ANTIDEPRESSIVI TRICICLICI 1 SIERICI e/o PLASMATICI in UV Codice Z56010 ( Nordoxepina, Desipramina ed Imipramina )
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- Rebecca Di Giovanni
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1 ANTIDEPRESSIVI TRICICLICI SIERICI e/o PLASMATICI in UV Codice Z ( Nordoxepina, Desipramina ed Imipramina ) INTRODUZIONE Gli Antidepressivi Triciclici (TCA) hanno soppiantato quasi del tutto gli Antidepressivi inibitori delle monoammino ossidasi (IMAO). L efficacia di questi farmaci è stata ampiamente dimostrata da una serie di studi clinici effettuati negli ultimi anni. Alcuni TCA come l Amitriptilina e la Doxepina possiedono una maggiore attività sedativa rpetto ad altri TCA, infatti vengono impiegati negli epodi depressivi con una forte componente ansiosa e/o insonnia. I TCA vengono usati nella terapia della depressione, a fronte di questi sintomi: dinteresse, stanchezza, sensi di colpa, insonnia, perdita dell appetito, idee di suicidio. Il sovradosaggio di TCA può dare un intossicazione acuta, che va valutata sulla base della quantità di farmaco assunta e dei livelli plasmatici di principio attivo. L ingestione di alte dosi di TCA provoca una sintomatologia da intossicazione acuta e può essere mortale. L intossicazione acuta da TCA interessa in particolare il cuore ed il stema nervoso centrale, i sintomi tipici sono: dilatazione pupillare, stato confusionale, dartria e convulsioni, parali respiratoria ed intestinale, gravi aritmie cardiache, coma. Le interazioni dei TCA con altri psicofarmaci sono molto pericolose. In particolare, l interazione fra TCA ed antidepressivi IMAO deve essere evitata per l insorgere di convulsioni, ipertensione arteriosa, collassi cardio-circolatori, morte improvva. Anche l associazione di TCA con antiparkinsoniani, anttaminici, alcuni antpastici, deve essere evitata. I TCA aumentano inoltre l effetto sedativo di molte sostanze che deprimono il stema nervoso centrale: alcol, barbiturici, benzodiazepine e altre ancora. I TCA possono anche potenziare gli effetti delle amfetamine e di farmaci amfetamino-simili. Sono stati riportati casi di cri ipertensiva ed emorragie cerebrali talvolta fatali nei casi di tali interazioni farmacologiche. EUREKA srl LAB DIVISION VAT N info@eurekaone.com Head Quarter: Via Enrico Fermi Chiaravalle (AN) ITALY Tel. + Fax + Release N Antidepressivi triciclici sierici e/o plasmatici in UV Marzo
2 CARATTERISTICHE DEL METODO Principio del Metodo: Gli Antidepressivi triciclici vengono olati purificando il siero/plasma con una colonna clean-up. Dopo l aggiunta di uno stabilizzante l'estratto viene direttamente iniettato in HPLC. Recupero del Metodo : % Sensibilità del Metodo : Range dinamico del metodo : Range terapeutico nel siero : Contenuto della confezione : µg/l - µg/l Nordoxepina : µg/l Desipramina : µg/l Imipramina : µg/l Tutti i reagenti sono pronti all'uso e stabili anni a C. I Calibratori sono stabili mesi a - C. Reagente A Soluzione Diluente, x ml Reagente B Soluzione di Condizionamento, x ml Reagente C Soluzione di Condizionamento, x ml Reagente D Soluzione di Lavaggio, x ml Reagente E Soluzione di Lavaggio, x ml Reagente F Soluzione Eluente, x ml Reagente G Soluzione Standard Interno Amitriptilina, x ml Vedi Avvertenze Reagente H Soluzione Test, x ml Reagente P Calibratore plasmatico liofilo Nordoxepina, x ml Reagente Q Calibratore plasmatico liofilo Desipramina ed Imipramina, x ml Vedi Avvertenze Vedi Avvertenze Colonne clean-up, Pz Reagente M Fase Mobile, x ml Dotazione strumentale minima richiesta : Strumento HPLC ocratico con loop da µl Detector spettrofotometrico UV/VIS λ= nm Regtratore di cromatogrammi Dotazione opzionale : Autocampionatore Computer gestionale Modalità per il prelievo ematico : Prelevare ml di sangue venoso in una provetta senza gel o con EDTA come anticoagulante. Centrifugare a rpm per minuti. Separare il siero e stoccarlo a C. Stabile settimane.
