ERA Analisi della ricettività endometriale Brevettato dal 2009
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1 Analisi della ricettività endometriale Brevettato dal ERA
2 ERA analizza tramite NGS l espressione di 236 geni per determinare la finestra di impianto personalizzata per ogni paziente. 01
3 Test ERA Il test ERA consiste di: Analisi tramite NGS dell espressione di 236 geni legati alla ricettività endometriale Uno strumento molecolare basato sull espressione genica utilizzato per determinare quando l'endometrio è ricettivo. Un programma di calcolo predittivo che analizza i dati dell espressione genica e classifica l endometrio come Ricettivo o Non ricettivo" con una sensibilità di 0,997 e una specificità di 0,885. Brevettato nel 2009: PCT/ES 2009/
4 Consenso scientifico: IGENOMIX Publications Lo sviluppo di questo strumento è stato pubblicato nell articolo di Díaz-Gimeno et al, 2011 (Fertil Steril. Gennaio 2011;95(1):50-60, 60.e1-15). La sua efficacia e la sua consistenza sono state dimostrate anche nell articolo di Díaz-Gimeno et al, 2013 (Fertil Steril. Febbraio 2013;99(2):508-17). Infine, la sua applicabilità clinica ai pazienti con fallimento dell'impianto è stata confermata nelle pubblicazioni di Ruiz-Alonso et al, 2013 (Fertil Steril. Settembre 2013;100(3):818-24) e Ruiz-Alonso et al, 2014 (Hum Reprod. Giugno 2014;29(6):1244-7). È attualmente in corso uno studio randomizzato per valutare la sua applicabilità ai pazienti senza alcun trattamento di riproduzione assistita anteriore. (Codice ClinicalTrials.gov: NCT ). 03
5 PIONEERS IN REPRODUCTIVE GENETICS Consenso scientifico Ricettivo Pre-ricettivo Raggruppamento gerarchico LH+3 LH+1 LH+5 LH+7 LH+9 Pubblicazione IGENOMIX: Díaz-Gimeno P. et al. - Fertil Steril 2011; 95(1):
6 Valore diagnostico Valutazione dell endometrio: Fa una diagnosi dello stato dell endometrio durante la finestra di impianto e determina il tempo per il trasferimento degli embrioni. In uno studio in cieco, ERA classifica la ricettività dell endometrio meglio dei criteri di Noyes: Valore kappa Patologo 1 (P1) Patologo 2 (P2) P1 vs P2 ERA ( ) ( ) ( ) ( ) Valore kappa: Concordanza buona Concordanza ottima Pubblicazione IGENOMIX: Díaz-Gimeno P. et al. - Fertil Steril 2013; 99 (2):
7 PIONEERS IN REPRODUCTIVE GENETICS Per chi? Pazienti con fallimento ricorrente dell impianto: - 2 o più fallimenti di impianto con embrioni propri o 1 con donazione di ovuli. - Embrioni di buona qualità. Pazienti con un endometrio morfologicamente normale: - ERA dopo intervento in caso di anomalie congenite dell utero. Pazienti con un endometrio normale, atrofico o ipertrofico - In caso di atrofia o ipertrofia, deve essere uniforme per tutti i cicli della paziente. 06
8 PIONEERS IN REPRODUCTIVE GENETICS Biopsia Terapia ormonale sostitutiva La paziente inizierà con l estradiolo dal primo o secondo giorno del ciclo mestruale. Si realizzerà un ecografia 7-10 giorni dopo l inizio della somministrazione di estradiolo. Quando un endometrio trilaminare > 6mm viene raggiunto da un progesterone sierico < 1ng/ml, si può iniziare l assunzione di progesterone. Il progesterone verrà somministrato per cinque giorni interi (120 ore). Stimolazione ovarica controllata La biopsia può essere prelevata nel prossimo ciclo naturale o TOS. E2Days Ciclo naturale Si somministrerà l hcg sia ricombinante che urinaria secondo i parametri di routine in un ciclo naturale (dimensione del follicolo > 17 mm). La biopsia verrà prelevata 7 giorni (168 ore) dopo l'attivazione del hcg. P4Days P+0 P+1 P+2 P+3 P+4 P+5 Ultrasound: 6mm; Triple layer P4 <1ng/ml Biopsia 07
