RIDASCREEN GIS. Test immunoenzimatico per la rilevazione del latte caprino nel latte ovino. Art. No.: R4802. Test in vitro Conservare a 2-8 C

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1 RIDASCREEN GIS Test immunoenzimatico per la rilevazione del latte caprino nel latte ovino Art. No.: R4802 Test in vitro Conservare a 2-8 C R-Biopharm AG, Darmstadt, Germany Tel.: +49 (0) / Telefax: +49 (0)

2 Prodotto da: R-Biopharm AG An der neuen Bergstraße 17 D Darmstadt Per informazioni: Telefono: Centralino ( ) Telefax / Ordini ( ) orders@r-biopharm.de Marketing ( ) info@r-biopharm.de Distribuito da: R-Biopharm Italia Srl Via dell Artigianato Cerro al Lambro MI Telefono info@r-biopharm.it RIDA e RIDASCREEN sono marchi registrati della R-BIOPHARM AG Produttore: R-BIOPHARM AG, Darmstadt, Germania R-BIOPHARM AG è certificata ISO RIDASCREEN GIS

3 Introduzione RIDASCREEN GIS (Cod.: R 4802) è un immunodosaggio enzimatico per la rilevazione del latte caprino nel latte ovino. Tutti i reagenti richiesti per l analisi immunoenzimatica compresi gli standard - sono contenuti nel kit. Il kit è sufficiente per 48 determinazioni (inclusi gli standard). Per la quantificazione è richiesto uno spettrofotometro per micropiastre. Preparazione campioni: Tempo richiesto: Limite di rilevabilità: diluizione preparazione dei campioni (10 campioni)... ca. 5 min esecuzione del test (tempo d incubazione)1 h 30 min 1% di latte caprino nel latte ovino 1. Scopo RIDASCREEN GIS (Cod. R4802) è un immunodosaggio enzimatico per la rilevazione del latte caprino nel latte ovino. 2. Generale Il latte ovino è molto più costoso del latte caprino, che viene spesso utilizzato per allungare il latte ovino. Fino ad oggi l adulterazione con latte si poteva rilevare unicamente mediante cromatografia o elettroforesi, metodi laboriosi e che richiedono attrezzature sofisticate e quindi di scarso interesse nelle rilevazioni di routine per il latte. Il test RIDASCREEN GIS individua le aggiunte di latte caprino nel latte ovino con un limite di rilevabilità dell 1%, a fronte di una procedura di preparazione dei campioni particolarmente semplice. 3. Principio del test Il test si basa su una reazione antigene-anticorpo. La presenza del latte caprino nel campione viene stabilita mediante la rilevazione immunologica delle IgG caprine, che sono costituenti naturali del latte caprino. I pozzetti della micropiastra RIDASCREEN GIS

4 sono rivestiti con anticorpi specifici anti-igg caprine. Vengono aggiunti gli standard o i campioni. Nel caso di prodotti adulterati, gli anticorpi contenuti nel latte caprino si legano all anticorpo immobilizzato. I componenti non legati vengono rimossi con il lavaggio. Con l aggiunta del coniugato, che è un anticorpo coniugato con perossidasi diretto contro le IgG caprine, si individua l antigene legato (nel caso specifico le IgG caprine). L enzima coniugato non legato viene quindi eliminato con il lavaggio. Nei pozzetti vengono successivamente aggiunti e quindi incubati il substrato enzimatico (perossido d urea) e il cromogeno (tetrametilbenzidina). L'enzima coniugato legato converte il cromogeno incolore in un prodotto blu. L'aggiunta della soluzione di stop (acido solforico) porta al viraggio del colore dal blu al giallo. La misurazione fotometrica viene eseguita a 450 nm. 4. Reagenti forniti Ogni kit contiene materiale sufficiente per 48 analisi (incluse le analisi degli standard). Ogni kit contiene: 1 x Micropiastra da 48 pozzetti (6 strip da 8 pozzetti ciascuna) rivestiti con anticorpi specifici diretti contro IgG caprine 6 x Soluzioni standard da 1,3 ml ciascuna *) Standard 1: 0 µg/ml di IgG caprine Standard 2: µg/ml di IgG caprine (ca. 0,005% di latte caprino) Standard 3: µg/ml di IgG caprine (ca. 0,01% di latte caprino) Standard 4: 0.25 µg/ml di IgG caprine (ca. 0,02% di latte caprino) Standard 5: 0.5 µg/ml di IgG caprine (ca. 0,04% di latte caprino) Standard 6: 1 µg/ml di IgG caprine (ca. 0,08% di latte caprino) 1 x Coniugato (130 µl)...tappo rosso anticorpo anti-igg caprine coniugato con perossidasi concentrato (100 x) 1 x Substrato (7 ml)...tappo verde contiene perossido d urea 1 x Cromogeno (7 ml)...tappo blu contiene tetrametilbenzidina 1 x Soluzione di stop (14 ml)... tappo giallo contiene acido solforico 1 N 1 x Soluzione tampone (14 ml) diluente del coniugato 4 RIDASCREEN GIS

