Significato dell analisi delle aneuploidie ovocitarie

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Benedetta Falco
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1 Master in Medicina della Riproduzione Abano Terme, 27 marzo 9 Popolazione di coppie infertili che eseguono cicli PMA Significato dell analisi delle aneuploidie ovocitarie Good prognosis patients D. Zuccarello Popolazione di coppie infertili che eseguono cicli PMA Popolazione di coppie infertili che eseguono cicli PMA Poor responders Età riproduttiva avanzata Poor prognosis patients Coppie con un fattore estremo di infertilità maschile Coppie con precedenti trasferimenti ( 3) senza gravidanza Coppie con aborti ripetuti Poor prognosis patients rischio di produrre embrioni con aneuploidie incompatibili con impianto e/o gravidanza a termine 1

2 Elective cryopreservation of all 2PN in OHSS risk cycles BEFORE THE LAW Egg retrieval Insemination of all oocytes (IVF or ICSI) Fertilization control Embryo culture Transfer of the best 2 embryos PGD-AS PGD for aneuploidy in poor prognosis patients undergoing ART N patients 9 N cycles 828 Age (M SD) N diagnosed embryos 4213 FISH normal (%) 1381 (33) FISH abnormal (%) 2832 (67) Monosomy trisomy (%) 1172 (41) N transferred cycles (%) 2 (67) N transferred embryos (M SD) 1.8±.7 N clinical pregnancies (%) 162 (29) N spontaneous abortions (%) 26 (16) Implantation rate (%).4 Implantation rate / pregnant patient (%) 6.3 Take-home baby rate / patient (%) 23 Cryopreservation of surplus embryos AFTER THE LAW Egg retrieval Pregnancy according to female age Cryopreservation of all oocytes in OHSS risk cycles Cumulus removal Insemination of 3 mature oocytes Embryo culture Cryopreservation of surplus oocytes PR Age (yrs) < >43 3 P< Pre Law Post Law Transfer of all vital embryos without any selection 2

3 Abortion according to female age AFTER THE LAW Egg retrieval 3 2 AR 1 P<. Pre Law Post Law Cryopreservation of all oocytes in OHSS risk cycles Cumulus removal Insemination of 3 oocytes FISH analysis Age (yrs) < Embryo culture Transfer of all vital embryos Screening ovocitario mediante analisi genetica del 1 Globulo polare Chromosomal abnormalities in a series of 6733 human oocytes in preimplantation diagnosis for age-related aneuploidies Kuliev et al., RBM Online, 2 Table 1. Overall nuclear abnormalities detected by polar body PB1 and PB2 FISH analysis using probes for chromosomes 13, 16, 18, 21 and Limiti - Efficacia - Efficienza Couples > 3 yrs 82 Cycles 1297 Total oocytes studied 8382 Oocytes with FISH results 6733 (8%) No. FISH normal oocytes (%) 3224 (48) No. FISH abnormal oocytes (%) 39 (2) Normal oocytes (%) 3224 (47.9) Abnormal oocytes (%) 39 (2.1) Meiosis I errors 42 % Meiosis II errors 29 % Both 29 % Detected on 1st ~7% Ferraretti AP - SISMER 3

4 CHROMOSOMAL ANALYSIS ON 1 st POLAR BODY Team - clinicians Oocyte Pick Up IVF laboratory Oocyte screening 1 hour Team - biologists Cytogenetic laboratory MI, GV In Vitro Maturation MII MII PB Biopsy Fixation Hybridization probes for chromosomes Insemination of Chromosomally Normal Oocytes 6 hrs after oocyte pick up Results Biopsia del 1 Globulo Polare vs PGD-AS in coppie con precedenti fallimenti (> 3 cicli) ( analisi retrospettiva dopo e prima della legge) Biopsia del 1 Globulo Polare vs PGD-AS in coppie con abortività ricorrente sine causa (analisi retrospettiva dopo e prima della Legge) Biopsia del 1 GP PGD-AS Biopsia del 1 GP PGD-AS n. di cicli Età n. di ovociti/embrioni analizzati n. risultati normali alla indagine FISH n.di trasferimenti n.medio di embrioni trasferiti n.di gravidanze cliniche (% per ET) n. di aborti (%) % di gravidanza a termine (e/o > 3 sett.) / ciclo (49%) (32%) 18% 2 (12%) 2% (41%) (39%) 27% 4 (%) 28% n. di cicli Età n. di ovociti/embrioni analizzati n. risultati normali alla indagine FISH n.di trasferimenti n.medio di embrioni trasferiti n.di gravidanze cliniche (% per ET) n. di aborti (%) % di gravidanza a termine ( e/o > 3 sett.) / ciclo (43%) % % 4

5 vs no PB cycles Prospective study to select oocytes for insemination PB vs no PB Age < 3 yrs (178 cycles) No PB 4 3 Egg Retrievals N. MII analyzed No PB End points : - pregnancy rate - implantation rate - abortion rate Pregancy IR Abortion PB vs no PB Age 3-38 yrs ( 131 cycles ) PB vs no PB Age yrs (1 cycles ) NO PB 1 NO PB Pregnancy IR Abortion Pregnancy IR Abortion

6 Analisi del 1 globulo polare negli ovociti crioconservati CHROMOSOMAL ANALYSIS ON OOCYTES INCIDENCE OF ANEUPLOIDY IN RELATION TO MATERNAL AGE Cicli di scongelamento Età Ovociti scongelati Sopravvissuti Analizzati Inseminati Trasferimenti (n.embrioni / ET) Gravidanze cliniche Aborti Analisi del 1 GP (73%) (1.7±.) 8 (21%) 1 (12.%) 13 % Non analisi (77%) (1.7±.7) 12 (14.4%) 3 (2%) 8.% % AGE ab b a < yrs a P<.1 b P<. % FREQUENCY OF ANEUPLOIDY IN OOCYTES ACCORDING TO AGE b c a CHROMOSOMAL ANALYSIS ON OOCYTES No. observations= 716 ab yrs c a P<. b P<. c P<.2 Numero cicli % di fertilizzazione Cicli trasferiti Embrioni trasferiti (M) % di aborto Risultati cumulativi Analisi del 1 globulo polare (1.7) 1.9% 11. n.s P <. Non analisi %

7 Abortion rate Conclusioni Age (yrs) < >38 Pre Law Post Law with PB Post Law without PB La biopsia precoce del 1 globulo polare allo scopo di ottenere il risultato FISH prima della inseminazione non riduce la successiva % di fecondazione e di sviluppo embrionale in vitro. A causa dei limiti della tecnica FISH e dei limiti imposti dalla normativa vigente, la efficacia della selezione ovocitaria mediante analisi del 1 glopulo sembra oggi essere limitata ad uno solo degli end points primari: la riduzione significativa degli aborti precoci. Il potenziamento della procedura o la messa a punto di nuove tecnologie in grado di mappare tutti i cromosomi di una cellula in tempi brevissimi ( array CGH ), potrà in futuro rendere la indagine molto più efficace. Array CGH Se analisi 1PB: vitrificazione ovociti! Dati non disponibili! 7

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