TGS TA Rubella IgG Avidity

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1 REF YB TGS TA Rubella IgG Avidity ISTRUZIONI PER L USO IT Italiano FINALITA D USO Il test TGS TA Rubella IgG Avidity è un test immunologico chemiluminescente (CLIA) per la determinazione, con strumentazione TGS TA Analyser o IDS-iSYS Multi-Discipline Automated System, dell indice di avidità delle IgG anti Rubella in campioni di siero e plasma (EDTA o Sodio Citrato). La possibilità di distinguere gli anticorpi ad alta avidità da quelli a bassa avidità consente di avere informazioni cliniche differenti. Questo dosaggio viene impiegato come ausilio diagnostico nella valutazione dello stato immunitario del paziente nell infezione da Rubella virus. Questo prodotto deve essere utilizzato in stretta osservanza alle istruzioni riportate nel presente documento da utilizzatori professionali. ATTENZIONE: Qualunque decisione medica non può essere basata sul risultato di questo solo test, ma va fondata sulla valutazione dell insieme di tutti i dati clinici e di laboratorio disponibili. SIGNIFICATO CLINICO La rosolia è una malattia esantematica, moderatamente contagiosa, causata dal virus Rubella, che è il solo appartenente al genere Rubivirus della famiglia dei Togaviridae virus. Il virus è in grado di infettare solo gli esseri umani e non gli altri esseri viventi e comprende una sola specie 1. La rosolia, chiamata febbre esantemica dei 3 giorni, è la terza delle sei forme esantematiche che colpisce gli individui soprattutto in età puerile 2. La rosolia viene contratta tramite contatto interumano ( es. starnuti, saliva ) e presenta un incubazione di 2-3 settimane. La malattia è spesso lieve e molti pazienti sono asintomatici. I sintomi primari dell infezione risultano essere : comparsa dell esantema sul viso che in seguito si propaga al tronco ed agli arti inferiori e di solito tende a scomparire dopo tre giorni, moderato rialzo febbrile, rigonfiamento ghiandolare, dolori articolari, cefalea e lacrimazione 3. Le forme più severe dell infezione si verificano quando la donna in gravidanza contrae l infezione nel primo trimestre. L infezione può essere trasmessa dalla madre al feto attraverso la placenta e causare la sindrome della rosolia congenita, che provoca aborto, nascita prematura o morte alla nascita. Se il feto sopravvive alla rosolia congenita, seri difetti possono insorgere quali cecità, sordità, e problemi agli organi interni 3,4. La rosolia, sebbene rara nei paesi industrializzati dove è presente la vaccinazione, può ancora essere un problema quando la vaccinazione non risulta idonea e soprattutto nei paesi in via di sviluppo dove non è IFU051TGS TA Versione: 01_IT 2 ottobre 2014 Pagina 1 di 14

2 ancora presente un programma di vaccinazione. L organismo mondiale della sanità (WHO) ha incoraggiato tutti i paesi del mondo ad intraprendere una valutazione dello stato immunitario dei propri cittadini e quindi introdurre un piano di immunizzazione e sorveglianza, se necessario 5. Una diagnosi clinica d infezione da Rubella virus sulla base dei sintomi non è affidabile, poichè tale infezione risulta asintomatica nel 50 % di pazienti infetti. Inoltre l esantema provocato dal virus ed i relativi sintomi che si accompagnano sono molto simili ad altre infezioni virali e pertanto è impossibile per il medico confermare l infezione da Rubella con la sola ispezione dell esantema. In conseguenza di ciò i test sierologici si rendono necessari per una sicura diagnosi, soprattutto se la paziente è una donna in gravidanza 6. I test sierologici sono quindi molto utili sia per valutare se una persona sia stata infettata nel passato e abbia quindi acquisito un immunità naturale, oppure per valutare l efficacia di una vaccinazione o per diagnosticare un infezione primaria o come può succedere, seppur in casi rari, una reinfezione. Un infezione primaria è sempre associata ad una presenza di elevate concentrazioni di IgM in risposta al virus 7 ; le IgM sono rilevabili subito dopo il periodo d incubazione del virus è di solito scompaiono dopo 8 settimane 8, sebbene in casi rari possano persistere per un anno ed oltre, dopo l infezione