39 02.21.27.13.1 Fax Acquisti/Export +39 02.21.54.155 Fax Assistenza/Contabilità +39 02.26.41.74.48 Fax Vendite +39 02.21.53.000 ZytoLight SPEC 13/CEN 18/SPEC 21 Triple Color Probe IVD Dispositivo medico-diagnostico in vitro Produttore: ZytoVision GmbH Codice: Z-2095-200 (0.2ml) Z-2095-50 (0.05 ml).. Per l identificazione di sequenze cromosoma 13 specifiche, dell alfasatellite del cromosoma 18, e di sequenze cromosoma 21 specifiche mediante Ibridazione in Situ In Fluorescenza (FISH).. REAGENTE PRONTO ALL USO Dispositivo medico-diagnostico in vitro Secondo la direttiva europea 98/79/EC Revisione 140526 del 26/05/14 Pagina 1 di 5
Bio Optica Milano S.p.A. via San Faustino 58 I-20134 Milano Tel. +39 02.21.27.13.1 Fax Acquisti/Export +39 02.21.54.155 Fax Assistenza/Contabilità +39 02.26.41.74.48 Fax Vendite +39 02.21.53.000 Descrizione del Prodotto Contenuto: Prodotto: Specificità: Conservazione: Utilizzo: Sonda ZytoLight SPEC 13/CEN 18/SPEC 21 Triple color (PL143) in tampone di ibridazione. La sonda contiene polinucleotidi marcati in verde (ZyGreen: eccitazione a 503 nm, emissione a 528 nm simile al FITC) che identificano sequenze specifiche del cromosoma 13, polinucleotidi marcati in blu (ZyBlu: eccitazione a 426 nm e emissione a 480 nm, simile a DEAC) che identificano sequenze alfasatellite del centromero del cromosoma 18, e polinucleotidi marcati in arancio (ZyOrange: eccitazione a 547 nm, emissione a 572 nm, simile alla rodamina), che identificano sequenze specifiche del cromosoma 21. Z-2095-200: 0.2 ml (20 reazioni da 10μl ciascuna) Z-2095-50: 0.05 ml (5 reazioni da 10μl ciascuna) La Sonda ZytoLight SPEC 13/CEN 18/SPEC 21 Triple color (PL143) è adibita all evidenziazione di sequenze specifiche del cromosoma umano 13q12 così come l alfa satellite del cromosoma 18 e sequenze del cromosoma 21q22 su tessuti o cellule fissati in formalina ed inclusi in paraffina, mediante ibridazione in situ in fluorescenza (FISH). La Sonda ZytoLight SPEC 13/CEN 18/SPEC 21 Triple color (PL143) deve essere conservata -16-22 C in assenza di luce (2 8 C per brevi periodi di tempo). La sonda è stabile durante il periodo indicato dalla data di scadenza. Il prodotto è designato per la diagnosi in vitro (in accordo con la direttiva EU 98/79/EC). L interpretazione dei risultati deve essere fatta in un contesto clinico e patologico del paziente da un patologo esperto. Revisione 140526 del 26/05/14 Pagina 2 di 5
Bio Optica Milano S.p.A. via San Faustino 58 I-20134 Milano Tel. +39 02.21.27.13.1 Fax Acquisti/Export +39 02.21.54.155 Fax Assistenza/Contabilità +39 02.26.41.74.48 Fax Vendite +39 02.21.53.000 Precauzioni per l uso: Leggere le istruzioni prima dell utilizzo del prodotto. Non usare il prodotto dopo la data di scadenza. Il prodotto contiene sostanze (a basse concentrazioni) dannose per la salute, evitare il contatto diretto con il prodotto. Usare dispositivi di sicurezza (guanti, occhiali di protezione, camice). Se il prodotto viene a contatto con la pelle, lavare abbondantemente con acqua. Su richiesta dell utilizzatore è disponibile una scheda di sicurezza. Principio del Metodo La presenza di determinate sequenze di acido nucleico nelle cellule o nei tessuti può essere rilevata attraverso ibridazione in situ con l'utilizzo di sonde a DNA marcate. L'ibridazione induce la formazione di una struttura a doppio filamento (ibrido duplex) tra le sequenze presenti nel campione in analisi e la sonda. La formazione del duplex (con le sequenze dei cromosomi 13 e 21, e dell alfasatellite del