9 Biopsia e conservazione Biopsia Preparare e apporre un etichetta sul criotubo recante o le iniziali della paziente, la sua data di nascita e la data della biopsia o le iniziali della paziente e il MRN. Subito dopo aver introdotto la biopsia nel criotubo, agitare energicamente per 10 secondi. La quantità di tessuto dovrebbe raggiungere la linea bianca sul criotubo per preservare il materiale genetico. Non superare questa quantità. Conservazione Collocare immediatamente il campione di biopsia in un frigorifero (4-8 C / F) per almeno 4 ore. Questo campione conservato nel criotubo originale può essere successivamente spedito a temperatura ambiente. In alternativa, i campioni possono essere conservati in frigorifero per 3 settimane o congelati a -20 C (-4 F) (consigliati) fino al momento della spedizione. Il campione può essere successivamente spedito a temperatura ambiente (<35 C / 95 ºF). Consigliamo di aggiungere una borsa del ghiaccio per gli invii durante la stagione estiva. 08
10 Invio I campioni vengono inviati a temperatura ambiente insieme al consenso informato della paziente e a un modulo di richiesta compilato. I campioni spediti a temperatura ambiente devono arrivarci entro un massimo di 4-5 giorni. Per ulteriori informazioni riguardanti l imballaggio dei campioni, vi preghiamo di contattarci sul sito Confermare la spedizione accedendo al seguente link: 09
11 Risultati Interpretazione dei risultati Dopo l analisi è possibile ricevere due risultati: Ricettivo (R): Il profilo di espressione genica è simile a quello di un endometrio ricettivo normale. Si consiglia di procedere con il trasferimento embrionale nelle stesse condizioni, tipo di ciclo e giorno in cui è stata eseguita la biopsia endometriale. Non ricettivo (NR): Il profilo di espressione genica è simile a quello di un endometrio in fase non ricettiva. Si consiglia di prelevare una nuova biopsia endometriale per convalidare uno spostamento della finestra di impianto e guidare il trasferimento di embrioni personalizzato (pet). 10
12 Risultati Spostamento della finestra di impianto Personalizzazione del trasferimento dell embrione Embrione 3º giorno Continua a svilupparsi Embrione 5º giorno Impianto Endometrio Pre-ricettivo Ricettivo Post-ricettivo CICLO TOS P+0 P+5 Paziente ricettiva a P+4 P+0 P+1 P+2 P+3 P+4 P+5 P+6 P+7 P+... Finestra di impianto standard (ERA P+5: R) Finestra di impianto posticipata (ERA P+5: PRE) Finestra di impianto anticipata (ERA P+5: POST) Paziente ricettiva a P+7 Paziente ricettiva a P+5 Inizio progesterone Inizio progesterone P+0 P+1 P+2 P+3 P+4 P+5 P+6 P+7 P+8 P+... P+0 P+1 P+2 P+3 P+4 P+5 P+6 P+7 P+8 P+... Pre-ricettivo Inizio progesterone Stato dell endometrio Ricettivo Post-ricettivo 11
13 PIONEERS IN REPRODUCTIVE GENETICS Risultati Albero decisionale ERA P+5 R: Ricettivo NR: Non Ricettivo pet: Trasferimento embrionale personalizzato Test ERA P+4 P+7 Diagnosi R 2º test ERA NR Diagnosi pet Campioni non analizzati R NR Valutazione del trattamento Analisi del profilo genetico RNA non valido (3%), cause potenziali: - Temperature alte (>35º) - Dimensione del campione troppo grande - Troppo sangue o muco RNA insufficiente (2,5%), cause potenziali: - Dimensione del campione troppo piccola - Troppo sangue o muco NO CHARGE Non rilevante (1%) 12
14 Esito clinico Risultati aggiornati in data 11/2017
15 Risultati 20,000 pazienti 71.4% Ricettivo 28.6% Non Ricettivo 2.4% Proliferativo 85% Pre-Ricettivo 12.6% Post-Ricettivo 54 paesi Più di 600 cliniche 14
