Simplexa Spectral Calibration Panel

Transcript

1 REF SC1100 Rev. B Spectral templates per la determinazione con PCR in tempo reale della matrice spettrale Per uso diagnostico in vitro DESTINAZIONE D USO Il Simplexa Spectral Calibration Panel di Focus Diagnostics è stato progettato per la stima della risposta spettrale di quattro coloranti (FAM, JOE, CFR610 e Q670) sui quattro canali di 3M Integrated Cycler e per la determinazione della matrice spettrale. Questo prodotto non è destinato all uso diagnostico per la determinazione di alcun tipo di malattia o condizione. SINOSSI E SPIEGAZIONE Il Simplexa Spectral Calibration Panel fornisce quattro miscele di reazione uniche e complete (Spectral Templates, templati spettrali) contenenti molecole di acido nucleico a doppio filamento, primer ed enzimi che vengono utilizzati per generare segnali fluorescenti definiti per l analisi da parte del software Integrated Cycler Studio. Dopo che il the Spectral Calibration Panel è stato analizzato su 3M Integrated Cycler, lo staff del servizio tecnico di Focus Diagnostics calcolerà e fornirà una nuova matrice spettrale. Questa permette l uso continuato dei saggi Simplexa su 3M Integrated Cycler. Gli strumenti che rilevano diversi tipi di coloranti con lunghezze d onda di emissione ravvicinate richiedono l uso di metodi correttivi per risolvere ogni segnale colorato nei vari canali, in modo che i dati grezzi di ogni canale possano essere convertiti in dati del colorante. La maggior parte degli strumenti utilizza una combinazione di hardware (filtri ottici) e software (composti chimici e routine di calibrazione) per distinguere i segnali dei coloranti. Il Simplexa Spectral Calibration Panel fornisce un segnale fluorescente unico e puro per ognuno dei quattro coloranti, grazie alla progettazione di un prodotto chimico completo a target singolo corrispondente a ogni Spectral Template. Il software Integrated Cycler Studio misura le proprietà spettrali di ogni colorante e calcola i valori per distinguere la contribuzione data al segnale da ogni colorante dal suo canale principale e da quelli vicini. PRINCIPI DELLA PROCEDURA Il Simplexa Spectral Calibration Panel (SC1100) è progettato come un insieme di miscele di reazione Spectral Template per il formato Universal Disc pronti all uso, alla scongelazione e al caricamento, che permettono il calcolo della matrice spettrale di 3M Integrated Cycler. Il Simplexa Spectral Calibration Panel consiste in provette monouso contenenti miscele di reazione (Spectral Templates), pronte al caricamento, specifiche per ognuno dei quattro canali dei coloranti: SC0520 FAM, SC0560 JOE, SC0610 CFR610 e SC0682 Q670 di 3M Integrated Cycler. L uso degli Spectral Templates non prevede la miscelazione né dei reagenti l uno con l altro, né con alcun altro campione di un paziente o ambientale; gli Spectral Templates sono prodotti come miscele complete e pronte all uso. MATERIALI FORNITI Il Simplexa Spectral Calibration Panel di Focus Diagnostics contiene materiale sufficiente per due insiemi di reazioni. Al ricevimento del materiale, conservare tutti i templati a temperature comprese tra -10 C e -30 C (non utilizzare un congelatore no-frost). Se conservati alla temperatura indicata, i templati rimarranno stabili fino al termine del mese di scadenza riportato sulla confezione del kit. Descrizione del kit Nome del componente REF SIMBOLO CE SULL ETICHETTA Colore del tappo Numero di flaconcini Reazioni per kit/flaconcino Volume per flaconcin o Simplexa Spectral Template 520 SC0520 CONTROL A Verde 2 16/8 100 µl Simplexa Spectral Template 560 SC0560 CONTROL B Blu 2 16/8 100 µl Simplexa Spectral Template 610 SC0610 CONTROL C Rosso 2 16/8 100 µl Simplexa Spectral Template 682 SC0682 CONTROL D Viola 2 16/8 100 µl

