Droghe d Abuso urinarie in LC-MS Cod. LC Metodo di conferma in LC-MS

Transcript

1 in LC-MS Cod. LC74010 Metodo di conferma in LC-MS INTRODUZIONE La determinazione delle droghe d abuso nei liquidi biologici (soprattutto in urina) viene generalmente effettuata in prima istanza usando tecniche immunometriche che si avvalgono della reazione antigene-anticorpo e successiva marcatura con vari reagenti. Queste metodologie sono considerate di screening. Poiché tali tecniche non possono escludere falsi positivi, le positività allo screening devono essere confermate con tecnica alternativa, generalmente con tecnica cromatografica sia Gassosa (GC) che Liquida (LC) entrambe accoppiate con detector di Massa (MS). Il presente metodo consente di determinare la Morfina, la Normorfina, la Norcodeina, la Diidrocodeina, la Codeina, l Etilmorfina, la 6-Monoacetilmorfina, la Diacetilmorfina, l Ossicodone, il 3,4-MDA, il 3,4-MDE, il 3,4-MDMA, la Chetamina, la Benzoilecgonina, la Cocaina, il Metadone, l EDDP, l Amfetamina, la Metamfetamina, la Norbuprenorfina, la Buprenorfina, la Cocaetilene, l LSD, l Efedrina, la Pseudoefedrina, la Norpseudoefedrina, l MBDB ed il delta-9-thc-cooh con lettura in LC-MS. EUREKA srl LAB DIVISION VAT N info@eurekaone.com Head Quarter: Via Enrico Fermi Chiaravalle (AN) ITALY Tel Fax Release N 004 Droghe d Abuso in LC/MS Dicembre

2 Principio del metodo : CARATTERISTICHE DEL KIT Il presente metodo consente di determinare un ampio pacchetto di Droghe d abuso urinarie dopo una semplice idrolisi e lettura in LC-MS. Recupero del Metodo : 100 % Sensibilità del Metodo : < 10,0 ng/ml Range dinamico del Metodo : ng/ml Valore di cut-off: Morfina 100 ng/ml Normorfina 100 ng/ml Diidrocodeina 100 ng/ml Chetamina 100 ng/ml Codeina 100 ng/ml Benzoilecgonina 100 ng/ml Etilmorfina 100 ng/ml Cocaina 150 ng/ml 6-Monoacetilmorfina 100 ng/ml Metadone 100 ng/ml Norcodeina 100 ng/ml Diacetilmorfina 100 ng/ml Ossicodone 100 ng/ml Amfetamina 250 ng/ml 3,4-MDA 250 ng/ml Metamfetamina 250 ng/ml 3,4-MDMA 250 ng/ml Norbuprenorfina 5 ng/ml 3,4-MDE 250 ng/ml Buprenorfina 5 ng/ml delta-9-thc-cooh 15 ng/ml EDDP 100 ng/ml Cocaetilene 100 ng/ml Efedrina 250 ng/ml LSD n.d. MBDB 250 ng/ml Rif. Procedure applicative del procedimento n.99/cu 30 ottobre 2007 Contenuto della Confezione : Tutti i reagenti sono pronti all uso e stabili 3 anni a 2 8 C. Reagente A Soluzione per idrolisi delta-9-thc-cooh, 1 x 2 ml Reagente B Enzima di idrolisi Droghe, 4 x 1 ml Da ricostituire con 9,0 ml di Reagente C. Quando ricostituito, l enzima è stabile 1 anno a 2 8 C. Reagente C Soluzione Tampone per Idrolisi, 1 x 20 ml Reagente D Soluzione Diluente + Std interni, 1 x 150 ml Reagente M1 Fase Mobile M1, 1 x 250 ml Reagente M2 Fase Mobile M2, 1 x 250 ml Dotazione strumentale minima richiesta : Strumento LC-MS triplo quadrupolo con valvola Divert Analisi in gradiente binario Modalità di lavoro MRM Computer gestionale Dotazione opzionale : Autocampionatore Modalità di prelievo urinario : Prelevare 10 ml urina Stabile per circa 3 mesi a 20 C Centrifugare le urine prima di processarle. 2

