RIDASCREEN 19-Nortestosteron Art. Nr. R2801

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1 RIDASCREEN 19-Nortestosteron Art. Nr. R2801 Test immunoenzimatico per l analisi quantitativa di 19-Nortestosterone Test in vitro Conservare a 2-8 C

2 Prodotto da: R-Biopharm AG An der neuen Bergstraße 17 D Darmstadt Per informazioni Telefono: Centralino ( ) Telefax / Ordini ( ) orders@r-biopharm.de Marketing ( ) info@r-biopharm.de Distribuito da: R-Biopharm Italia Srl Via Morandi, Melegnano MI Telefono info@r-biopharm.it - RIDA e RIDASCREEN sono marchi registrati della R-BIOPHARM AG Produttore: R-BIOPHARM AG, Darmstadt, Germania R-BIOPHARM AG è certificata ISO RIDASCREEN 19-Nortestosteron

3 RIDASCREEN 19-Nortestosteron Introduzione RIDASCREEN 19-Nortestosteron è un immunodosaggio enzimatico competitivo per l'analisi quantitativa del 19-nortestosterone in campioni di urina. Tutti i reagenti richiesti per il dosaggio - inclusi gli standard - sono contenuti nel kit. Il kit è sufficiente per 96 determinazioni (inclusi gli standard). Per la quantificazione è richiesto uno spettrofotometro per micropiastre. Preparazione campioni: Tempo richiesto: Limite di rilevabilità: (corrispondente alla sostanza standard) idrolisi purificazione mediante colonne RIDA C18 (Art. No.: R2002) preparazione dei campioni (per 10 campioni)... ca. 1 h esecuzione del test (tempo d incubazione)... 1 h 15 min 3 µg/l (l intervallo di misurazione a seconda del fattore di diluizione è ng/l) Valore di recupero: in campioni di urina arricchiti % ± 20 % (corrispondente alla sostanza standard) La specificità di RIDASCREEN 19-Nortestosteron è stata determinata analizzando i valori di cross-reattività delle sostanze corrispondenti in un sistema tampone. Nei campioni la specificità può differire da quella determinata in un sistema tampone a causa dell effetto matrice. Prima dell analisi delle sostanze cross-reattive, è necessario determinare il limite di rilevabilità ed i valori di recupero delle sostanze nel rispettivo campione. Il test non è in grado di discriminare tra analita e sostanza cross-reattiva. RIDASCREEN 19-Nortestosteron

4 Specificità: 19-Nortestosterone 17β (sostanza standard) % 19-Nortestosterone 17α... ca. 80 % 19-Norethisterone... ca. 74 % 19-Norandrostendione... ca. 100 % 18-Metil-19 NT-17β... ca. 59 % 17α-Etil-19 NT-17β... ca. 40 % 15α, 16α-Metil.-19 NT-17β-acetato... ca. 71 % Trenbolone... ca. 10 % 17β-Estradiolo... ca. 0.1 % Zeranolo, DES, ;PA... < 0.1 % Al fine di aumentare la qualità delle prestazioni durante l'esecuzione di procedure ELISA, si prega di far riferimento al nostro Good ELISA Practice (GEP) Manual, nella versione aggiornata. Qui si elencano gli standard minimi riguardanti le condizioni di lavoro quando si utilizzano i kit di R-Biopharm AG e si eseguono test ELISA. Il manuale può essere visionato, stampato e scaricato direttamente dal nostro sito Prodotti correlati: RIDA 19-Nortestosteron Spiking Solution... (R2899) RIDASCREEN Trenbolon..... (R2601) RIDA Trenbolon Spiking Solution... (R2699) Trenbolon Testkontrolle (negativ).... (R2608) RIDASCREEN Methyltestosteron... (R3611) RIDA Methyltestosteron Spiking Solution... (R3699) RIDASCREEN Ethinylöstradiol... (R2511) RIDA Ethinylöstradiol Spiking Solution... (R2599) 1. Scopo RIDASCREEN 19-Nortestosteron è un immunodosaggio enzimatico competitivo per l'analisi quantitativa di residui di 19-nortestosterone in campioni di urina. 4 RIDASCREEN 19-Nortestosteron