2 Pagina 2 Descrizione dei componenti del kit Componente del kit Simplexa Spectral Calibration Panel QR-Code Card (Scheda del codice QR di Simplexa Spectral Calibration Panel) Descrizione del componente Parametri specifici per il dosaggio MATERIALI NECESSARI MA NON FORNITI 1. Integrated Cycler con software Integrated Cycler Studio versione 3.0 o superiore. 2. Universal Discs per utilizzo su Integrated Cycler. 3. Universal Disc Cover Tape. 4. Micropipette singole, multicanale e/o a ripetizione, capaci di dispensare con accuratezza 10 µl. 5. Congelatore (scongelamento manuale) impostato tra -10 e -30 C (per la conservazione dei componenti del kit). 6. Microcentrifuga. 7. Puntali sterili per micro pipetta monouso RNAsi/DNAsi-free con filtro barriera per aerosol 8. Guanti monouso senza talco. 9. Blocco freddo per Universal Disc. DURATA E USO 1. Conservare i templati a una temperatura compresa tra -10 e -30 C (non usare un congelatore no-frost). 2. Dopo aver tolto dal congelatore gli Spectral Templates, iniziare il test entro 30 minuti. 3. Non utilizzare i templati dopo la data di scadenza. 4. Non agitare sul vortex. 5. Non utilizzare insieme templati provenienti da lotti differenti. 6. Non mescolare i templati l uno con l altro o con alcun materiale esterno. 7. Non esporre i templati a luce intensa per lunghi periodi di tempo. AVVERTENZE E PRECAUZIONI 1. Per uso diagnostico in vitro. 2. Attenersi alle precauzioni standard. 3. Durante la manipolazione dei templati, indossare dispositivi di protezione individuale quali, in modo non limitativo, guanti e camice da laboratorio. Lavarsi bene le mani una volta terminato il test. 4. Non pipettare con la bocca. 5. Non fumare, bere, mangiare, manipolare lenti a contatto o truccarsi nelle aree in cui si stiano utilizzando i templati. 6. Smaltire i templati non utilizzati in base alle normative locali, provinciali e nazionali. 7. La contaminazione dei templati può determinare risultati errati. Utilizzare tecniche asettiche. 8. Pipettare e manipolare i templati con cautela per evitare di mescolare i campioni con quelli dei pozzetti adiacenti. 9. Utilizzare tecniche di pipettamento adeguate e mantenere lo stesso tipo di tecnica per l'intera procedura per assicurare valori ottimali e riproducibili. 10. Non sostituire o miscelare templati provenienti da lotti diversi o di altri produttori. 11. Utilizzare unicamente il protocollo descritto nel presente foglio illustrativo. Ogni deviazione dal protocollo o l uso di tempi o temperature diversi da quelli specificati possono comportare risultati errati. 12. La preparazione del saggio deve essere eseguita a temperatura ambiente (in un intervallo compreso tra 18 e 25 C); i templati possono essere mantenuti a temperatura ambiente o freddi utilizzando un blocco refrigerante e l Universal Disc può essere disposto su un Universal Disc Loading Block pre-refrigerato mentre si caricano i templati. 13. Avviare la corsa entro 30 minuti dal momento in cui si tolgono gli Spectral Templates dal congelatore. 14. Non riutilizzare Universal Discs già esposti a templati. 15. Smaltire il disco usato senza staccare o rimuovere il nastro di copertura. 16. La miscela di reazione contiene una percentuale di glicerolo che non supera il 5% e che può causare irritazione in caso di inalazione o contatto con la pelle. In caso di inalazione o contatto con la pelle, adottare le misure di primo soccorso. 17. Se la confezione del kit o il suo contenuto appaiono rotti o danneggiati, non usarli e contattare Focus Diagnostics. I recapiti si trovano nell ultima pagina di questo documento. ISTRUZIONI PER L USO A. IMPOSTAZIONE DELLO STRUMENTO PER LA PCR IN TEMPO REALE Fare riferimento al Manuale dell operatore dell Integrated Cycler per informazioni dettagliate su come configurare il software Integrated Cycler Studio e aggiungere una definizione dell analisi, impostare, analizzare ed esportare le corse effettuate su Integrated Cycler. B. AREA DI AMPLIFICAZIONE CON PCR IN TEMPO REALE Operare in un area dedicata alla preparazione del disco universale a 96 pozzetti per il saggio Simplexa Spectral Calibration Panel. Utilizzare un Universal Disc Loading Block refrigerato durante l impostazione del saggio Simplexa Spectral Calibration Panel. Non preparare le provette in un area di preparazione dei reagenti priva di templato.