naturale o la vaccinazione ed anche reinfezioni asintomatiche 9,10. Le IgG compaiono immediatamente dopo le IgM e nella fase attiva dell infezione mostrano una cinetica di incremento in concentrazione elevata 8 e persistono per tutta la vita 11. In aggiunta ai tests per IgM ed IgG la determinazione dell avidità delle IgG si è dimostrata molto utile per distinguere l infezione primaria da quella pregressa 12, per escludere o confermare sospette infezioni in donne in gravidanza 13 ed una infezione congenita 14. PRINCIPIO DEL METODO Il kit TGS TA Rubella IgG Avidity per la determinazione delll indice dell avidità delle IgG specifiche anti Rubella utilizza un metodo immunologico indiretto a due step basato sul principio della chemiluminescenza. Il test può essere eseguito solo su campioni preventivamente dosati per verificare la presenza di IgG anti Rubella. L antigene specifico è utilizzato per rivestire le particelle magnetiche (fase solida) ed un anticorpo anti-igg umane è marcato con un derivato dell estere di acridinio (coniugato). Ogni campione è testato in due cuvette diverse: una (a) di riferimento e una seconda (b) con tampone in grado dissociare il legame Antigene (Ag)-Anticorpo (Ab) qualora l avidità dell Anticorpo IgG per Rubella sia bassa. Durante la prima incubazione gli anticorpi specifici presenti nel campione, nei calibratori o nei controlli si legano alla fase solida. Nella seconda cuvetta (b), al termine della prima incubazione, una seconda incubazione è eseguita con un tampone in grado di dissociare il legame fra l Ag delle particelle magnetiche e gli Anticorpi IgG del campione qualora siano presenti prevalentemente Ab a bassa avidità. Durante l ultima incubazione il coniugato reagisce con gli anticorpi anti Rubella IgG sequestrati dalla fase solida. Dopo ciascuna incubazione il materiale non legato alla fase solida è rimosso mediante aspirazione e susseguente lavaggio. IFU051TGS TA Versione: 01_IT 2 ottobre 2014 Pagina 2 di 14

3 La quantità di coniugato marcato rimasto legato alla fase solida viene valutata mediante attivazione della reazione di chemiluminescenza e misura del segnale luminoso. Il segnale generato, espresso in unità relative di luce (RLU, Relative Light Unit), è indicativo della concentrazione degli anticorpi specifici presenti nel campione, nei calibratori e nei controlli. Il rapporto fra la concentrazione degli anticorpi della seconda cuvetta (b) (campione trattato IgG residue) e la concentrazione degli anticorpi della cuvetta di riferimento (a) (campione non trattato IgG totali) fornisce l indice che esprime l avidità degli anticorpi IgG anti Rubella presenti nel campione. AUTOMAZIONE Lo strumento TGS TA Analyser esegue in automatico tutte le operazioni previste dal protocollo di dosaggio: aggiunta nel contenitore di reazione dei campioni, calibratori, controlli, particelle magnetiche, coniugato e soluzioni di attivazione della chemiluminescenza; separazione magnetica e lavaggio delle particelle; misura della luce emessa. Il sistema calcola i risultati del dosaggio per i campioni ed i controlli mediante curva di calibrazione memorizzata, elabora l indice di Avidità e stampa un rapporto che include tutte le informazioni relative al dosaggio ed al paziente. MATERIALI E REAGENTI Materiali e reagenti forniti REAG 1 MP 2,5 ml Particelle magnetiche rivestite con antigene della Rosolia inattivato (ceppo HPV 77) in Tampone Fosfato contenente proteine stabilizzanti, Pro-Clin 300 e sodio azide (< 0.1 %) come conservanti. REAG 2 CONJ 25 ml Anticorpo monoclonale di topo anti-igg umane marcato con un derivato dell estere di acridinio (coniugato), in Tampone Fosfato contenente proteine stabilizzanti e sodio azide (< 0.1 %) come conservante. REAG 3 DIL 25 ml Soluzione Diluente Campioni: Tampone Fosfato contenente sieroalbumina bovina, un tensioattivo, un colorante blu inerte, Pro-Clin 300 e Gentamicina SO 4 come conservanti. REAG 4 BUF AV 15 ml Soluzione Tampone : Tampone Borato contenente un agente dissociante e Sodio Azide come conservante. IFU051TGS TA Versione: 01_IT 2 ottobre 2014 Pagina 3 di 14