3 PROCEDURA ANALITICA PER LE DROGHE (ESCLUSO delta-9-thc-cooh, OPPIACEI e NORBUPRENORFINA): FASE 1 : In provette di plastica da 10 ml idonee dispensare in sequenza. Calibratore Campione Controlli Calibratore liofilo urinario o Standard 100 µl chimico MBDB Campione 100 µl Controlli 100 µl Reagente D Soluzione Diluente 900 µl 900 µl 900 µl Al vortex per 10 secondi INIEZIONE : Iniettare 20 µl della soluzione nel sistema LC Release N 004 Droghe d Abuso in LC/MS Dicembre

4 PROCEDURA ANALITICA SPECIFICA PER OPPIACEI e NORBUPRENORFINA: FASE 1 : Ricostituzione dell enzima Aggiungere al Reagente B Enzima di idrolisi (contenente 1 ml) 9 ml di Reagente C Soluzione Tampone per idrolisi. Agitare per inversione FASE 2 : Idrolisi del campione In provette di plastica da 10 ml idonee dispensare in sequenza. Calibratore Campione Controlli Calibratore liofilo urinario 1000 µl Campione 1000 µl Controlli 1000 µl Reagente B Enzima ricostituito 100 µl 100 µl 100 µl Al vortex per 10 secondi FASE 3 : Porre in stufa a 150 C per 3 ore. Raffreddare a T ambiente FASE 4 : Prelevare 100µl di idrolizzato ed aggiungere 500 µl di Reagente D Soluzione Diluente Al vortex per 10 secondi INIEZIONE : Iniettare 20 µl della soluzione nel sistema LC Release N 004 Droghe d Abuso in LC/MS Dicembre

5 PROCEDURA ANALITICA SPECIFICA PER delta-9-thc-cooh: FASE 1 : Idrolisi del campione In provette di plastica da 10 ml idonee dispensare in sequenza. Calibratore Campione Controlli Calibratore liofilo urinario 500 µl Campione 500 µl Controlli 500 µl Reagente A Soluzione per idrolisi delta-9-thc-cooh 100 µl 100 µl 100 µl Al vortex per 10 secondi FASE 2 : Porre in stufa a 60 C per 20 minuti. Raffreddare a T ambiente Portare a ph compreso fra 5 e 7 con circa µl di Acido Acetico glaciale FASE 3 : Prelevare 100 µl di idrolizzato ed aggiungere 500 µl di Reagente D Soluzione Diluente Al vortex per 10 secondi INIEZIONE : Iniettare 20 µl della soluzione nel sistema LC Release N 004 Droghe d Abuso in LC/MS Dicembre

6 - Avvertenze CONDIZIONAMENTO DELLA COLONNA Installare la colonna analitica nuova PURSUIT XRs C18 30 x 2 mm. Disconnettere il detector e far passare 30 ml di una soluzione di H 2 O : Metanolo ( 20 : 80 v/v ) al flusso di 200 ul / minuto. Non riciclare i liquidi di lavaggio. Condizionare la colonna con la fase mobile al flusso di 1,0 ml / minuto e scaricare i primi 10 ml. NON è possibile effettuare analisi a ricircolo di fase. Se la T Amb del Laboratorio è > 25 C si consiglia di conservate a 2-8 C la Fase Mobile fra una seduta analitica e l altra. PULIZIA DELLA COLONNA Disconnettere il detector. Flussare una soluzione di H 2 O : Metanolo ( 20 : 80 v/v ) per 30 minuti scaricandola. LAVAGGIO SIRINGA AUTOCAMPIONATORE Lavare la siringa, prima di ogni seduta analitica, con Metanolo. PARAMETRI COMPUTER GESTIONALE SECONDO LE SPECIFICHE DEL SOFTWARE GESTIONALE GRADIENTE Tempo (min) % M1 (POMPA A) % M2 (POMPA B) Flusso (µl/min)

7 ANALITA PARENT ION Normorfina Morfina Norcodeina Codeina Diidrocodeina Ossicodone MDA MDMA MDE Chetamina BEG Cocaina MAM Metadone Diacetilmorfina EDDP Amfetamina Metamfetamina Norbuprenorfina Etilmorfina Delta-9-THC-COOH Cocaetilene LSD Efedrina Pseudoefedrina Norpseudoefedrina MBDB Buprenorfina Delta-8-THC Nalorfina Propilbenzoilecgonina ,4-MDPA