3 PROCEDURA PREANALITICA Preparazione della Soluzione Test a circa µg/l. In una provetta pipettare : µl di Acqua grado HPLC µl di Metanolo µl di Reagente H Sol. Test µl di Reagente G Sol. Standard Interno INIEZIONE : Iniettare µl della soluzione nel cromatografo HPLC ed attendere la stampa del cromatogramma. Verificare che la Sol. Test abbia tempi di ritenzione simili a quelli riportati in fig.. Se il Test ha dato esito positivo si può procedere alla seduta analitica. Se così non fosse verificare la funzionalità del stema analitico. Importante : Questa Soluzione così ottenuta non deve essere usata come calibratore PROCEDURA ANALITICA FASE : Preparazione dei Campioni, del Calibratore e dei Controlli Dpensare in provetta : Bianco Campione Calibratore Acqua di grado HPLC µl Campione µl Reagente P o Reagente Q Calibratore µl Reagente A Sol. Diluente µl µl µl Reagente G Sol. Standard Interno µl µl µl Agitare al vortex per secondi FASE : Condizionamento delle colonne Clean-up. Preparare un numero di colonne Clean-up pari al numero dei campioni da analizzare più lo Standard di Calibrazione e gli eventuali Controlli. Versare in colonna ml di Reagente B Sol. di Condizionamento Non portare a secco! Versare in colonna ml di Reagente C Sol. di Condizionamento Non portare a secco! FASE : Caricamento del Campione Versare, ml di campione precedentemente preparato nelle colonne Clean-up e lasciar percolare tutto il liquido di ogni colonna Clean-up, anche con l ausilio di un vuoto moderato, alla velocità di circa ml/minuto ( goccia a goccia ). FASE : Lavaggio Lavare con ml di Reagente D Sol. di Lavaggio Portare a secco anche con l ausilio di un vuoto moderato. Scartare l eluato Lavare con, ml di Reagente E Sol. di Lavaggio Portare a secco anche con l ausilio di un vuoto moderato. Scartare l eluato Release N Antidepressivi triciclici sierici e/o plasmatici in UV Marzo
4 FASE : Eluizione Eluire con, ml di Reagente F Sol. Eluente Portare a secco anche con l ausilio di un vuoto moderato Diluire l eluato con, ml di HO Al vortex per secondi INIEZIONE : N.B.: il campione così preparato è stabile giorno a - C Iniettare µl della soluzione nel Cromatografo e attendere la stampa del cromatogramma. Release N Antidepressivi triciclici sierici e/o plasmatici in UV Marzo
5 ANTIDEPRESSIVI TRICICLICI - Avvertenze REAGENTE G : SOLUZIONE STANDARD INTERNO AMITRIPTILINA L assunzione di Amitriptilina, contemporanea agli analiti TAD, determina una errata determinazione quantitativa. REAGENTE H : SOLUZIONE TEST ANTIDEPRESSIVI TRICICLICI : Nordoxepina Desipramina Imipramina, mg/l, mg/l, mg/l REAGENTE P : CALIBRATORE PLASMATICO LIOFILO - Lot.N (Nordoxepina) ANTIDEPRESSIVI TRICICLICI : Nordoxepina Modalità d uso e Ricostituzione: i Calibratori devono essere usati per calibrare il stema HPLC. Aggiungere esattamente ml di H O grado HPLC e agitare delicatamente per minuti fino a quando tutto il materiale non è dsolto. Conservazione e stabilità : i Calibratori liofili sono stabili mesi dalla data di preparazione se conservati a C. Almeno giorni se conservati a C una volta ricostituiti. Non usarli dopo la data di scadenza. Confezionamento : x ml Precauzioni : questo calibratore in matrice umana deve essere trattato con cura e considerato come potenzialmente infettivo. µg/l REAGENTE Q : CALIBRATORE PLASMATICO LIOFILO - Lot.N (Desipramina,Imipramina) ANTIDEPRESSIVI TRICICLICI : Desipramina Imipramina Modalità d uso e Ricostituzione: i Calibratori devono essere usati per calibrare il stema HPLC. Aggiungere esattamente ml di H O grado HPLC e agitare delicatamente per minuti fino a quando tutto il materiale non è dsolto. Conservazione e stabilità : i Calibratori liofili sono stabili mesi dalla data di preparazione se conservati a C. Almeno giorni se conservati a C una volta ricostituiti. Non usarli dopo la data di scadenza. Confezionamento : x ml Precauzioni : questo calibratore in matrice umana deve essere trattato con cura e considerato come potenzialmente infettivo. µg/l µg/l PARAMETRI DEL DETECTOR SPETTROFOTOMETRICO λ GAIN TEMPO DI INTEGRAZIONE nm, AUFS secondi PROTEZIONE DELLA COLONNA ANALITICA Per salvaguardare la colonna analitica Synergi MAX RP, x mm, µ, è tassativo l uso del Metaguard - Guard Column ( x pz), cod. ZAMG e del Metasaver Precolumn Filter. um ( x pz.) cod. ZA.