5 *) Gli standard sono già diluiti 1:200 e la concentrazione riportata sulle rispettive etichette corrisponde alla concentrazione diluita. 5. Materiale richiesto ma non fornito 5.1. Attrezzatura: spettrofotometro per micropiastre (450 nm) micropipette da 10 µl micropipette a volume variabile da 20 μl 200 µl e μl 6. Avvertenze e precauzioni per gli utilizzatori La soluzione di stop contiene acido solforico 1N (R36/38, S2-26). 7. Conservazione Conservare il kit a 2-8 C (35-46 F). Non congelare alcun componente del kit. I pozzetti non utilizzati vanno riposti insieme all essiccante nella loro confezione originale, che deve essere ben richiusa e conservata a 2-8 C (35-46 F). Il cromogeno incolore è fotosensibile: evitarne l'esposizione alla luce diretta. La garanzia di qualità decade alla data di scadenza del prodotto riportata in etichetta. Non scambiare singoli reagenti appartenenti a kit con numero di lotto diverso. 8. Indicazioni di deterioramento dei reagenti Qualsiasi colorazione bluastra del cromogeno prima dell esecuzione del test Valori inferiori a 0,7 unità di assorbanza (A 450nm < 0,7) per lo standard 6 9. Preparazione dei campioni Conservare i campioni in luogo fresco Latte diluire i campioni di latte 1:200 con acqua distillata (es. 10 µl di latte + 2 ml di acqua distillata) RIDASCREEN GIS

6 utilizzare 100 µl del campione diluito per ogni pozzetto 10. Esecuzione del test Indicazioni preliminari Portare tutti i reagenti a temperatura ambiente prima dell'uso (20-25 C/68-77 F). L enzima coniugato (flacone con tappo rosso) è fornito concentrato. Dal momento che l enzima coniugato diluito ha una stabilità limitata, è bene ricostituire solo la quantità necessaria ad effettuare il dosaggio. Prima di pipettare l'enzima coniugato, agitarlo accuratamente. Ricostituire l'enzima coniugato diluendolo 1:100 con la soluzione tampone (es. 10 μl di coniugato concentrato + 1 ml di soluzione tampone, sufficiente per 1 strip) Procedura per l esecuzione del test Eseguire meticolosamente la procedura di lavaggio raccomandata. Evitare il prosciugamento dei pozzetti tra i vari passaggi del test. 1. Inserire un numero sufficiente di pozzetti nel supporto della micropiastra per tutti gli standard e i campioni da eseguire in duplicato. Registrare le posizioni assegnate agli standard e ai campioni. 2. Addizionare 100 μl di soluzione standard o di campione preparato nei pozzetti corrispondenti. Incubare per 30 minuti a temperatura ambiente (20-25 C/68-77 F). 3. Svuotare i pozzetti e picchiettare energicamente la piastra su un foglio di carta assorbente per almeno tre volte in modo da eliminare tutto il liquido dai pozzetti. Riempire i pozzetti con 250 μl di acqua distillata ed eliminare nuovamente il liquido, ripetendo l operazione altre due volte. 4. Addizionare in ogni pozzetto 100 μl di enzima coniugato diluito (vedi par ). Incubare per 30 minuti a temperatura ambiente (20-25 C/68-77 F). 5. Svuotare i pozzetti e picchiettare energicamente la piastra su un foglio di carta assorbente per almeno tre volte in modo da eliminare tutto il liquido dai pozzetti. Riempire i pozzetti con 250 μl di acqua distillata ed eliminare nuovamente il liquido, ripetendo l operazione altre due volte. 6 RIDASCREEN GIS

7 6. Addizionare 50 µl di substrato e 50 µl di cromogeno in ogni pozzetto. Miscelare delicatamente facendo oscillare la micropiastra manualmente e incubare per 30 minuti a temperatura (20-25 C/68-77 F) e al buio. 7. Addizionare 100 μl di soluzione di stop in ogni pozzetto. Miscelare accuratamente facendo oscillare la piastra manualmente e leggere le assorbanze a 450 nm, entro 30 minuti dall aggiunta della soluzione d arresto. 11. Risultati Per la valutazione dei saggi immunoenzimatici RIDASCREEN è disponibile un apposito software, denominato RIDA SOFT Win (Cod. Z9999). Il profilo della curva standard è illustrata nel Certificato di Assicurazione della Qualità incluso nel kit. Inserire i valori medi delle assorbanze ottenute per gli standard in un sistema di coordinate su scala semilogaritmica contro la concentrazione (in %) di latte caprino. Sulla curva di calibrazione è possibile leggere direttamente la concentrazione in % (adulterazioni pari a 0, 1, 2, 4, 8, 16%) di latte caprino corrispondente all assorbimento di ciascun campione. Nota: Anche i campioni, come gli standard, sono diluiti 1:200 (vedi par. 9.1.). Pertanto, dato che il fattore di diluizione è già stato considerato, le adulterazioni in % sono le seguenti: standard 1: 0 % standard 2: (0.005 x 200) 1 % standard 3: (0.01 x 200) 2 % standard 4: (0.02 x 200) 4 % standard 5: (0.04 x 200) 8 % standard 6: (0.08 x 200) 16 % Qualora siano richieste altre diluizioni, è necessario preparare gli standard con latte caprino arricchito al momento, utilizzando idonee diluizioni. A causa della grande variabilità delle razze caprine (alpina, saanen, ecc.) impiegate per le preparazioni di IgG, per ottenere risultati significativi è RIDASCREEN GIS

8 consigliabile preparare soluzioni standard personalizzate utilizzando latte di capra e latte di pecora freschi. R-Biopharm non fornisce alcuna garanzia, esplicita o implicita, oltre a quella relativa alla qualità standard dei materiali di cui sono costituiti i suoi prodotti. Nel caso tali materiali risultassero difettosi, R-Biopharm si impegna a fornire prodotti sostitutivi. Non esiste garanzia di commerciabilità o di idoneità del prodotto per uno scopo particolare. R-Biopharm non è da ritenersi responsabile per danni, ivi compresi danni speciali o indiretti, o spese derivanti direttamente o indirettamente dall utilizzo del prodotto. 8 RIDASCREEN GIS