16 Esito clinico in pazienti FRI e controlli N. di pazienti Età (anni) N. DI ERA RICETTIVI / TOTALE ANALIZZATO (%) N. di cicli falliti previamente Totale pazienti con pet post ERA ricettivo Tasso di impianto dopo il 1º pet (%) Tasso di gravidanza dopo il 1º pet (%) Gravidanze biochimice (%) Aborti clinici (%) Pazienti con donazione di ovuli / Totale (%) Pazienti con pet post ERA RICETTIVO Tasso di impianto dopo il 1º pet (%) Tasso di gravidanza dopo il 1º pet (%) Gravidanze biochimice (%) Aborti clinici (%) Pazienti FIV/ICSI / Totale (%) Pazienti con pet post ERA RICETTIVO Tasso di impianto dopo il 1º pet (%) Tasso di gravidanza dopo il 1º pet (%) Gravidanze biochimice (%) Aborti clinici (%) FRI ± /85 (74.1) 4.8 ± /56 (33.9) 15/29 (51.7) 3/15 (20.0) 0/15 (0.0) 22/63 (34.9) 16 12/33 (36.4) 9/16 (56.2) 2/9 (22.2) 0/9 (0.0) 41/63 (65.1) 13 7/23 (30.4) 6/13 (46.2) 1/6 (16.7) 0/6 (0.0) Controllo ± /25 (88.0) 0.5 ± /20 (55.0) 9/11 (81.8) 2/9 (22.2) 0/9 (0.0) 13/22 (59.1) 8 7/15 (46.7) 6/8 (75.0) 1/6 (16.7) 0/6 (0.0) 9/22 (40.9) 3 4/5 (80.0) 3/3 (100.0) 1/3 (33.3) 0/3 (0.0) N. DI ERA NON RICETTIVI / TOTALE ANALIZZATO (%) N. di cicli falliti previamente Pazienti con donazione di ovuli / Totale (%) Pazienti FIV/ICSI / Totale (%) 22/85 (25.9) 5.0 ± /22 (50.0) 11/22 (50.0) 3/25 (12.0) 0.3 ± 0.6 2/3 (66.6) 1/3 (33.3) *Trasferimento embrionale personalizzato pet Pubblicazione IGENOMIX: Ruiz-Alonso M. et al. - Fertil Steril 2013; 100(3):
17 Esito clinico in pazienti con ERA ricettivo 80 Risultati pet post ERA ricettivo in pazienti con FRI (n=310) PR IR 70 Risultati del primo trasferimento embrionale dopo un test ERA RICETTIVO Tasso (%) Mesi dopo il test ERA Numero di pazienti Tasso di impianto (%) Tasso di gravidanza (%) ,9 43,1 44,6 45,8 58,3 48,6 54,9 59,8 55,3 53,3 73,3 70,0 16
18 PIONEERS IN REPRODUCTIVE GENETICS Esito clinico in pazienti con ERA non ricettivo Assegnazione di una finestra di impianto dei campioni non ricettivi Il programma di calcolo predittivo e l analisi dei gruppi indicano che i campioni Non ricettivi si classificano come Pre-ricettivi o Post-ricettivi e quindi si consiglia una personalizzazione della finestra di impianto con un secondo ERA. 17
19 Esito clinico in pazienti con ERA non ricettivo Esempio del caso 6272 Caso 6272 P+5 Caso 6272 P+7 Proliferativo Pre-ricettivo Ricettivo Post-ricett. 18
20 Esito clinico in pazienti con ERA non ricettivo: FRI e controlli N. di pazienti N. di pazienti FRI con cicli falliti previamente N. di pazienti di controllo con cicli falliti previamente Previsione ERA Pre-ricettivo Post-ricettivo 2º ERA nel giorno specificato (P+4;P+6;P+7;LH+9)a Mesi trascorsi tra il 1º e il 2º ERA 2º ERA ricettivo nel giorno specificato Pazienti con petb dopo il 2º ERA RICETTIVO Mesi trascorsi tra il 2º ERA RICETTIVO e il pet Tasso di impianto con pet Tasso di gravidanza con pet Gravidanze biochimice (%) Aborti clinici (%) Non ricettivo ± ±0.6 21/25 (84.0) 4/25 (16.0) ± ±0.7 5/13 (38.5) 4/8 (50.0) 0/4 (0.0) 0/4 (0.0) Pubblicazione IGENOMIX: Ruiz-Alonso M. et al. - Fertil Steril 2013; 100(3): a Il giorno specificato per il 2º ERA è stato calcolato tramite il test ERA in base al profilo genetico di ciascun campione. b Il pet implica realizzare il trasferimento degli embrioni alle stesse condizioni nelle quali è stato ottenuto un ERA ricettivo. In questi pazienti era nelle stesse condizioni in cui è stato eseguito il secondo ERA. 19
21 Esito clinico Caso clinico pubblicato riguardante l applicabilità clinica del test ERA in una paziente FRI Trattamenti PMA precedenti Trattamenti PMA nel nostro centro Lavoro di routine negativo 1. FIV con ET fresco 3º giorno 2. FIV con ET fresco 3º giorno 3. FIV con ET fresco 5º giorno 4. FIV con ET congelato 5º giorno in un ciclo naturale 5. OD con ET 3º giorno in un ciclo TOS (P+2) 6. OD con ET 3º giorno in un ciclo naturale 7. OD con ET 5º giorno in un ciclo TOS (P+5) INTERVENTO Identificazione della WOI personalizzata (test ERA ) ET: Trasferimento Embrionale TOS: Terapia Ormonale Sostitutiva FIV: Fecondazione In Vitro OD: Donazione degli Ovuli WOI: Finestra di Impianto Pubblicazione IGENOMIX: Ruiz-Alonso, et al. Hum Reprod Jun;29(6): OD con ET 5º giorno in un ciclo TOS (P+7) Gravidanza gemellare riuscita 20