4 REAG 5 CAL A 1,6 ml Siero umano con bassa concentrazione di anticorpi anti-rubella IgG in Tampone Fosfato contenente sieroalbumina bovina, un tensioattivo, un colorante blu inerte, Pro-Clin 300 e Gentamicina SO 4 come conservanti. REAG 6 CAL B 1,6 ml Siero umano con elevata concentrazione di anticorpi anti-rubella IgG in Tampone Fosfato contenente sieroalbumina bovina, un tensioattivo, un colorante blu inerte, Pro-Clin 300 e Gentamicina SO 4 come conservanti. Tutti i reagenti sono pronti per l uso. I reagenti 1, 2, 3 e 4 sono assemblati in un unico insieme che costituisce la cartuccia reagenti. Le concentrazioni dei Calibratori sono espresse in IU/mL (Unità Internazionali) e tarate contro WHO 1st IS RUBI-1-94, I valori delle concentrazioni, specifici per lotto di prodotto, sono registrati nel DATA DISK inserito nel kit. DATA DISK Mini-DVD contenente le informazioni riguardanti tutti i prodotti della Linea TGS TA (Reagenti, Calibratori, Sieri di controllo) aggiornati all ultimo lotto produttivo con l esclusione dei prodotti scaduti alla data di compilazione del nuovo DATA DISK. E sufficiente conservare il DATA DISK con il numero di lotto più elevato per mantenere aggiornate le informazioni richieste per il corretto funzionamento del sistema. Materiali e reagenti richiesti ma non forniti nel kit - TGS TA Analyzer 120 (1) Cod. No. TGS IDS-iSYS Cuvette Cube (1) Cod. No. IS-CC1000 Confezione da 960 cuvette. - IDS-iSYS System Liquid (2) Cod. No. IS-CS bottiglia da 5 litri di soluzione, pronta all uso. - IDS-iSYS Wash Solution (2) Cod. No. IS-CW bottiglia da 10 litri di soluzione, pronta all uso. - IDS-iSYS Trigger Set (2) Cod. No. IS-CT flacone da 250 ml di Trigger A (soluzione di preattivazione) 1 flacone da 250 ml di Trigger B (soluzione di attivazione) IFU051TGS TA Versione: 01_IT 2 ottobre 2014 Pagina 4 di 14

5 - TGS TA D-SORB Solution Cod. No. YC Confezione da 2 bottiglie da 1 litro di soluzione pronta per l uso. - IDS-iSYS Cartridge Checking System (2) Cod. No. IS TGS TA ImmunoCleaner Cod. No. YC flaconi da 27 ml ciascuno - TGS TA Top Cap Set Cod. No. YC tappi superiori rossi per la chiusura dei contenitori dei calibratori dopo il primo utilizzo. (1) Fabbricati da IDS France SAS, 42 rue Stéphane Mazeau, Pouilly en Auxois, France e distribuiti da Technogenetics Srl. (2) Fabbricati da IDS SA, rue Ernest Solvay, 4000 Liège, Belgique e distribuiti da Technogenetics Srl. Altri Reagenti Raccomandati TGS TA Rubella AVIDITY Control Set Cod. No. YB fiale da 1,0 ml di siero umano con anticorpi a bassa-media avidità e 3 fiale da 1,0 ml di siero con anticorpi ad alta avidità anti-rubella IgG. AVVERTENZE E PRECAUZIONI I reagenti forniti nel kit TGS TA Rubella IgG Avidity sono solo per uso diagnostico in vitro e non per uso in vivo in uomini o animali. Questo prodotto deve essere utilizzato in stretta osservanza alle istruzioni riportate nel presente documento da utilizzatori professionali. Technogenetics non può essere ritenuta responsabile di perdite o danni generati da un uso non conforme alle istruzioni fornite. Precauzioni di sicurezza Questo prodotto contiene materiale di origine animale e pertanto deve essere manipolato come se contenesse agenti infettanti. Questo prodotto contiene componenti di origine umana. Tutte le unità di siero o plasma utilizzate per la fabbricazione dei reagenti di questo kit sono state analizzate con metodi FDA approvati e trovate non reattive per la presenza di HBsAg, anti-hcv, anti-hiv1 ed anti-hiv2. Tuttavia, poiché nessun metodo di analisi è in grado di garantire l assenza di agenti patogeni, tutto il materiale di origine umana deve essere considerato potenzialmente infetto e manipolato come tale. IFU051TGS TA Versione: 01_IT 2 ottobre 2014 Pagina 5 di 14