3 Pagina 3 1. Scongelare ogni Spectral Template a temperatura ambiente (in un intervallo compreso tra 18 e 25 C circa). Ogni flaconcino compreso nel kit contiene templato sufficiente per 8 reazioni. Prima di ogni uso, mescolare delicatamente ogni singolo componente, quindi centrifugare brevemente in modo che il contenuto raggiunga il fondo della provetta. Volumi degli Spectral Template Spectral Templates Volume / 1 reazione Simplexa Spectral Template µl Simplexa Spectral Template µl Simplexa Spectral Template µl Simplexa Spectral Template µl 2. Utilizzare gli Spectral Templates entro 30 minuti dallo scongelamento. 3. Aggiungere 10 µl di Spectral Template direttamente a ogni pozzetto come descritto nella tabella sottostante. 4. Il raggio del BIANCO (raggio 5 sottostante) non riceve materiale di alcun tipo. 5. Coprire il disco con il nastro di copertura per Universal Discs. 6. Caricare l Universal Disc sigillato su Integrated Cycler e avviare la corsa. Pozzetto Raggio 1 Raggio 2 Raggio 3 Raggio 4 Raggio 5 A SC0520 SC0560 SC0610 SC0682 BIANCO B SC0520 SC0560 SC0610 SC0682 BIANCO C SC0520 SC0560 SC0610 SC0682 BIANCO D SC0520 SC0560 SC0610 SC0682 BIANCO E SC0520 SC0560 SC0610 SC0682 BIANCO F SC0520 SC0560 SC0610 SC0682 BIANCO G SC0520 SC0560 SC0610 SC0682 BIANCO H SC0520 SC0560 SC0610 SC0682 BIANCO C. VERIFICA DEI RISULTATI 1. Esaminare ogni corsa per determinare se è valida. Utilizzare i valori elencati nella tabella sottostante. Criteri per stabilire la validità degli Spectral Template Controllo Risultato Spectral Template 520 Rilevato (0<Ct 45) SOLO sul canale FAM (assenza di rilevazione su JOE, CFR610 o Q670) Spectral Template 560 Rilevato (0<Ct 45) SOLO sul canale JOE (assenza di rilevazione su FAM, CFR610 o Q670) Spectral Template 610 Rilevato (0<Ct 45) SOLO sul canale CFR610 (assenza di rilevazione su FAM, JOE o Q670) Spectral Template 682 Rilevato (0<Ct 45) SOLO sul canale Q670 (assenza di rilevazione su FAM, JOE o CFR610) Bianco Non rilevato D. ESPORTAZIONE DEI RISULTATI 1. Esportare il file della corsa come indicato nel Manuale dell'operatore di 3M Integrated Cycler. 2. Inviare per il file della corsa al servizio tecnico di Focus Diagnostics all indirizzo calibration@focusdx.com E. CARICAMENTO DELLA NUOVA MATRICE Dopo aver ricevuto la documentazione relativa alla correzione spettrale, caricare la nuova matrice spettrale come indicato nel Manuale dell operatore di 3M Integrated Cycler. LIMITAZIONI La correzione spettrale è specifica per ogni strumento. Questo saggio deve essere eseguita su ogni 3M Integrated Cycler ongi sei mesi o quando necessario.. CARATTERISTICHE PRESTAZIONALI STUDI CLINICI Il Simplexa Spectral Calibration Panel non ha alcun uso clinico diretto. È usato per la calibrazione spettrale di 3M Integrated Cycler.