cromosoma 18 nel campione) può essere visualizzata attraverso l'utilizzo di un microscopio a fluorescenza con filtri appropriati. Istruzioni Il pretrattamento (deparaffinazione, proteolisi, post-fissazione) deve essere effettuato dipendentemente dalle esigenze dell'utilizzatore. Denaturazione e ibridazione della sonda: 1) Pipettare 10 μl di Sonda ZytoLight SPEC 13/CEN 18/SPEC 21 Triple color (PL143) in ciascun campione. Un leggero riscaldamento della sonda, nonché l'utilizzo di una punta della pipetta tagliata (per aumentare la dimensione dell'apertura), può facilitare il pipettaggio. Evitare di esporre a lungo la sonda alla luce. 2) Evitare la formazione di bolle, coprire con un coprioggetto (22 mm x 22 mm). Sigillare il coprioggetto, ad esempio con uno strato di colla a caldo o silicone. 3) Denaturare il DNA presente nei vetrini a 75 C (±2 C) per 10 minuti, e.g. su una piastra termoriscaldata. Revisione 140526 del 26/05/14 Pagina 3 di 5
Bio Optica Milano S.p.A. via San Faustino 58 I-20134 Milano Tel. +39 02.21.27.13.1 Fax Acquisti/Export +39 02.21.54.155 Fax Assistenza/Contabilità +39 02.26.41.74.48 Fax Vendite +39 02.21.53.000 La temperatura di denaturazione deve essere ottimizzata, nell'intervallo tra 73 C e 77 C, dipendentemente dal grado di fissazione e dal tempo di conservazione del preparato istologico/citologico. 4) Trasferire i vetrini in una camera umida ed ibridare overnight a 37 C (e.g. in termostato). È essenziale che il tessuto/le cellule non si asciughino durante l'ibridazione. Eventuali ulteriori processi, quali lavaggio e contro-colorazione, possono essere completati secondo le esigenze dell'utente. Per ottenere prestazioni ottimali, si consiglia l'uso di un sistema di FISH ZytoLight (ZytoVision). Questo sistema viene anche utilizzato per confermare l adeguatezza della Sonda ZytoLight SPEC 13/CEN 18/SPEC 21 Triple color (PL143). Risultati: Con l'uso di appositi set di filtri, i segnali di ibridazione delle sequenze specifiche del cromosoma 13 marcato appaiono di colore verde, quelli delle sequenze alfasatellite del centromero del cromosoma 18 appaiono blu, e quelli delle sequenze specifiche del cromosoma 21 appaiono arancioni. Nell interfase di cellule normali o cellule senza aberrazione dei cromosomi 13,18 e 21, appaiono due segnali del cromosoma 13, due segnali del cromosoma 18, e due segnali del cromosoma 21. In cellule con un aneuploidia in uno dei cromosomi menzionati, nell interfase è visibile un pattern di segnale differente. Al fine di valutare la specificità dei segnali, ogni ibridazione deve essere verificata mediante controlli (positivo e negativo). Si consiglia di utilizzare almeno un campione di controllo in cui sia inequivocabilmente noto il numero di copie del cromosoma 13, 18, e 21. Si consiglia di prestare particolare attenzione nell'osservazione di cellule sovrapposte, le quali potrebbero condurre ad una erronea interpretazione dei risultati, e.g. un amplificazione dei geni. A causa della de condensazione della cromatina, singoli segnali FISH possono apparire come piccoli cluster, comunque due o tre segnali della stessa dimensione, separati da uno spazio pari alla dimensione di un segnale, devono essere considerati come un unico segnale. Revisione 140526 del 26/05/14 Pagina 4 di 5
Bio Optica Milano S.p.A. via San Faustino 58 I-20134 Milano Tel. +39 02.21.27.13.1 Fax Acquisti/Export +39 02.21.54.155 Fax Assistenza/Contabilità +39 02.26.41.74.48 Fax Vendite +39 02.21.53.000 Bibliografia: Revisione 140526 del 26/05/14 Pagina 5 di 5