6 In caso di imballaggio danneggiato con fuoriuscita dei reagenti provvedere alla decontaminazione dell area interessata con una soluzione diluita di Ipoclorito di Sodio dopo essersi protetti con idonei dispositivi di protezione individuale (camice, guanti, occhiali). Provvedere allo smaltimento del materiale utilizzato per la pulizia e dei rifiuti di imballaggio coinvolti nella fuoriuscita, in base alle norme nazionali per lo smaltimento dei rifiuti potenzialmente infetti. In caso di imballaggio danneggiato con fuoriuscita di liquido, i reagenti non devono essere utilizzati per l esecuzione dei dosaggi. Alcuni reagenti contengono sodio azide come conservante. Poiché la sodio azide può reagire con piombo, rame e ottone piombato formando azidi esplosive nelle tubature, si raccomanda di non eliminare reagenti o rifiuti negli scarichi ma di seguire le norme nazionali in materia di smaltimento rifiuti potenzialmente pericolosi. Precauzioni operative Per ottenere risultati affidabili è necessario attenersi strettamente alle presenti Istruzioni per l uso e seguire scrupolosamente quanto indicato nel manuale operativo dello strumento. I reagenti forniti nel kit devono essere utilizzati esclusivamente con il sistema TGS TA Analyzer. I componenti della cartuccia reagenti non possono essere rimossi dalla cartuccia e riassemblati. Non usare il kit oltre la data di scadenza. PREPARAZIONE DEI REAGENTI I reagenti forniti nel kit sono tutti pronti per l uso. CONSERVAZIONE E STABILITA DEI REAGENTI Conservare i reagenti forniti nel kit a 2-8 C in posizione verticale ed al buio. In queste condizioni la cartuccia reagenti ed i calibratori non aperti sono stabili sino alla data di scadenza. La cartuccia reagenti dopo apertura può essere utilizzata per 60 giorni se conservata in frigorifero a 2-8 C oppure a bordo macchina. I calibratori dopo apertura possono essere utilizzati per 60 giorni se conservati in frigorifero a 2-8 C e se la permanenza a bordo non supera le 6 ore per seduta. Non congelare i reagenti ed i calibratori. PREPARAZIONE E CONSERVAZIONE DEI CAMPIONI Il dosaggio deve essere eseguito su campioni umani di siero, plasma con EDTA o Sodio Citrato. Si sconsiglia l uso di campioni lipemici, emolizzati e torbidi. IFU051TGS TA Versione: 01_IT 2 ottobre 2014 Pagina 6 di 14

7 Se il dosaggio viene eseguito dopo più di 8 ore, separare il siero dal coagulo, dai globuli rossi e dalle provette di separazione con gel. Prima di essere analizzati i campioni possono essere conservati in frigorifero a 2-8 C per 7 giorni al massimo. Se il dosaggio viene eseguito dopo più di 7 giorni, conservare i campioni congelati (< - 20 C). Evitare congelamenti e scongelamenti ripetuti. PROCEDIMENTO OPERATIVO Per ottenere prestazioni analitiche affidabili attenersi scrupolosamente alle istruzioni riportate nel manuale operativo dello strumento. Caricamento dei reagenti Tutti i reagenti forniti nel kit sono pronti per l uso. Prima di inserire la cartuccia reagenti nel sistema, il contenitore delle particelle magnetiche deve essere agitato per rotazione orizzontalmente in modo da favorire la risospensione delle particelle. Eseguire l operazione evitando la formazione di schiuma. Posizionare la cartuccia reagenti nell area reagenti dello strumento utilizzando l apposita guida e lasciare in agitazione per almeno 1 ora prima dell uso. Il posizionamento della cartuccia reagenti determina contemporaneamente la lettura del codice a barre identificativo. In caso di danneggiamento dell etichetta della cartuccia o in caso di mancata lettura, i dati identificativi della cartuccia reagenti possono essere inseriti manualmente. Lo strumento mantiene automaticamente in agitazione continua le particelle magnetiche. Se la cartuccia reagenti viene rimossa dallo strumento, conservarla verticalmente al buio a 2-8 C. Caricamento dei calibratori I calibratori TGS TA sono pronti per l uso. Lasciare i calibratori a temperatura ambiente per 10 minuti ed agitare delicatamente il contenuto, manualmente o mediante vortex, evitando la formazione di schiuma. Nel caso i calibratori fossero utilizzati per la prima volta, eliminare il sigillo di garanzia ed il tappo bianco di chiusura prima del loro inserimento sullo strumento. Nel caso i calibratori fossero già stati utilizzati, il contenitore sarà provvisto del tappo superiore (tappo rosso) senza il sigillo di garanzia. Eliminare il tappo di chiusura rosso prima del loro inserimento sullo strumento. Inserire nello strumento i calibratori nell area campioni; per la loro identificazione sullo strumento consultare il manuale d uso dello strumento. I dati del bar code devono essere inseriti manualmente in caso di danneggiamento dell etichetta o in caso di mancata lettura. I valori della concentrazione degli anticorpi IgG anti-rubella presente nei calibratori sono registrati nel DATA DISK ed automaticamente trasferiti nell analizzatore. Al termine della seduta i contenitori dei calibratori devono essere chiusi con gli appositi tappi superiori (tappi rossi) e trasferiti a 2-8 C sino al loro successivo impiego. I calibratori possono essere utilizzati per un massimo di quattro volte. IFU051TGS TA Versione: 01_IT 2 ottobre 2014 Pagina 7 di 14

