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- Graziano Salvi
- 8 anni fa
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1 Autoimmunità Anticorpi antinucleo ANA ENA Lupus Eritematoso Sistemico (LES), Sindrome di Sjögren, Polimiosite Dermatomiosite, Sclerosi sistemica, Sindrome antifosfolipidi, Artrite reumatoide, Sindrome di CREST, Tiroidite di Hashimoto, Connettiviti. Il sistema immunitario ha la funzione di proteggere il nostro organismo dalle infezioni mediante il riconoscimento dei microrganismi, l impedimento della loro crescita e l eliminazione delle cellule senescenti e delle macromolecole. Le macromolecole, di cui i vari organismi sono costituiti, hanno struttura e configurazione proprie della specie biologica cui appartengono. Le differenze fra specie e specie dipendono, oltre che dalla composizione delle molecole elementari (per es., la sequenza degli amminoacidi in una proteina), anche dalla forma che in una determinata specie la macromolecola assume e dalla posizione che in essa occupano i vari gruppi chimici che la costituiscono, in special modo quelli situati alla superficie della molecola. Questi sistemi di difesa sono in grado di fornire uno stato di immunità contro le infezioni e i loro meccanismi e costituiscono le basi del campo di studio definito immunologia. Per adempiere a questi compiti, il sistema immunitario deve innanzitutto distinguere le molecole self e nonself, quello che appartiene cioè a casa propria e quello che ne è estraneo. Questa capacità si chiama tolleranza immunitaria, condizione propria dell organismo che è incapace di sviluppare una reazione immunitaria nei confronti di alcune sostanze dotate di potere antigene. Normalmente ogni individuo è tollerante nei confronti dei propri tessuti, ma può esserlo anche verso eventuali sostanze che vengano a contatto con il suo sistema immunitario quando questo è ancora immaturo, cioè durante la vita fetale, fin poco dopo la nascita. La tolleranza immunologica consiste nell incapacità da parte dell organismo di reagire verso determinati stimoli antigenici per un inibizione specifica del sistema immunitario che avviene con meccanismi cosiddetti centrali e periferici di elevata complessità. 1
2 Le alterazioni dei meccanismi di controllo della tolleranza immunologica possono determinare le reazioni autoimmuni verso le molecole self e quindi dar luogo a malattie autoimmuni. Le malattie autoimmuni sono classificate in organo e non organo specifiche in base al tipo di autoanticorpo coinvolto nella malattia. in realtà esiste anche un terzo tipo di malattia autoimmune che è definita intermedia, poichè gli autoanticorpi coinvolti sono non organo specifici (contro antigeni nucleari, mitocondri, gammaglobuline), tuttavia sono presenti infiltrati linfocitari limitati ad un solo organo o apparato (parotide, fegato, colon). Di seguito le tabelle riassuntive relative ai bersagli antigenici specifici e malattie autoimmuni associate. Malattie Organo specifiche Stomaco: Anti fattore intrinseco! Anemia perniciosa; Anticellule parietali gastriche! Gastrite atrofica tipo A Legenda: Organo: anticorpi coinvolti! malattia Pancreas: Anti insula pancreatica (ICA), Anti decarbossilasi dell acido glutammico 65 (Gad 65), Anti tirosina fosfatasi (IA2) Anti insulina (IAA)! Diabete Mellito tipo I Surrene: Anticorticosurrenale, Anti21 idrossilasi! Malattia di Addison Ovaio: Antiovaio! Menopausa precoce Tiroide: Antirecettori del TSH( TRAB)! Malattia di Basedow; Antitireoperossidasi (TPO) Antitireoglobulina! Tiroidite Hashimoto, Mixedema primitivo Rene, Polmone: Anti membrana basale del glomerulo (GBM)! Sindrome di Goodpasture Giunzione neuromuscolare: Antirecettori dell acetilcolina (Ach); Anti Proteina ChinasicaSpecifica (MuSK), Anti muscolo striato! Miastenia Gravis Anti canali del calcio! Sindrome miastenica di LambertEaton 2