8 ACCESSORI E CONSUMABILI CODICE DESCRIZIONE CONFEZIONE CC43016 Calibratore urinario per Amfetamine 2 x 5 x 5 ml CC46016 Calibratore urinario per Benzoilecgonina e Cocaetilene 2 x 5 x 5 ml CC48016 Calibratore urinario per Metadone 2 x 5 x 5 ml CC43017 Controllo multiparametrico per Droghe d abuso Livello 1 6 x 5 ml CC43018 Controllo multiparametrico per Droghe d abuso Livello 2 6 x 5 ml CC43019 Controllo multiparametrico per Droghe d abuso Livelli 1 e 2 2 x 6 x 5 ml CC44016 Calibratore urinario per Buprenorfina e Norbuprenorfina 2 x 5 x 6 ml CC44017 Controllo urinario per Buprenorfina e Norbuprenorfina Livello 1 6 x 6 ml CC44018 Controllo urinario per Buprenorfina e Norbuprenorfina Livello 2 6 x 6 ml CC44019 Controllo urinario per Buprenorfina e Norbuprenorfina Livelli 1 e 2 2 x 6 x 6 ml CC45016 Calibratore urinario per Oppiacei 2 x 5 x 5 ml CC45017 Controllo urinario per Oppiacei Livello 1 6 x 5 ml CC45018 Controllo urinario per Oppiacei Livello 2 6 x 5 ml CC45019 Controllo urinario per Oppiacei Livelli 1 e 2 2 x 6 x 5 ml CC45116 Calibratore urinario per 6-Monoacetilmorfina 2 x 5 x 5 ml CC46116 Calibratore urinario per Cocaina 2 x 5 x 5 ml CC48116 Calibratore urinario per EDDP 2 x 5 x 5 ml CC48017 Controllo urinario per EDDP, 6-MAM e Cocaina Livello 1 6 x 5 ml CC48018 Controllo urinario per EDDP, 6-MAM e Cocaina Livello 2 6 x 5 ml CC48019 Controllo urinario per EDDP, 6-MAM e Cocaina Livelli 1 e 2 2 x 6 x 5 ml CC47016 Calibratore urinario per THC 2 x 5 x 10 ml CC47017 Controllo urinario per THC Livello 1 6 x 10 ml CC47018 Controllo urinario per THC Livello 2 6 x 10 ml CC47019 Controllo urinario per THC Livelli 1 e 2 2 x 6 x 10 ml Z Vial standard di vetro da 2 ml con tappo a vite 1 x 144 Pz A X020 Colonna analitica Pursuit C 18 (30 x 2 mm. 2.8 um) 1 Pz 8

9 Fig. 1 : Campione urinario Fig. 2 : Spettro di Massa del delta-9-thc-cooh R.T delta-9-thc-cooh Transizione >

10 Fig. 3 : Campione urinario Fig. 4 : Spettro di Massa della Benzoilecgonina R.T BENZOILECGONINA Transizione >

11 Fig. 5 : Campione urinario Fig. 6 : Spettro di Massa della Morfina R.T COCAINA Transizione >

12 Fig. 7 : Campione urinario Fig. 8 : Spettro di Massa della Cocaetilene R.T COCAETILENE Transizione >

13 Fig. 9 : Campione urinario Fig. 10 : Spettro di Massa della Morfina R.T MORFINA Transizione >

14 Fig. 11 : Campione urinario Fig. 12 : Spettro di Massa della Codeina R.T CODEINA Transizione >

15 Fig. 13 : Campione urinario Fig. 14 : Spettro di Massa della Etilmorfina R.T ETILMORFINA Transizione >

16 Fig. 15 : Campione urinario Fig. 16 : Spettro di Massa della Diidrocodeina R.T DIIDROCODEINA Transizione >

17 Fig. 17 : Campione urinario Fig. 18 : Spettro di Massa del Metadone R.T METADONE Transizione >

18 Fig. 19 : Campione urinario Fig. 20 : Spettro di Massa del 3,4-MDMA R.T ,4-MDMA Transizione >

19 Fig. 21 : Campione urinario Fig. 22 : Spettro di Massa della Amfetamina R.T AMFETAMINA Transizione >

20 Fig. 23 : Campione urinario Fig. 24 : Spettro di Massa della Metamfetamina R.T Metamfetamina Transizione >

21 Fig. 25 : Campione urinario Fig. 26 : Spettro di Massa del 3,4-MDE R.T ,4-MDE Transizione >

22 Fig. 27 : Campione urinario Fig. 28 : Spettro di Massa dell EDDP R.T EDDP Transizione >