-METILINDOLO (Skatole) URINARIO IN FLUORIMETRIA FAST - Codice Z BIOCHIMICA Il -metil indolo o skatole (P.M..) è un composto organico che presenta, come unità strutturale, il gruppo indolico. Esso è presente nelle feci e deriva dalla biotrasformazione (decarbossilazione) dell'aminoacido Triptofano che avviene nel tratto digestivo dei mammiferi. Fig. : -metilindolo o Skatole PATOLOGIE Nel colon vi è una notevole flora batterica che può essere soggetta a modificazioni che la rendono dannosa per la salute. Quando la flora presente è equilibrata ed utile all'organismo vi è una condizione di equilibrio che prende il nome di "eubiosi". Quando, invece, appaiono dei batteri non desiderati, l'equilibrio si altera e viene a crearsi la "disbiosi intestinale", una condizione, purtroppo, assai diffusa. Se la flora intestinale non è equilibrata, gli aminoacidi derivati dalle proteine mal digerite, subiscono un processo di decarbossilazione che produce ammine tossiche, tra le quali appunto il -metil indolo, derivante dal triptofano. TRASFORMAZIONE DELLE PROTEINE Proteina Amina prodotta arginina agmatina cistina e cisteina mercaptano istidina istamina lisina cadaverina ornithina putrescina tirosina tiramina triptofano indolo e skatole Molte di queste ammine sono dei potenti veleni vasocostrittori. Va inoltre notato che il -metil indolo è responsabile del particolare odore delle feci. EUREKA srl LAB DIVISION VAT N E-mail:info@eurekaone.com www.eurekaone.com Head Quarter: Via Enrico Fermi Chiaravalle (AN) ITALY Tel. +9 9 Fax + 9 99 Release N -Metilindolo urinario in Fluorimetria Febbraio
CARATTERISTICHE DEL KIT Principio del Metodo: Il -Metilindolo viene analizzato trattando l urina con un opportuno diluente; la soluzione ottenuta viene direttamente iniettata in HPLC. Recupero del Metodo : > 9 % Sensibilità del Metodo : <. µg/l Range dinamico del metodo :. µg/l Valori di riferimento: µg/l disbiosi lieve µg/l disbiosi media > µg/l disbiosi Contenuto della confezione : Tutti i reagenti sono pronti all'uso e stabili anni a 8 C. Reagente A Soluzione Tampone, x ml Reagente B Soluzione Test, x ml Reagente C Calibratore liofilo, x ml Vedi Avvertenze Vedi Avvertenze Reagente M Fase mobile, x ml Dotazione strumentale minima richiesta : Dotazione opzionale : Strumento HPLC isocratico con loop da µl. Detector fluorimetrico λ EX =8 nm λ EM = nm Registratore di cromatogrammi Autocampionatore. Computer gestionale Modalità per il prelievo urinario : Raccolta urine della prima mattina
PROCEDURA PREANALITICA Preparazione della Soluzione Test a µg/l In una provetta pipettare : 9 µl di H O di grado HPLC µl di Reagente B - Soluzione Test INIEZIONE : Al vortex per secondi Iniettare µl della soluzione nel cromatografo HPLC ed attendere la stampa del cromatogramma. Verificare che la Sol. Test abbia un tempo di ritenzione simile a quello riportato in fig.. Se il Test ha dato esito positivo si può procedere alla seduta analitica. Se così non fosse verificare la funzionalità del sistema analitico. Importante : Questa Soluzione così ottenuta non deve essere usata come calibratore PROCEDURA ANALITICA FASE : Dispensare in provetta Calibratore Campione Reagente A Sol. tampone 9 µl 9 µl Campione µl Reagente C Calibratore µl Al vortex per secondi N.B.: il campione così preparato è stabile giorni a -8 C e fino a mesi a - C INIEZIONE : Iniettare µl della soluzione nel cromatografo HPLC ed attendere la stampa del cromatogramma Release N -Metilindolo urinario in Fluorimetria Febbraio
