ZytoLight SPEC ERG Dual Color Break Apart Probe

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Lucio Fantoni
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1 ZytoLight SPEC ERG Dual Color Break Apart Probe IVD Dispositivo medico-diagnostico in vitro Produttore: ZytoVision GmbH Codice: Z (0.2ml).. Per l identificazione della traslocazione che coinvolge il gene ERG a 21q22.2 mediante Ibridazione in Situ In Fluorescenza (FISH)... REAGENTE PRONTO ALL USO Dispositivo medico-diagnostico in vitro Secondo la direttiva europea 98/79/EC Pagina 1 di 5

. Per l identificazione della traslocazione che coinvolge il gene ERG a 21q22.

2 Descrizione del Prodotto Contenuto: Prodotto: Specificità: Conservazione: Utilizzo: Sonda ZytoLight SPEC ERG Dual Color Break Apart (PL95) in tampone di ibridazione. La sonda contiene polinucleotidi marcati in verde (ZyGreen: eccitazione a 503 nm, emissione a 528 nm simile al FITC) che identificano la sequenza mappata in 21q22.2 distale al punto di rottura del gene ERG, e polinucleotidi marcati in arancio (ZyOrange: eccitazione a 547 nm, emissione a 572 nm, simile alla rodamina), che identificano sequenze mappate in 21q22.2 prossimale al punto di rottura del gene MYB. Z : 0.2 ml (20 reazioni da 10μl ciascuna) La Sonda ZytoLight SPEC ERG Dual Color Break Apart (PL95) è adibita all evidenziazione delle traslocazioni che coinvolgono il gene ERG a 21q22.2 su tessuti o cellule fissati in formalina ed inclusi in paraffina, mediante ibridazione in situ in fluorescenza (FISH). La Sonda ZytoLight SPEC ERG Dual Color Break Apart (PL95) deve essere conservata a C in assenza di luce (2 8 C per brevi periodi di tempo). La sonda è stabile durante il periodo indicato dalla data di scadenza. Il prodotto è designato per la diagnosi in vitro (in accordo con la direttiva EU 98/79/EC). L interpretazione dei risultati deve essere fatta in un contesto clinico e patologico del paziente da un patologo esperto. Precauzioni per l uso: Leggere le istruzioni prima dell utilizzo del prodotto. Non usare il prodotto dopo la data di scadenza. Il prodotto contiene sostanze (a basse concentrazioni) dannose per la salute, evitare il contatto diretto con il prodotto. Usare dispositivi di sicurezza (guanti, occhiali di protezione, camice). Se il prodotto viene a contatto con la pelle, lavare abbondantemente con acqua. Pagina 2 di 5

2 distale al punto di rottura del gene ERG, e polinucleotidi marcati in arancio (ZyOrange: eccitazione a 547 nm, emissione a 572 nm, simile alla rodamina), che identificano sequenze mappate in 21q22.

3 Principio del Metodo La presenza di determinate sequenze di acido nucleico nelle cellule o nei tessuti può essere rilevata attraverso ibridazione in situ con l'utilizzo di sonde a DNA marcate. L'ibridazione induce la formazione di una struttura a doppio filamento (ibrido duplex) tra le sequenze presenti nel campione in analisi e la sonda. La formazione del duplex (con le sequenze della regione cromosomale 21q22.2 nel campione) può essere visualizzata attraverso l'utilizzo di un microscopio a fluorescenza con filtri appropriati. Istruzioni Il pretrattamento (deparaffinazione, proteolisi, post-fissazione) deve essere effettuato dipendentemente dalle esigenze dell'utilizzatore. Denaturazione e ibridazione della sonda: 1) Pipettare 10 μl di Sonda ZytoLight SPEC ERG Dual Color Break Apart (PL95) in ciascun campione. Un leggero riscaldamento della sonda, nonché l'utilizzo di una punta della pipetta tagliata (per aumentare la dimensione dell'apertura), può facilitare il pipettaggio. Evitare di esporre a lungo la sonda alla luce. 2) Evitare la formazione di bolle, coprire con un coprioggetto (22 mm x 22 mm). Sigillare il coprioggetto, ad esempio con uno strato di colla a caldo o silicone. 3) Denaturare il DNA presente nei vetrini a 75 C (±2 C) per 10 minuti, e.g. su una piastra termoriscaldata. La temperatura di denaturazione deve essere ottimizzata, nell'intervallo tra 73 C e 77 C, dipendentemente dal grado di fissazione e dal tempo di conservazione del preparato istologico/citologico. 4) Trasferire i vetrini in una camera umida ed ibridare overnight a 37 C (e.g. in termostato). Pagina 3 di 5

La formazione del duplex (con le sequenze della regione cromosomale 21q22.2 nel campione) può essere visualizzata attraverso l'utilizzo di un microscopio a fluorescenza con filtri appropriati.

4 È essenziale che il tessuto/le cellule non si asciughino durante l'ibridazione. Eventuali ulteriori processi, quali lavaggio e contro-colorazione, possono essere completati secondo le esigenze dell'utente. Per ottenere prestazioni ottimali, si consiglia l'uso di un sistema di FISH ZytoLight (ZytoVision). Questo sistema viene anche utilizzato per confermare l adeguatezza della Sonda ZytoLight SPEC ERG Dual Color Break Apart (PL95). Risultati: Con l'uso di appositi set di filtri, i segnali di ibridazione della regione cromosomale 21q22.2 marcata appaiono di colore verde e arancione. In interfase di cellule normali o cellule senza traslocazione che coinvolge la banda 21q22.2, appaiono due segnali verde ed arancione fusi insieme. Un locus 21q22.2 che porta la traslocazione presenterà due segnali, verde ed arancione, separati fra loro. Al fine di valutare la specificità dei segnali, ogni ibridazione deve essere verificata mediante controlli (positivo e negativo). Si consiglia l utilizzo di almeno un campione in cui lo stato della regione 21q22.2 sia noto. Si consiglia di prestare particolare attenzione nell'osservazione di cellule sovrapposte, le quali potrebbero condurre ad una erronea interpretazione dei risultati, e.g. un amplificazione dei geni. A causa della de condensazione della cromatina, singoli segnali FISH possono apparire come piccoli cluster, comunque due o tre segnali della stessa dimensione, separati da uno spazio pari alla dimensione di un segnale, devono essere considerati come un unico segnale. Pagina 4 di 5

Per ottenere prestazioni ottimali, si consiglia l'uso di un sistema di FISH ZytoLight (ZytoVision).

5 Bibliografia: Pagina 5 di 5

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