8 Caricamento dei controlli Inserire i controlli nell area campioni dello strumento. Per la loro identificazione sullo strumento consultare il manuale d uso dello strumento. In caso di mancanza del bar code sul controllo o in caso di mancata lettura, i dati identificativi del controllo possono essere inseriti manualmente. Qualora siano utilizzati i Controlli TGS TA, consultare le relative istruzioni d uso. I valori di Indice di Avidità degli anticorpi IgG anti-rubella presente nei controlli TGS TA sono registrati nel DATA DISK ed automaticamente trasferiti nell analizzatore. Selezionare per ogni controllo i parametri richiesti. Caricamento dei campioni Inserire i campioni nello strumento, nell area campioni; per la loro identificazione sullo strumento consultare il manuale d uso dello strumento. In caso di mancanza del bar code sul campione o in caso di mancata lettura, i dati identificativi del campione possono essere inseriti manualmente. Selezionare per ogni campione i parametri richiesti. Sulla base della concentrazione di Rubella IgG del campione, sono disponibili due protocolli selezionabili in fase di impostazione di parametro richiesto (analyte), secondo il presente schema: Rubella IgG concentrazione compresa fra 10 e 300 IU/mL Rubella Avidity IgG Rubella IgG concentrazione > 300 IU/mL Rubella Avidity IgG>300 Calibrazione Lo strumento TGS TA Analyzer utilizza una curva di calibrazione memorizzata (master curve), generata dal produttore per ogni lotto di cartuccia reagenti. I parametri delle master curve, unitamente ai valori delle concentrazioni dei calibratori, sono memorizzati nel DATA DISK e trasferiti nel database dello strumento. I calibratori A e B sono utilizzati per ricalibrare la master curve in funzione sia dello strumento utilizzato che dei reagenti a bordo. Per eseguire la ricalibrazione analizzare in triplicato i due calibratori A e B ed in singolo i controlli. I valori di concentrazione ottenuti con i controlli permettono di validare la nuova calibrazione. Una volta che la ricalibrazione della master curve sia stata accettata e memorizzata, tutti i campioni successivi possono essere analizzati senza ulteriore calibrazione, tranne nei seguenti casi: - quando è caricata a bordo dello strumento una cartuccia reagenti con un nuovo lotto; - quando i valori dei controlli non rientrano nell intervallo di accettabilità; - quando è eseguita la procedura di manutenzione dello strumento; - quando è scaduta la validità della master curve ricalibrata. La validità della master curve ricalibrata per il kit TGS TA Rubella IgG Avidity è di 21 giorni. La gestione della ricalibrazione è attuata in automatico dallo strumento. Dosaggio Premere il tasto di avvio. 1. Il sistema aspira 100 µl di Diluente Campioni, 20 µl di Particelle Magnetiche, 100 µl di Diluente Campioni e 10 µl di campione o controllo (per i calibratori il siero positivo è fornito prediluito con il IFU051TGS TA Versione: 01_IT 2 ottobre 2014 Pagina 8 di 14