REAGENTE B : SOLUZIONE TEST -METILINDOLO URINARIO - Avvertenze -METILINDOLO µg/l REAGENTE C : CALIBRATORE URINARIO LIOFILO -METILINDOLO Modalità d uso e Ricostituzione: i Calibratori devono essere usati per calibrare il sistema HPLC. Aggiungere esattamente ml di H O grado HPLC. Agitare delicatamente per minuti fino a quando tutto il materiale non è dissolto. Conservazione e stabilità : i Calibratori liofili sono stabili mesi dalla data di preparazione se conservati a C. Almeno ore a temperatura ambiente, giorni se conservati a 8 C e mese a - C una volta ricostituiti. Non usarli dopo la data di scadenza. Una volta ricostituiti è possibile frazionarli in aliquote e ricongelarli a C. Agitare bene prima dell uso. Confezionamento : x ml Precauzioni : questo calibratore in matrice umana deve essere trattato con cura e considerato come potenzialmente infettivo. µg/l PARAMETRI DEL DETECTOR FLUORIMETRICO λ EX 8 nm λ EM nm GAIN x TEMPO DI INTEGRAZIONE secondi PROTEZIONE DELLA COLONNA ANALITICA Per salvaguardare la colonna analitica Reverse Phase PURSUIT XRs C8, x, mm, µ, è tassativo l uso della Guard Column Cartridge Holder/CARTUCCIA PRECOLONNA, cod. ZUCC e dei PREFILTRI per CARTUCCIA PRECOLONNA ( x pz ) cod. ZUCC. CONDIZIONAMENTO DELLA COLONNA Installare la colonna analitica nuova Reverse Phase PURSUIT XRs C8, x, mm, µ. Disconnettere il detector e far passare ml di una soluzione di H O : Metanolo ( : 8 v/v ) e successivamente ml di H O per HPLC, al flusso di, ml/minuto. Non riciclare i liquidi di lavaggio. Filtrare la fase mobile con pompa da vuoto e filtro idoneo da, µ o, µ. Condizionare la colonna con la Fase Mobile al flusso di, ml/minuto e scaricare i primi ml. Condizionare ulteriormente per minuti anche a ricircolo di fase. E possibile effettuare analisi a ricircolo di fase. Se la T Amb del Laboratorio è > C si consiglia di conservare a -8 C la Fase Mobile fra una seduta analitica e l altra. PULIZIA DELLA COLONNA PARAMETRI HPLC Alla fine della seduta di analisi far flussare ml di H O e scaricare. Far flussare una soluzione di Acqua : Metanolo o Acetonitrile :8 (v/v) per minuti scaricandola. La colonna è di nuovo pronta per la successiva seduta di analisi. LOOP µl Flusso di lavoro consigliato, ml/minuto Pressione corrispondente Circa bar PARAMETRI INTEGRATORE HP 9 / 9 / 9 ATTENUAZIONE PARAMETRI COMPUTER GESTIONALE SECONDO LE SPECIFICHE DEL SOFTWARE GESTIONALE
ACCESSORI E CONSUMABILI CODICE DESCRIZIONE CONFEZIONE Z Calibratore liofilo per -Metilindolo urinario x ml Z Controllo liofilo per -Metilindolo urinario Livello x ml Z8 Controllo liofilo per -Metilindolo urinario Livello x ml Z9 Controllo liofilo per -Metilindolo urinario Livelli e x x ml ZAC Sistema completo Colonna Analitica Pursuit XRs C8 ( x,mm - um) PZ ZAR Colonna interna Pursuit XRs C8 PZ ZACG Precolonna interna per Pursuit XRs C8 x PZ ZA Metasaver Precolumn Filter. um x PZ S998 Vial standard di vetro da ml con tappo a vite x PZ
-METILINDOLO URINARIO ( Cromatogrammi di Riferimento ) mv -,,,,,,,, test.data 8 8, 9 9, 9 mv 8 9 8,,,,,,,, cal.data 8 8, 9 Fig. : Soluzione Test Fig. : Calibratore liofilo R.T. 8. -Metilindolo R.T. 8. -Metilindolo µg/l
-METILINDOLO URINARIO ( Cromatogrammi di Riferimento ) 9 mv 8 9 8,,,,,,,, c.data 8 8, 9 8 mv 9 8 - -,,,,,,,, campione.data 8 8, 9 Fig. : Controllo alto Fig. : Campione urinario R.T. 8. -Metilindolo 9,8 µg/l R.T. 8. -Metilindolo, µg/l