5 2. Generale Gli effetti anabolici del 19-nortestosterone sono paragonabili a quelli del testosterone, ma con minori effetti androgenici. In Germania l utilizzo del 19-nortestosterone-decanoato e laurato è consentito a scopo veterinario. Tuttavia ancora più frequente è l utilizzo del 19-nortestosterone come agente dopante negli sport di alto livello o in quelli equestri. In passato sono stati segnalati casi di impiego di miscele illegali per l ingrassamento dei vitelli che contenevano molto spesso 19-nortestosterone-estere. 3. Principio del test I pozzetti della micropiastra sono rivestiti con anticorpi di cattura diretti contro anticorpi anti-19-nortestosterone. Vengono aggiunti: anticorpi anti-19- nortestosterone, 19-nortestosterone coniugato con enzima e soluzioni standard di 19-nortestosterone o campioni. Il 19-nortestosterone libero e il 19-nortestosterone coniugato con enzima competono per i siti di legame degli anticorpi anti-19- nortestosterone (immunodosaggio enzimatico competitivo). Contemporaneamente gli anticorpi anti-19-nortestosterone vengono immobilizzati dagli anticorpi di cattura. L'enzima coniugato non legato viene rimosso con il lavaggio. L'enzima substrato (urea-perossidasi) ed il cromogeno (tetrametilbenzidina) vengono aggiunti ai pozzetti ed incubati. L'enzima coniugato legato converte il cromogeno incolore in un prodotto blu. L'addizione della soluzione di stop porta al viraggio del colore dal blu al giallo. La misurazione fotometrica viene eseguita a 450 nm. L'assorbimento è inversamente proporzionale alla concentrazione del 19- nortestosterone. RIDASCREEN 19-Nortestosteron

6 4. Reagenti forniti Ogni kit contiene materiale sufficiente per 96 analisi (incluse le analisi degli standard). Ogni kit contiene: Componente Colore del tappo Formato Quantità Micropiastra - Pronto all uso 96 pozzetti Standard 1 Bianco Pronto all uso 0 ng/l 1.3 ml Standard 2 Bianco Pronto all uso 50 ng/l 1.3 ml Standard 3 Bianco Pronto all uso 150 ng/l 1.3 ml Standard 4 Bianco Pronto all uso 500 ng/l 1.3 ml Standard 5 Bianco Pronto all uso 1000 ng/l 1.3 ml Standard 6 Bianco Pronto all uso 3000 ng/l 1.3 ml Wash buffer salt Sali da Tween sciogliere Conjugate Rosso Concentrato 11 x 1.2 ml Antibody Nero Concentrato 11 x 1.2 ml Conjugate/antibody buffer - Pronto all uso 25 ml Substrate/Chromogen Red Chromogen Pro Marrone Pronto all uso 10 ml Stop solution Giallo Pronto all uso 14 ml 5. Materiale richiesto ma non fornito 5.1. Attrezzatura: spettrofotometro per micropiastre (450 nm) incubatore a 37 C (98 F) evaporatore pipette graduate micropipette a volume variabile da 20 µl 200 µl e da µl colonne RIDA C18 (Art. No.: R2002) 6 RIDASCREEN 19-Nortestosteron

7 5.2. Reagenti: metanolo p.a. ß-Glucuronidasi di Escherichia coli (Sigma-Aldrich Art. No.: G7646) ricostituire la polvere liofilizzata a 1 mg/ml in acqua deionizzata secondo le istruzioni fornite da Sigma Aldrich ed utilizzare 10 µl della soluzione (circa 53 unità) per l idrolisi dei β-glucuronidi nelle urine fosfato di potassio (tampone) 75 mm, ph 6.8: tampone A: 10.2 g di KH 2 PO 4, portare a 1000 ml con acqua distillata tampone B: g di K 2 HPO4, portare a 1000 ml con acqua distillata portare il ph a 6.8 miscelando il tampone A con il tampone B (rapporto 1:1) tampone Tris/HCl 20 mm a ph 8.5 soluzione metanolo/tris-hcl (20/80 v/v): sciogliere 2.42 g di tris-(idrossimetil)- aminometano in ca. 700 ml di acqua distillata ml di metanolo (100%), regolare il ph a 8.5 con 5 M di HCl e portare a 1000 ml con acqua distillata 6. Avvertenze e precauzioni per gli utilizzatori Questo test dovrebbe essere effettuato solo da personale di laboratorio qualificato. Le istruzioni per l'uso devono essere rispettate rigorosamente. Il kit può contenere sostanze pericolose. Per ulteriori informazioni sulla sostanze contenute, far riferimento alla scheda di sicurezza (MSDS) scaricabile direttamente online al sito 7. Conservazione Conservare il kit a 2-8 C (35-46 F). Non congelare alcun componente del kit. Riporre i pozzetti non utilizzati insieme all agente essiccante nel sacchetto ben chiuso con la zip e conservare a 2-8 C (35-46 F). il cromogeno incolore è fotosensibile, di conseguenza evitarne l'esposizione alla luce diretta. La garanzia di qualità del prodotto non si applica oltre la data di scadenza indicata sulla confezione. Non scambiare singoli reagenti appartenenti a kit con numero di lotto differente. RIDASCREEN 19-Nortestosteron