3 - Malattie non organo specifiche Antinucleo; Anti Dna nativo, Antinucleosoma, AntiSm, antissa/ro Anti Ribosoma! Lupus Eritematoso Sistemico (LES) Antinucleo; Anti SSA/Ro, anti SSb/La! Sindrome di Sjögren Antinucleo;Anti RNP! Malattia mista del tessuto connettivo (MCTD) Antinucleo; AntiJo1; AntiPm-Scl, Antiaminoacil trna sintetasi (PL12, PL7, EJ, OJ, KS) AntiMi2; AntiSRP,! Polimiosite Dermatomiosite Antinucleo;Anti Scl70! Sclerosi Sistemica Anti centromero! Sindrome di CREST Esofagodattilia, Sclerodattilia, Telangectasia) (Calcinosi, Fenomeno di Raynaud, Anti cardiolipina, LAC, AntiBeta2 glicoproteina I! Antifosfolipidi Anti citrullina, Fattore reumatoide! Artrite reumatoide Diagnostica - Linee Guida Il metodo di riferimento per la ricerca degli autoanticorpi anti nucleo è l immunofluorescenza indiretta su cellule Hep2 (cellule epiteliali da carcinoma di laringe). Con questa metodica è possibile rilevare la presenza di autoanticorpi che riconoscano antigeni nucleari e citoplasmatici senza identificarli in modo specifico: quindi, in caso di positività per gli autoanticorpi anti nucleo è consigliata la ricerca specifica degli antigeni nucleari estraibili (ENA screen) ed ENA profilo come conferma. l siero in esame viene dispensato su questo substrato ed incubato per la ricerca degli eventuali autoanticorpi presenti. Per l identificazione anticorpale e la visione mediante microscopia a fluorescenza si utilizza un coniugato associato ad un fluoroforo FITC specifico. Questa metodica è caratterizzata da un elevata sensibilità perché permette di rilevare autoanticorpi contro tutti gli antigeni nucleari e citoplasmatici, ma ha una scarsa specificità 3
4 poiché non riesce ad individuare in modo specifico l antigene. Per l identificazione degli antigeni nucleari e citoplasmatici specifici (ENA) è necessario procedere all approfondimento diagnostico con Ena profilo cioè il dosaggio degli antigeni: Ssa, SSb, Sm, Sm/RNP, Jo1, Scl70, CENP La metodica in immunofluorescenza presenta dunque delle limitazioni determinate da: perdita di alcuni antigeni critici (Ssa, SSb, Jo1, Ribosoma P, RNP) legato alla metodica stessa o per difficoltà interpretative difficoltà di riproducibilità dei dati legato alla lettura soggettiva a microscopio e alla metodica tempistica di refertazione bassa specificità Le nuove tecnologie: il Multiplex Luminex La disponibilità di nuove tecnologie ci ha permesso di valutare metodiche alternative all immunofluorescenza indiretta: in particolare Synlab di cui siamo partner in queste ricerche ha analizzato 1205 sieri richiesti in routine per la ricerca degli autoanticorpi antinucelo con la metodica in immunofluorescenza indiretta e con la tecnologia Multiplex Luminex, mediante la strumentazione automatica Bioplex 2200 validando la metodica ora inserita per lo screening degli autoanticorpi anti nucleo. Questa tecnologia consente l identificazione di diversi analiti contemporaneamente sullo stesso campione, utilizzando beads (microsfere) magnetiche con adesi gli antigeni nucleari e citoplasmatici. Il siero viene incubato con la miscela delle beads e dopo l aggiunta