9 Diluente Campioni ed il volume prelevato è di 110 µl). Le soluzioni e la sospensione aspirate sono dispensate nella cuvetta di reazione. 2. La cuvetta di reazione è incubata nel rotore a 37 C per 10 minuti. 3. Dopo questa fase di incubazione, le particelle magnetiche sono separate e lavate. a. Solo nella seconda cuvetta (b) di ogni campione vengono dispensati 200 µl del Buffer Avidity e la cuvetta è incubata nel rotore a 37 C per 10 minuti b. Dopo questa fase di incubazione, le particelle magnetiche sono separate e lavate. 4. Nella cuvetta vengono dispensati 200 µl di coniugato. 5. La cuvetta di reazione è incubata nel rotore a 37 C per 10 minuti. 6. Dopo questa ultima fase di incubazione, le particelle magnetiche sono separate e lavate e la cuvetta viene trasferita nella camera di lettura. 7. La quantità di coniugato legato alla fase solida, espressa in RLU, è direttamente proporzionale alla concentrazione di IgG anti-rubella presente nel campione. 8. Le risposte ottenute sono interpolate sulla curva di taratura e trasformate in concentrazioni e Indice di Avidità. CONTROLLO QUALITA Per assicurare la validità del dosaggio, sieri di controllo a differenti livelli di avidità (almeno un siero con avidità medio-bassa e uno con avidità alta) devono essere misurati ogni giorno in cui si esegue il dosaggio. Se il proprio laboratorio richiede, per la verifica dei risultati del dosaggio, un uso più frequente o un numero più elevato di controlli, seguire le procedure del controllo qualità ivi stabilite. Se vengono utilizzati i sieri di controllo TGS TA, i valori medi attesi ed i limiti di accettabilità sono quelli riportati nel DATA DISK presente anche nella confezione dei controlli. Qualora venissero utilizzati sieri di controllo diversi, è necessario, prima del loro impiego, definire i valori attesi con reagenti e sistema TGS TA. Qualora il valore dei controlli non rientri nel range di accettabilità specificato, i relativi risultati del dosaggio non sono validi ed i rispettivi campioni devono essere rianalizzati. In questo caso è necessario eseguire prima della ripetizione del dosaggio una procedura di ricalibrazione. CALCOLO ED INTERPRETAZIONE DEI RISULTATI Calcolo dei risultati La concentrazione degli anticorpi IgG anti-rubella presente nei campioni in esame è calcolata automaticamente dal sistema. I valori possono essere visualizzati mediante lettura sul video o attraverso stampa. Il calcolo della concentrazione di analita nel campione avviene attraverso lettura della risposta ottenuta per ogni campione su una curva di calibrazione elaborata mediante un sistema di fitting logistico a quattro IFU051TGS TA Versione: 01_IT 2 ottobre 2014 Pagina 9 di 14

10 parametri (4PL, Y ponderato), corretta periodicamente in funzione delle risposte ottenute nel dosaggio dei calibratori. I valori di avidità sono espressi in indice di avidità (Index) e calcolati direttamente dallo strumento. Per informazioni dettagliate su come il sistema calcola i risultati, consultare il manuale operativo del sistema. Interpretazione dei risultati I valori inferiori a 0.0 IU/mL sono valori estrapolati,compare il messaggio OMR- e/o ORA e sono riportati con valore uguale a 0.0 IU/mL. In questa situazione non è possibile ricavare l indice di Avidità. I valori superiori a 468 IU/mL hanno il messaggio OMR+ e/o ORA e possono essere ritestati dopo opportuna diluizione. L Avidità calcolata dallo strumento è espresso in Index. I risultati dei campioni possono essere interpretati nel seguente modo: (Index) Interpretazione < 0,20 Il campione è da considerare con IgG anti-rubella a bassa avidità 0,20-0,25 Il campione è da considerare con IgG anti-rubella a media avidità > 0,25 Il campione è da considerare con IgG anti-rubella ad alta avidità I valori sopra riportati sono da considerare solo valori suggeriti. Ciascun laboratorio deve stabilire i propri intervalli di riferimento. LIMITI DEL DOSAGGIO Per scopi diagnostici, i risultati ottenuti con il kit TGS TA Rubella IgG Avidity ed il sistema TGS TA Analyzer devono essere utilizzati unitamente agli altri dati clinici e di laboratorio a disposizione del medico. La contaminazione batterica dei campioni e l inattivazione al calore possono influenzare il risultato del dosaggio. Gli anticorpi eterofili presenti nei campioni di siero umano possono reagire con i reagenti a base di immunoglobuline, causando interferenze nei dosaggi immunologici in vitro. Questi campioni possono dar luogo a valori anomali se analizzati con il kit TGS TA Rubella IgG Avidity. SPECIFICITÀ E SENSIBILITÀ DIAGNOSTICA Utilizzando i tests TGS TA Rubella IgG, TGS TA Rubella IgM e TGS TA Rubella IgG Avidity è possibile valutare lo stato immunitario del paziente riguardo l infezione da Rubella. Nella seguente tabella sono riportati i profili sierologici dei tre test Rubella IgG, Rubella IgM e Rubella IgG Avidity che possono essere rilevati durante la fase infettiva e la relativa interpretazione rispetto all esposizione al virus. IFU051TGS TA Versione: 01_IT 2 ottobre 2014 Pagina 10 di 14