8 8. Indicazioni di instabilità o deterioramento dei reagenti Qualsiasi colorazione bluastra del cromogeno, prima dell esecuzione del test Valori inferiori a 0,6 unità di assorbanza (A 450nm < 0.6) per lo standard 1 9. Preparazione dei campioni 9.1. Urine diluire 0.5 ml di urina con 3 ml di fosfato di potassio 75 mm, ph 6.8 (vedi 5.2.) aggiungere 10 µl di ß-Glucuronidasi di Escherichia coli (vedi 5.2.) idrolizzare incubando la soluzione per 3 ore a 37 C (98 F) (in alternativa lasciare a temperatura ambiente per tutta la notte) Il prodotto idrolizzato deve essere purificato utilizzando le colonne RIDA C18 (Cod. R2002) come segue: flusso: 1 goccia al secondo sciacquare la colonna con 3 ml di metanolo (100 %) equilibrare la colonna con 2 ml di metanolo/tris-hcl 20 mm (20/80 v/v) a ph 8,5 (vedi par. 5.2.) aggiungere il campione (ca. 3.5 ml) sciacquare la colonna con 2 ml di metanolo/tris-hcl 20 mm (20/80 v/v) a ph 8,5 (vedi par. 5.2.) sciacquare la colonna con 3 ml di metanolo/acqua distillata (40/60 v/v) eliminare i residui di fluido applicando una pressione positiva o il vuoto e asciugare la colonna per 2 minuti con aria o azoto eluire il campione con 1 ml di metanolo/acqua distillata (80/20 v/v) in un nuovo vial (flusso: 15 gocce al minuto) far evaporare l eluato del campione per essiccarlo, a 60 C (140 F) preferibilmente sotto un debole flusso di azoto eluire il campione essiccato con 1 ml di metanolo/acqua distillata (10/90 v/v) aggiungere 20 µl per pozzetto nel saggio Nota: A seconda della concentrazione di 19-nortestosterone nel campione possono essere necessarie ulteriori diluizioni. In questo caso utilizzare una soluzione di metanolo e acqua distillata (10/90 v/v) per tutte le ulteriori diluizioni. 8 RIDASCREEN 19-Nortestosteron

9 10. Esecuzione del test Indicazioni preliminari Portare tutti i reagenti a temperatura ambiente (20-25 C / F) prima dell'uso. Il 19-nortestosterone coniugato è fornito concentrato. Poiché l'enzima coniugato ha una stabilità limitata, è bene ricostituire solo la quantità necessaria ad effettuare il dosaggio. Prima di pipettare l'enzima, agitarlo accuratamente. Ricostituire l'enzima coniugato diluendolo 1:11 (1+10) nel diluente (vedi par. 4., es. 400 µl concentrato + 4 ml di diluente, sufficiente per 4 strip). L anticorpo anti-19-nortestosterone è fornito concentrato. Poiché la soluzione diluita di anticorpi ha una stabilità limitata, è bene ricostituire solo la quantità necessaria ad effettuare il dosaggio. Prima di pipettare l anticorpo concentrato, agitarlo accuratamente. Ricostituire l'anticorpo concentrato diluendolo 1:11 (1+10) nel diluente (es. 400 µl concentrato + 4 ml di diluente, sufficiente per 4 strip). Come soluzione lavaggio è necessario il tampone PBS, si prega di utilizzare la soluzione lavaggio (sale) contenuta nel kit (vedi par.4.). Disciogliere tuttto il contenuto in un litro di acqua distillata. Il tampone pronto all uso scade dopo circa 4-6 settimane se conservato a 2-8 C (36-46 F). In alternativa: Disciogliere il contenuto della busta in 100 ml di acqua distillate per ottenere una soluzione lavaggio concentrata 10 volte. Questa soluzione scade dopo circa 8-12 settimane, se conservata a temperatura ambiente (20-25 C / F). Utilizzare 1 parte di questa soluzione concentrate e scioglierla in 9 parti di acqua distillate per ottenere la soluzione di lavaggio pronta all uso. RIDASCREEN 19-Nortestosteron