di un anticorpo anti IgG umano legato ad un secondo fluoroforo specifico, le beads passano attraverso un citometro a flusso che identifica e quantifica il segnale. Il sistema prevede inoltre l utilizzo di 3 beads specifiche per la verifica del funzionamento del sistema di lettura, delle interferenze causate da legami aspecifici, della presenza del volume di campione necessario per l esecuzione del test. Le caratteristiche principali del test ANA screen, in confronto alla metodica in immunofluorescenza indiretta, sono rappresentate dalla possibilità di rilevare gli autoanticorpi contro antigeni critici non rilevabili con la metodica in immunofluorescenza indiretta, dalla standardizzazione e riproducibilità dei dati, in particolare per i campioni con esiti di dubbia o bassa positività, e dalla riduzione delle tempistiche di refertazione. 4
5 I vantaggi del Bioplex 2200 Identificazione di autoanticorpi contro gli antigeni critici per la metodica immunofluorescenza indiretta (IFI) quali: Ssa/Ro con la possibilità di distinguere e dosare SSA 52 kd e 60 kd, Jo1, P Ribosoma, U1 snrnp distinto nelle frazioni A e 68 kd associati alle Malattie del Tessuto Connettivo Miste (MCTD); standardizzazione e riproducibilità dei dati; riduzione delle tempistiche di refertazione. Il nuovo test ANA screen prevede la ricerca degli autoanticorpi contro gli antigeni dsdna, Cromatina (nucleosoma), P-ribosoma, SSA, SSB, Sm, snrnp, Sm/RNP, Scl70, Jo1, centromero CENP-B per le malattie autoimmuni non organo specifiche, connettiviti autoimmuni: Lupus Eritematoso Sistemico (LES), Malattie del Tessuto Connettivo Miste (MCTD), Polimiositi/Dermatomiositi (PM/DM), Artrite Reumatoide (AR), Sclerosi Sistemica cutanea (SSc), Sindrome di Sjögren (SS), Sclerodermia, CREST (Calcinosi, fenomeno di Raynaud, disfunzione esofagea, sclerodattilia e telangectasia). Di seguito alleghiamo i Pannelli che vengono consigliati per la diagnosi delle diverse malattie autoimmuni. Per saperne di più e per la bibliografia essenziale vai a: -_Connettiviti_Autoimmuni.pdf 5
6 PANNELLO CONNETTIVITI DNA nativo Abs Cromatina (nucleosomi) Abs ENA antigene Sm Abs ENA antigene Sm/Rnp Abs ENA antigene Scl 70 Abs ENA antigene Jo 1 Abs ENA antigene Ssa (Ro) Abs ENA antigene (Ro) 52 kd Abs ENA antigene (Ro) 60 kd Abs ENA antigene Ssb Abs RNP Abs RNP A Abs RNP 68 kd Abs Centromero Cenp-B Abs P-Ribosoma PANNELLO EPATOPATIE AUTOIMMUNI M2 Negativo gp 210 Negativo sp 100 Negativo LKM1 Negativo LC1 Negativo SLA Negativo F-Actina Negativo PANNELLO LES (Lupus Eritematoso Sistemico) DNA nativo Abs Cromatina (nucleosomi) Abs ENA antigene Sm Abs ENA antigene Sm/Rnp Abs ENA antigene Ssa (Ro) Abs ENA antigene (Ro) 52 kd Abs ENA antigene (Ro) 60 kd Abs ENA antigene Ssb Abs P-Ribosoma PANNELLO MCTD (Malattie del Tessuto Connettivo Miste) ENA antigene Sm/Rnp Abs RNP Abs RNP A Abs RNP 68 kd Abs 6
7 PANNELLO POLIMIOSITI/DERMATOMIOSITI Jo-1 Negativo PL-7 Negativo PL-12 Negativo SRP Negativo Mi-2 Negativo Ku Negativo PM-Scl 100 Negativo PM-Scl 75 Negativo Oj Negativo Ej Negativo Ro-52 Negativo PANNELLO SCLERODERMIA/SCLEROSI SISTEMICA ENA antigene Scl 70 Abs Centromero Cenp-B Abs PANNELLO SS (Sindrome di Sjögren) ENA antigene Ssa (Ro) Abs ENA antigene (Ro) 52 kd Abs ENA antigene (Ro) 60 kd Abs ENA antigene Ssb Abs PANNELLO VASK (Vasculiti Autoimmuni) Anti-Proteinasi 3 (PR3) Abs AI Anti-Mieloperossidasi (MPO) Abs Anti-Membrana basale del glomerulo (GBM) Abs 7
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