6 CONDIZIONAMENTO DELLA COLONNA Installare la colonna analitica nuova Synergi MAX RP, x mm, µ. Dconnettere il detector e far passare ml di una soluzione di H O : Metanolo ( : v/v ) e successivamente ml di H O per HPLC, al flusso di, ml/minuto. Non riciclare i liquidi di lavaggio. Filtrare la fase mobile con pompa da vuoto e filtro idoneo da, µ o, µ. Condizionare la colonna con la fase mobile al flusso di, ml/minuto e scaricare i primi ml. Condizionare ulteriormente per minuti anche a ricircolo di fase. Al termine, iniettare il test chimico e verificare la congruità della separazione. NON è consigliato effettuare anali a ricircolo di fase. Se la T Amb del Laboratorio è > C si consiglia di conservare a - C la Fase Mobile fra una seduta analitica e l altra. PULIZIA DELLA COLONNA PARAMETRI HPLC Dconnettere il detector. Flussare ml di H O e scaricare. Flussare una soluzione di H O : Metanolo o Acetonitrile ( : v/v ) per minuti scaricandola. Quando la colonna verrà usata di nuovo far passare ml di H O prima di condizionarla con la Fase Mobile. LOOP µl Flusso di lavoro consigliato, ml/minuto Pressione corrpondente Circa bar PARAMETRI INTEGRATORE HP / / ATTENUAZIONE PARAMETRI COMPUTER GESTIONALE SECONDO LE SPECIFICHE DEL SOFTWARE GESTIONALE ACCESSORI E CONSUMABILI CODICE DESCRIZIONE CONFEZIONE Z Calibratore per Antidepressivi Triciclici (Imipramina, Desipramina) x ml Z Calibratore per Antidepressivi Triciclici (Doxepina, Nordoxepina) x ml Z Controllo per Antidepressivi Triciclici (Imipramina, Desipramina)-Livello x ml Z Controllo per Antidepressivi Triciclici (Doxepina, Nordoxepina) x ml ZPHFEO Colonna Analitica Synergi Max-RP ( x,mm - um) PZ ZAMG Metaguard Guard Column x PZ ZA Metasaver Precolumn Filter. um x PZ S Vial standard di vetro da ml con tappo a vite x PZ
7 ANTIDEPRESSIVI TRICICLICI SIERICI e/o PLASMATICI ( Cromatogrammi di Riferimento ).DATA.DATA desipramina imipramina nordoxepin RT [min] RT [min] Fig. Calibratore plasmatico liofilo Fig. Calibratore plasmatico liofilo R.T.. Desipramina ng/ml R.T.. Nordoxepina ng/ml R.T.. Imipramina ng/ml R.T.. Standard interno Amitriptilina R.T.. Standard interno Amitriptilina
8 ANTIDEPRESSIVI TRICICLICI SIERICI e/o PLASMATICI ( Cromatogrammi di Riferimento ).DATA.DATA desipramina imipramina nordoxepin RT [min] RT [min] Fig. Controllo plasmatico liofilo Fig. Controllo plasmatico liofilo R.T.. Desipramina ng/ml R.T.. Nordoxepina ng/ml R.T.. Imipramina ng/ml R.T.. Standard interno Amitriptilina R.T.. Standard interno Amitriptilina
9 ANTIDEPRESSIVI TRICICLICI SIERICI e/o PLASMATICI ( Cromatogrammi di Riferimento ) -.DATA -.DATA nordoxepin desipramina imipramina nordoxepin desipramina imipramina RT[min] RT[min] Fig. Campione arricchito alto Fig. Campione arricchito basso R.T.. Nordoxepina ng/ml R.T.. Nordoxepina ng/ml R.T.. Desipramina ng/ml R.T.. Desipramina ng/ml R.T.. Imipramina ng/ml R.T.. Imipramina ng/ml R.T.. Standard interno Amitriptilina R.T.. Standard interno Amitriptilina
ANTIDEPRESSIVI TRICICLICI 2 SIERICI e/o PLASMATICI in UV Codice Z57010 (Doxepina, Amitriptilina e Nortriptilina )
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