Test genetico per lo studio del microbioma endometriale, utile ad aumentare il successo riproduttivo e indicato nei percorsi di fecondazione

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Arnoldo Calo
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1 Test genetico per lo studio del microbioma endometriale, utile ad aumentare il successo riproduttivo e indicato nei percorsi di fecondazione assistita.

2 Lo studio del microbioma endometriale favorisce il successo riproduttivo Il delicato equilibrio tra le specie batteriche che colonizzano l endometrio è un elemento chiave durante l impianto dell embrione e, in condizioni normali, la specie colonizzante più presente è il Lactobacillus. In presenza di disbiosi, o batteri patogeni, il microbiota endometriale alterato può sfavorire l impianto della gravidanza 1. Batteri patogeni Staphylococcus, Streptococcus, Enterococcus, Mycoplasma, Ureaplasma, Enterobacteria (Escherichia, Klebsiella), Chlamydia and Neisseria. Disbiosi batterica Bifidobacterium, Prevotella, Sneathia, Atopobium, Veillonella Microbiota ottimale Lactobacillus La presenza di batteri patogeni può essere causa di infezioni, fallimento dell impianto embrionale o aborto. Un equilibrio batterico alterato può essere causa di fallimento dell impianto embrionale. Un equilibrio batterico conservato favorisce il successo riproduttivo e aumenta le chance di impianto dell embrione. 1) Moreno et al. Am J Obstet Gynecol 2016; 215:

3 Il più importante esempio di patologia causata da un alterazione del microbiota endometriale è l endometrite cronica (CE). La CE è caratterizzata da persistente infiammazione delle mucose ed è spesso asintomatica e non evidenziabile ai controlli ecografici. Si stima che nel 39% degli insuccessi riproduttivi la donna sia affetta da CE, fino a percentuali di 60% in donne con aborti ricorrenti (RPL) e 66% in donne caratterizzate da ripetuti fallimenti 2-3. Neisseria Chlamydia Staphylococcus Prevotella Streptococcus Sneathia Enterococcus Atopobium Mycoplasma Veillonella Ureaplasma Bifidobacterium Enterobacteriaceae Lactobacillus 2) Cicinelli et al. Reprod Sci 2014; 21(5): ) Cicinelli et al. Hum Reprod, 2015; 30(2):

4 La nuova dimensione dello studio del microbioma endometriale in grado di aumentare i tassi di successo riproduttivo Endometriome è un test di screening per lo studio del microbioma endometriale. Il test migliora la gestione delle coppie con pregressi di insuccessi riproduttivi. Endometriome è un test di screening per lo studio della composizione della flora batterica endometriale. Il test identifica la presenza dei 10 più rappresentati batteri presenti a livello endometriale, oltre ad 8 batteri patogeni responsabili di endometrite cronica (CE). Endometriome è un test di screening che permette di stabilire quando l ambiente microbico uterino è ottimale per l impianto embrionale. In seguito agli esiti del test lo specialista può consigliare di trasferire l embrione o di attendere ed eseguire un trattamento probiotico utile a ristabilire l ambiente microbico ottimale. Endometriome è un test di screening utile a identificare processi non diagnosticati di endometrite cronica causati dalla presenza di patogeni per i quali sarebbe utile un trattamento antibiotico o probiotico (secondo raccomandazione dello specialista).

5 Benefici Endometriome permette di valutare la percentuale di lactobacillus nel microbiota endometriale. Nel caso in cui il referto suggerisca una disbiosi, o la presenza di patogeni, è possibile proporre con appropriatezza un trattamento correttivo. Endometriome permette allo specialista di scegliere con consapevolezza il momento in cui è opportuno trasferire l embrione. Endometriome determina quali patogeni siano responsabili di un eventuale sottostante endometrite cronica per proporre una adeguata cura antibiotica. 5

6 Indicazioni Endometriome È un test utile in caso di: Pazienti con ripetuti fallimenti d impianto dell embrione (RIF) Pazienti con aborti ricorrenti (RPL) Tutte Ie pazienti che intendono avere un figlio per valutare la presenza di disbiosi o CE non diagnosticati che potrebbero interferire negativamente sull impianto dell embrione