11 IgG anti-rubella IgM anti-rubella IgG Avidity anti- Rubella (test di 2 livello) Interpretazione Negativo Negativo -- Non immune (suscettibile all infezione) Negativo Positivo -- Sospetta infezione primaria in atto Positivo Positivo Bassa Avidità Recente Infezione primaria (presumibile infezione primaria acquisita nei 2 mesi precedenti il prelievo del campione) Positivo Positivo Alta Avidità Infezione recente o pregressa con persistenza delle IgM (presumibile infezione passata acquisita più di 2 mesi prima del prelievo del campione) Positivo Negativo Alta Avidità Infezione pregressa Utilizzando i tests TGS TA Rubella IgG, TGS TA Rubella IgM e TGS TA Rubella IgG Avidity sono state valutate la specificità e sensibilità diagnostica nella seguente popolazione di campioni selezionati, esaminati con diversi metodi e classificati in base alla regola del consenso generale: - 98 campioni di altrettanti pazienti non immuni - 95 campioni da pazienti infetti da Rubella, di cui 14 campioni in follow-up di 2 pazienti in sieroconversione e 4 pazienti in fase primaria dell infezione, 5 campioni da altrettanti pazienti con infezione primaria contratta entro 1 mese, 2 campioni con infezione primaria non datata e 74 campioni da altrettanti pazienti con infezione pregressa non recente. Seguendo l interpretazione sopra riportata è stato possibile calcolare la specificità e sensibilità diagnostica relativamente ai gruppi valutati. Dei 98 pazienti non immuni, 97 avevano valori di IgG inferiori al cut off del metodo TGS TA Rubella IgG. La specificità diagnostica del metodo per IgG in pazienti non immuni è stata del 99,0% (Intervallo di Confidenza al 95%: 93,6-99,9%). Per il dosaggio delle IgM, la specificità calcolata su 172 campioni (98 pazienti non immuni e 74 pazienti con infezione pregressa non recente), è stata del 99,4% (171/172) (Intervallo d Confidenza al 95%: 96,3-100,0 %). Dei 95 campioni di pazienti infettati da Rubella in sieroconversione, monitoraggio e follow-up, il metodo TGS TA Rubella IgG ha mostrato 93 risultati positivi, con sensibilità del 97,9% (93/95) (Intervallo di Confidenza al 95%: 96,0%-100,0 %). Dei 21 campioni di pazienti con infezione in atto il metodo TGS TA Rubella IgM ha mostrato 20 risultati positivi e 1 negativo con sensibilità diagnostica del 95,2% (20/21) (Intervallo di Confidenza al 95%: 74,1-99.8%). IFU051TGS TA Versione: 01_IT 2 ottobre 2014 Pagina 11 di 14

12 Con il metodo TGS TA Rubella IgG Avidity, dei 95 campioni diagnosticati come sopra, l Indice di Avidità degli anticorpi Rubella IgG in tutti i 14 campioni in sieroconversione e follow-up con infezione primaria era basso fino a 2 mesi dalla comparsa dei sintomi, così come in tutti i 5 pazienti con infezione contratta nei 30 giorni precedenti il prelievo e in tutti i 2 campioni con infezione recente senza datazione. In tutti i 74 campioni di infezione pregressa (non recente), l indice di Avidità degli anticorpi Rubella IgG era alto. PRESTAZIONI Avvertenza: i dati presentati non rappresentano le specifiche di funzionamento del kit, ma costituiscono evidenza sperimentale di come il kit funzioni entro tali specifiche nel modo previsto dal produttore. Precisione e Riproducibilità La precisione e riproducibilità del kit TGS TA Rubella IgG Avidity sono state valutate impiegando un protocollo basato sulle linee guida del documento EP5-A2 del Clinical and Laboratory Standards (CLSI). La precisione è stata calcolata analizzando i risultati di 20 replicati di tre sieri (a bassa ed alta avidità di IgG anti-rubella) eseguiti con due diversi lotti di reagenti nella stessa seduta sperimentale. In Tabella si riportano i risultati ottenuti con i 3 sieri. Campione Reagenti Lot. no. Media Index SD Index CV % ,13 0,01 7,7 3 0,16 0,01 6,3 2 0,64 0,04 6,3 3 0,65 0,09 13,8 2 0,67 0,05 7,5 3 0,65 0,07 10,8 La riproducibilità è stata calcolata analizzando i risultati della determinazione di cinque sieri (a bassa ed alta avidità di IgG anti-rubella) eseguita in 17 sedute diverse, con un lotto di reagenti. In Tabella si riportano i risultati ottenuti con i 5 sieri. Campione Media Index SD Index CV % 1 0,14 0,01 7,1 2 0,72 0,03 4,2 3 0,68 0,04 5,9 4 0,69 0,05 7,2 5 0,72 0,03 4,2 IFU051TGS TA Versione: 01_IT 2 ottobre 2014 Pagina 12 di 14