4 Pagina 4 RIPRODUCIBILITÀ La riproducibilità di Simplexa Spectral Calibration Panel è stata valutata. Il sito interno di Focus Diagnostics ha valutato la riproducibilità inter-strumento, inter-operatore e quella inter/intra-dosaggio del dispositivo. Il saggio è stato effettuato da tre operatori durante 4 giorni consecutivi. Affinché la corsa fosse considerata valida, almeno quattro pozzetti replicati su otto per ogni Spectral Template dovevano risultare privi di errore. Non sono stati segnalati od osservati difficoltà o errori da parte dell operatore nell impostazione o nell esecuzione dei saggi. Tutti i componenti della varianza del valore Ct valutati hanno soddisfatto i criteri di accettazione stabiliti e ciò indica che il pannello presenta una varianza bassa sia nei valori Ct che in quelli di correzione spettrale in maniera coerente con quanto ottenuto per la riproducibilità inter-strumento, inter-operatore e inter/intra-saggio. Le tabelle seguenti riepilogano i risultati. Stima dei componenti della varianza per i valori Ct Colorante Ct medio Fonte di varianza Varianza DS % CV Inter-strumento 0,08 0,28 0,9 Inter-operatore 0,03 0,17 0,6 CFR610 30,0 Inter-dosaggio 0,00 0,00 0,0 Intra-dosaggio 0,21 0,46 1,5 Totale 0,32 0,57 1,9 Inter-strumento 0,18 0,42 1,5 Inter-operatore 0,00 0,00 0,0 FAM 28,9 Inter-dosaggio 0,01 0,08 0,3 Intra-dosaggio 0,02 0,14 0,5 Totale 0,21 0,46 1,6 Inter-strumento 0,21 0,46 1,6 Inter-operatore 0,00 0,00 0,0 JOE 28,8 Inter-dosaggio 0,02 0,16 0,5 Intra-dosaggio 0,03 0,16 0,6 Totale 0,26 0,51 1,8 Inter-strumento 0,04 0,20 0,7 Inter-operatore 0,01 0,09 0,3 Q670 29,0 Inter-dosaggio 0,05 0,22 0,8 Intra-dosaggio 0,13 0,36 1,3 Totale 0,23 0,48 1,7

5 Pagina 5 Stima dei componenti della varianza per i valori della matrice spettrale Componenti della matrice Da CFR610 a 682 Da FAM a 560 Da JOE a 520 Fonte di varianza Varianza (%) DS (%) Inter-operatore 0,0000 0,01 Inter-dosaggio 0,0005 0,02 Intra-dosaggio 0,0023 0,05 Totale 0,0028 0,05 Inter-operatore 0,0010 0,03 Inter-dosaggio 0,0108 0,10 Intra-dosaggio 0,0296 0,17 Totale 0,0414 0,20 Inter-operatore 0,0000 0,00 Inter-dosaggio 0,0004 0,02 Intra-dosaggio 0,0038 0,06 Totale 0,0042 0,06 BIBLIOGRAFIA 1. 3M Integrated Cycler Studio Operator Manual (PI.MOL1101.IVD, PI.MOL1101.OUS, PI.MOL1101.QQD, PI.MOL1101UD) L uso delle sonde Scorpions per la diagnostica in vitro nell'uomo è coperto da una licenza concessa da DxS, Ltd a Focus Diagnostics, Inc. I coloranti Black Hole Quencher, CAL Fluor e Quasar sono a marchio Biosearch Technologies, Inc. ('BTI'). La tecnologia con colorante Black Hole Quencher, CAL Fluor e Quasar è concessa in licenza ai sensi dell accordo con BTI e tali prodotti sono venduti a solo scopo clinico, diagnostico o di ricerca e sviluppo. AVVISO PER L ACQUIRENTE E GLI UTENTI: LICENZA LIMITATA: SI PREGA DI LEGGERE ATTENTAMENTE IL PRESENTE DOCUMENTO. IL PRESENTE DOCUMENTO È IL CONTRATTO TRA LEI E FOCUS DIAGNOSTICS, INC. RELATIVO ALL'USO DEL PRODOTTO E DELLA PROCEDURA. QUESTO