ALTERNANZA SCUOLA LAVORO IN ISS
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- Evangelina Forti
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1 ALTERNANZA SCUOLA LAVORO IN ISS Percorso BC /02/2019 Messaggeri intracellulari, centraline energetiche, segnali elettrici Come il sistema nervoso usa l energia per propagare l informazione Studenti: Bianchi Luca Liceo M. Montessori D Errico Matthias Liceo Pasteur Tutor: Sergio Visentin; Marcello Belfiore; Antonietta Bernardo
2 Familiarizzazione con il laboratorio Obbiettivo: familiarizzare con semplici strumenti da laboratorio per poi seguire le procedure necessarie per il mantenimento di colture cellulari
3 Esperimento di immunofluorescenza indiretta Abbiamo seguito le procedure (distacco e cambio di terreno) necessarie al mantenimento delle colture cellulari (Astrocitomi) perché potessimo sperimentare l Immunofluorescenza, metodo con il quale è possibile marcare precisi antigeni tramite fluorescenza.
4 Immunofluorescenza Nucleo Citoscheletro Mitocondri
5 Esperimento di registrazione del potenziale di membrana mitocondriale Scopo Misurazione del potenziale di membrana mitocondriale in un esperimento di video-fluorescenza Visualizzazione dell effetto di un agente che depolarizza i mitocondri (disaccoppiante mitocondriale chiamato FCCP). Disegno sperimentale Si è utilizzata una sonda denominata TMRE per la misurazione del potenziale di membrana mitocondriale (mmp) in un esperimento di video-fluorescenza; Intensità di fluorescenza (potenziale mitocondriale) Pixel Pixel Pixel Cos è il TMRE: sonda fluorescente cationica (carica +) che si localizza nei mitocondri tanto più il loro potenziale di membrana è negativo.
6 Esperimento di registrazione del Ca+² intracellulare Introduzione: Lo ione Ca+² è utilizzato dall organismo come messaggero intracellulare. Mantenuto dalla cellula a bassa concentrazione nel citoplasma, questa varia in risposta a certi stimoli. Scopo: Valutare l effetto sulla cellula di una sostanza, la ionomicina, che provoca un aumento della concentrazione di ioni Calcio nel citoplasma. Calcio (Ratio 340/380) Tempo (sec) Tempo (sec) 10 sec. 60 sec. 300 sec.
7 Esperimento di elettrofisiologia con la tecnica del patch-clamp L elettrofisiologia studia le proprietà elettriche delle cellule: potenziale di membrana, correnti ioniche. Il potenziale di membrana è dovuto alla diversa distribuzione degli ioni dentro e fuori la cellule, a loro volta dovuti a meccanismi che consumano energia, quindi dipendenti dai mitocondri. Potenziale d azione Na + K + Correnti ioniche Nelle cellule eccitabili il potenziale d azione è una variazione di potenziale che si propaga come un onda lungo l assone. Scopo: registrazione di potenziali d azioni, di corrente complessiva cellulare e da singolo canale
8 Esperimento di elettrofisiologia Esperimento: si costruiscono gli elettrodi di vetro a punta molto piccola e lo si riempie di salina. Al microscopio e con l uso di un micromanipolatore si avvicina la punta dell elettrodo alla cellula. Si applica una suzione per migliorare l adesione elettrodo/membrana (cell-attach), se sei fortunato trovi un canale e ne registri l attività: Canali ionici singoli Applichi altra suzione fino a rompere la membrana dentro la bocca dell elettrodo (whole-cell) Potenziale d azione Correnti di membrana
9 Il gruppo che ci ha ospitato utilizza queste tecniche per l identificazione di farmaci che, agendo sulla biogenesi e protezione mitocondriale, siano capaci di promuovere: l attività astrocitaria, la mielinizzazione l attività neuronale.
10 Ringraziamo l ISS per averci fornito gli strumenti per la nostra esperienza, e i tutor che, grazie alla loro formazione, ci hanno trasmesso la passione per queste attività GRAZIE PER L ATTENZIONE
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