10 10.2. Procedura per l'esecuzione del test Eseguire attentamente la procedura di lavaggio raccomandata. Evitare l asciugamento dei pozzetti tra i vari passaggi. 1. Inserire un numero sufficiente di pozzetti nel supporto per tutti gli standard e campioni da eseguire in duplicato. Registrare le rispettive posizioni. 2. Aggiungere 100 µl dell anticorpo diluito in ogni pozzetto, agitare delicatamente facendo oscillare manualmente la piastra e incubare per 30 min a temperatura ambiente (20-25 C / F). 3. Svuotare il liquido dai pozzetti e picchiettare energicamente la piastra su un foglio assorbente in modo da eliminare tutto il liquido dai pozzetti. Ripetere l operazione per tre volte. Riempire tutti I pozzetti con la soluzione lavaggio (vedi10.1) e svuotarli nuovamente. Ripetere altre due volte. 4. Aggiungere 20 µl di soluzione standard o di campione e 100 µl dell enzima coniugato diluito per ogni pozzetto in duplicato, agitare delicatamente facendo oscillare manualmente la piastra e incubare per 30 min a temperatura ambiente (20-25 C / F). 5. Svuotare il liquido dai pozzetti e picchiettare energicamente la piastra su un foglio assorbente in modo da eliminare tutto il liquido dai pozzetti. Ripetere l operazione per tre volte. Riempire tutti I pozzetti con la soluzione lavaggio (vedi 10.1) e svuotarli nuovamente. Ripetere altre due volte. 6. Aggiungere 100 µl della soluzione substrato/cromogeno (tappo marrone) per ogni pozzetto. Agitare delicatamente facendo oscillare manualmente la piastra e incubare per 15min a temperatura ambiente (20-25 C/68-77 F) al buio. 7. Pipettare 100 µl di soluzione di stop in ogni pozzetto. Agitare delicatamente facendo oscillare manualmente la piastra e leggere le assorbanze a 450 nm contro aria, entro 30 minuti dall'aggiunta dello stop. 10 RIDASCREEN 19-Nortestosteron

11 11. Risultati Per i test immunoenzimatici RIDASCREEN è disponibile un apposito software denominato RIDA SOFT Win.net (Art. No. Z9996). Il profilo della curva standard è rappresentato nel Certificato di Assicurazione della Qualità allegato al kit. Nota per il calcolo senza software: Assorbanza dello standard (o campione) X 100 = B/B 0 (%) Assorbanza standard zero Lo standard zero risulta pertanto essere il 100% e i valori di assorbanza sono quotati in percentuale. I valori calcolati per gli standard vanno inseriti in un sistema di coordinate su scala semilogaritmica contro la concentrazione di 19- nortestosterone espressa in ng/l. Per ottenere la concentrazione di 19-nortestosterone in ng/l effettivamente contenuta nel campione, la concentrazione calcolata dalla curva standard deve essere moltiplicata per il fattore di diluizione corrispondente. Operando secondo le procedure descritte, il fattore di diluizione per l urina è 2. Per ulteriori informazioni o note applicative contattare il proprio di distributore locale. Note applicative: - Preparazione dei campioni di carne R-Biopharm non fornisce alcuna garanzia, esplicita o implicita, oltre a quella relativa alla qualità standard dei materiali di cui sono costituiti i suoi prodotti. Nel caso tali materiali risultassero difettosi, R-Biopharm si impegna a fornire prodotti sostitutivi. Non esiste garanzia di commerciabilità o di idoneità del prodotto per uno scopo particolare. R-Biopharm non è da ritenersi responsabile per danni, ivi compresi danni speciali o indiretti, o spese derivanti direttamente o indirettamente dall utilizzo del prodotto. RIDASCREEN 19-Nortestosteron