CONTRATTO DI LICENZA CONTIENE LIMITAZIONI DELLA LICENZA. L'UTILIZZO DI QUESTO PRODOTTO E DI QUESTA PROCEDURA È SOGGETTO ALLE CONDIZIONI CONTENUTE IN QUESTO CONTRATTO DI LICENZA E LEI SARÀ VINCOLATA/O A QUESTI TERMINI E CONDIZIONI SE UTILIZZA IL PRODOTTO. SE NON ACCETTA QUESTI TERMINI E CONDIZIONI, DOVRÀ RESTITUIRE IMMEDIATAMENTE IL PRODOTTO, INSIEME A TUTTI GLI IMBALLAGGI, A FOCUS DIAGNOSTICS, INC. E IL PREZZO DI ACQUISTO SARÀ RIMBORSATO. Questo prodotto e questa procedura contengono segreti commerciali di proprietà di Focus Diagnostics, Inc., compresi, ma non limitatati a, la formulazione e l'identità dei reagenti, e la procedura di utilizzo del prodotto per regolare la risposta spettrale di Integrated Cycler. Inoltre, la descrizione della procedura nel foglietto illustrativo è oggetto di diritto d'autore. Il prezzo di acquisto di questo prodotto include il diritto limitato, non esclusivo e non trasferibile per l'acquirente di utilizzare solo la quantità del prodotto acquistato per eseguire la procedura descritta in questo foglietto illustrativo sull Integrated Cycler dell'acquirente. Il titolo, tutti i diritti di proprietà e tutti i diritti di proprietà intellettuale sia in relazione al prodotto che alla procedura descritti in questo foglietto illustrativo devono sempre rimanere di Focus Diagnostics, Inc. e delle sue filiali, fatto salvo il Suo diritto di consumare i reagenti acquistati. Focus Diagnostics, Inc. ha il diritto di concederle questa licenza. Tutti i diritti non espressamente concessi dalla presente Licenza, sono riservati a Focus Diagnostics, Inc. e alle sue filiali. Restrizioni 1. Non può utilizzare, analizzare, valutare, modificare o ricreare il prodotto, la procedura o la documentazione associata, in totale o in parte, tranne se espressamente permesso dal presente accordo. 2. Non può ricercare il segreto di fabbricazione relativo alla formulazione del reagente o del processo di regolazione della risposta spettrale o utilizzare il prodotto come comparatore per sviluppare o valutare un prodotto o una procedura simili. 3. Non può rimuovere dal prodotto o dalla documentazione a esso associata alcuna etichetta relativa a proprietà, diritto d autore, segreti commerciali o avvisi. 4. Non può modificare, vendere, affittare, trasferire, rivendere, dare in prestito o distribuire la presente licenza o il prodotto o la procedura, oppure creare lavori derivativi basati sul prodotto o sulla procedura o su qualsiasi sua parte o su qualsiasi interesse relativo. 5. Acconsente a usare il prodotto solamente in conformità a tutte le leggi, norme e regolamenti. RAPPRESENTANTE AUTORIZZATO mdi Europa GmbH, Langenhagener Str , Langenhagen-Hannover, Germania INFORMAZIONI PER ORDINARE Telefono: (800) (solo USA) (562) (internazionale) Fax: (562) PI.SC1100 Rev. B Data di redazione: 19 maggio 2016

6 Pagina 6 ASSISTENZA TECNICA Telefono: (800) (solo USA) (562) (internazionale) Fax: (562) Visitate il nostro sito web all indirizzo Cypress, California 90630, U.S.A.