7 Tecnologia Endometriome è un test di screening, eseguito mediante l utilizzo di Next Generation Sequencing (NGS), in grado di produrre un preciso e completo profilo del microbioma endometriale a partire da un campione di tessuto o di fluido endometriale. Il test fornisce informazioni anche sui batteri patogeni causa di CE. Il workflow d analisi prevede l estrazione e l amplificazione del DNA, e successivamente il sequenziamento mediante barcoded sequencing delle 7 regioni ipervariabili (V2, V3, V4, V6, V7, V8, and V9) del gene ribosomiale batterico 16S (rrna) 4-5. Tale gene batterico, conservato in tutte le specie batteriche, presenta regioni variabili con sequenze di DNA specie-specifiche. Tale aspetto permette l assegnazione tassonomica e la quantificazione di ogni batterio presente nel campione. 4) Franasiak et al. J Assist Reprod Genet 2016;33: ) Tao et al. Hum Microbiome J 2017;3:

8 Come funziona In caso di ricerca di patogeni causa di endometrite cronica Raccolta del campione Tessuto o fluido endometriale Estrazione del DNA Analisi NGS Refertazione Trattamento antibiotico in caso di positivo 1. Raccolta del Campione (tessuto o fluido endometriale) 2. Estrazione del DNA In caso di studio dell'ambiente d'impianto dell'embrione 3. Analisi Next generation sequencing (NGS) 4. Refertazione con indicazioni sulla necessità o meno di eseguire un trattamento correttivo 5. Trattamento correttivo della disbiosi o impianto 8

9 Campioni Endometriome è un test di screening che può essere eseguito a partire da una campione di tessuto o di fluido endometriale. Endometriome è un test di screening che può essere eseguito tra il 15 e il 25 giorno del ciclo mestruale, durante la fase secretiva endometriale nei cicli sostitutivi con terapia ormonale (HRT). Endometriome è un test di screening che fornisce informazioni sull ambiente microbico intrauterino: Referti Percentuale dei Lactobacilli Percentuale dei batteri più rappresentati nel campione Condizione di eubiosi o disbiosi endometriale Identificazione e caratterizzazione delle specie che causano endometrite cronica CE (Enterococcus spp., Enterobacteriaceae, Streptococcus, Staphylococcus, Mycoplasma, e Ureaplasma). Identificazione e caratterizzazione delle specie patogene che causano malattie sessualmente trasmissibili (Chlamydia e Neisseria). 9

10 Refertazione POSITIVO Il test ha rilevato la presenza di batteri che causano disbiosi o di batteri patogeni. Nel microbioma endometriale analizzato Lactobacillus non è la specie dominante (<90%). I batteri patogeni eventualmente rilevati sono correlati a sviluppo di CE (Enterococcus, Enterobacteriaceae, Streptococcus, Staphylococcus, Mycoplasma, and Ureaplasma) o di malattie sessualmente trasmissibili (Chlamydia and Neisseria spp). Un risultato positivo è fortemente correlato con insuccesso riproduttivo (fallimento nell impianto dell embrione e aumento del rischio di aborto). NEGATIVO Il microbioma endometriale analizzato si presenta normale (Lactobacillus come specie dominante 90%), 10

11 5 veloci STEPS Richiesta del box Endometriome Compilazione del form di richiesta e del consenso informato con i dati della paziente Raccolta del campione (biopsia endometriale o campione di fluido endometriale) Invio del campione al Laboratorio Ricezione del referto in 10 giorni 11

12 Soluzioni diagnostiche all avanguardia dedicate alla medicina della riproduzione Test eseguito in Italia (Roma o Milano) Oltre 20 anni di esperienza in diagnostica molecolare Accreditamento ISO e accreditamento SSN Oltre esami genetici ogni anno Tempi di refertazione: 10 giorni Team di genetisti Test distribuito in tutto il mondo Team di ricerca e sviluppo Numerose pubblicazioni sulle riviste di settore più quotate design by evermind.it - Endometriome B rev.00 ROMA laboratori e studi medici Via Castel Giubileo, Roma (RM) Tel.: (6 PBX lines) - Fax: info@laboratoriogenoma.eu MILANO - laboratori e studi medici Via Enrico Cialdini, 16 (Affori Centre) Milano (MI) Tel.: (12 PBX lines) - Fax: info@genomamilano.it

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