22 Esito clinico ESITO CLINICO Dati provenienti da uno studio pilota che confronta il trasferimento di embrioni congelati (FET) con il trasferimento embrionale personalizzato (pet) nello stesso gruppo di pazienti. I pazienti sono stati sottoposti a un FET prima di eseguire il loro primo test ERA, in un giorno che è stato successivamente diagnosticato come non ricettivo dall ERA. I pazienti hanno quindi ricevuto un pet nel giorno di ricezione, dopo la conferma da una seconda biopsia ERA. Primo tentativo Numero di pazienti Origine degli ovociti Età Tentativi totali Numero di embrioni trasferiti Tasso di impianto Tasso di gravidanza Tasso di gravidanze in corso Aborto clinico ET pet 17 Donazione degli ovuli 40.7 ± ± ± ± ± % 40.0% 19.4% 60.0% 0% 75.0% 71.4% 0% Pubblicazione IGENOMIX: Ruiz-Alonso, et al. Hum Reprod Giugno;29(6): Gravidanza biochimica 28.6% 25.0% 21
23 Esito clinico Dati che confrontano l esito clinico dei pazienti con ET prima di eseguire il loro primo test ERA, in un giorno che è stato successivamente diagnosticato come non ricettivo dal test ERA, con il risultato clinico dei pazienti che hanno eseguito il pet nel giorno di ricezione secondo il risultato del test ERA. Esito clinico IR primo tentativo IR tentativi totali PR primo tentativo PR tentativi totali OPR primo tentativo OPR tentativi totali NR (100) 12% (21/175) 10% (34/332) 20% (20/100) 18% (33/186) 0% (0/20) 0% (0/33) R (400) 45% (312/692) 42% (367/866) 58% (233/400) 56% (278/496) 76% (178/233) 76% (211/278) IR: Tasso di impianto PR: Tasso di gravidanza OPR: Tasso di gravidanze in corso 22
24 Ricettività e obesità Categoria IMC Normale ( ) (n=163) Sovrappeso ( ) (n=47) Obeso ( 30) (n=11) Età (media) IMC (medio) % non ricettivi Pazienti ERA 25.2% 25.5% 36.4% Lathi R B et al, PCRS. 23
25 Ricettività e spessore endometriale Spessore endometriale (mm) < >12 Ricettivo 6/4 (42.85%)* 333/431 (77.26%)* 24/37 (64.86%) Non ricettivo 8/14 (57.14%)* 98/431 (22.73%)* 13/37 (35.13%) P: by Chi-square test Pubblicazione IGENOMIX: Valbuena D et al, 2016 ESHRE. 24
26 PIONEERS IN REPRODUCTIVE GENETICS Lo studio controllato randomizzato prospettico presentato all ASRM mostra il miglioramento dei tassi di gravidanza e dei tassi di gravidanza in corso. Studio controllato randomizzato ERA ET freschi Premiato Società per l'endocrinologia Riproduttiva e l'infertilità (SREI) Il nostro studio PROSPETTICO E RANDOMIZZATO SUL TEST PER L ANALISI DELLA RICETTIVITÀ ENDOMETRIALE (ERA ) NEGLI ESAMI PRELIMINARI SULLA STERILITÀ PER ORIENTARE IL TRASFERIMENTO DI EMBRIONI PERSONALIZZATO RISPETTO AL TRASFERIMENTO DI EMBRIONI FRESCHI O AL TRASFERIMENTO DIFFERITO DEGLI EMBRIONI* ha ricevuto il premio Prize Paper dalla Società per l Endocrinologia Riproduttiva e l Infertilità durante il meeting annuale ASRM di quest anno. ET differiti ET personalizzato Pazienti (n) Trasferimenti (n) T. di gravid./et (%) 61.7% 60.8% 85.7 %* Tasso di impianto (%) 35.3% 41.4% 47.8% Tasso di gravidanze in corso / ET (%) 43.3% 44.6% 55.1% *p=0,003 tramite test Chi quadrato Il test ERA migliora il risultato clinico 90,0% 80,0% 70,0% 60,0% 50,0% 40,0% 30,0% 20,0% 10,0% 0,0% Tasso di impianto ET freschi ET differiti Tasso di gravidanza/et ET personalizzato Tasso di gravidanze in corso / ET p=0,003 tramite test Chi quadrato 25
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