13 Specificità Analitica: Interferenze Uno studio basato sulle linee guida del documento EP7-A2 del CLSI ha dimostrato che le prestazioni del dosaggio non sono influenzate dalla presenza nel campione delle sostanze potenzialmente interferenti elencate nella seguente tabella, sino alla concentrazione sperimentata. Sostanze Potenzialmente Interferenti Bilirubina libera Bilirubina coniugata Emoglobina Trigliceridi Massima concentrazione sperimentata 20 mg/dl 20 mg/dl 1000 mg/dl 3000 mg/dl L uso di campioni lipemici, emolizzati o torbidi viene comunque sconsigliato. Sensibilità e Specificità Relative L Indice di Avidità delle IgG anti-rubella è stato determinato utilizzando il kit TGS TA Rubella IgG Avidity ed un metodo di dosaggio immunoenzimatico disponibile in commercio in 77 campioni (18 con bassa avidità e 59 con alta avidità). 2 campioni hanno dato luogo a risultati discordanti tra il dosaggio TGS TA ed il dosaggio disponibile in commercio. La concordanza relativa totale è risultata pertanto essere pari al 97,4% (Intervallo di Confidenza al 95%: 90,1 99,5%) (75/77). La concordanza relativa nei campioni a bassa avidità è risultata pari al 88,9% (Intervallo di Confidenza al 95%: 63,9-98,1%) (16/18). I 2 campioni discordanti hanno mostrato alta avidità. La concordanza relativa nei campioni ad alta avidità è risultata pari al 100,0% (Intervallo di Confidenza al 92,4 100,0 %) (59/59). BIBLIOGRAFIA 1. DM Horstmann. Rubella in : Evans A.S., ed. Viral infections of humans : epidemiology and control. New York: Plenum Press,1976; Askin DF. Intrauterine infections. Neonatal. Netw. 2004; 23(5): Cooper LZ. Alford Jr.CA. Rubella. In : Remington JS, Klein JO, editors. Infectious Diseases of the Fetus and Newborn infant. Philadelphia,PA : Elsevier Saunders ; 2006 : Atreya CD, Mohan KV, Kulkami S. Rubella virus and birth defects : molecular insights into the viral teratogenesis at the cellular level. A. Clin. Mol. Terato. 2004; 70 (7): Department of Vaccines and Biologicals, WHO. Report of a meeting on preventing congenital Rubella syndrome: immunization strategies, surveillance needs. Geneva : World Health Organization,2000. IFU051TGS TA Versione: 01_IT 2 ottobre 2014 Pagina 13 di 14

14 6. Best JM, Banatvala JE. Rubella. In. AJ Zuckerman, JE Banatvala, JR Pattison,eds. Principles and practice of clinical virology. 4 th ed. Chichester : John Wiley,2000: Best JM, O Shea S, Tipples G,Davies N, Al-Khusaiby SM, Krause A, Hesketh LM, Jin L, Enders G. Interpretation of Rubella serology in pregnancy-pitfalls and problems. BMJ. 2002;325 (7356): Banatvala JE and Brown DWG Rubella. Lancet 363 : Banatvala JE,Best JM, O Shea S,Dudgeon JA. Persistence of Rubella antibodies following vaccination : detection of viremia following experimental challenge. Rev. Infect. Dis 1985; 7( suppl 1): S Thomas HIJ, Morgan-Capner P, Roberts A, Hesketh L. Persistent Rubella-specific IgM reactivity in the absence of recent primary Rubella and Rubella reinfection. J. Med. Virol. 1992;36 : D.O. White and F.J. Fenner Medical Virology 4 th ed. Academic Press, San Diego,CA. 12. R. Hamkar, S. Jalivand, T. Mokhtari-Azad, K. Nouri Jelyani, H. Dahi-Far,H. Soleimanjahi and R. Nategh Assessment of IgM enzyme immunoassay and IgG avidity assay for distinguish between primary and secondary immune response to Rubella vaccine. J. Virol. Methods 130 : J. Hoffman and U.G. Liebert Significance of avidity and immunoblot analysis for Rubella IgMpositive serum samples in pregnant women. J. Virol. Methods 130: V. Herne, K. Hedman and P. Reedik Immunoglobulin avidity in the serodiagnosis of congenital Rubella syndrome. Eur. J. Clin. Microbiol. Infect. Dis. 16 : TECHNOGENETICS S.r.l. Via Vanvitelli, Milano Italia IFU051TGS TA Versione: 01_IT 2 ottobre 2014 Pagina 14 di 14