BBL Haemophilus Test Medium Agar

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1 BBL Haemophilus Test Medium Agar L Rev. 09 giugno 2017 PROCEDURE DI CONTROLLO DI QUALITÀ I II III INTRODUZIONE è un terreno agar destinato all uso in test di sensibilità agli antibiotici mediante disco-diffusione per Haemophilus spp. PROCEDURA DEL TEST 1. Inoculare i campioni rappresentativi con le colture sotto elencate. a. Preparazione dell inoculo Preparare una sospensione del microrganismo in brodo BD BBL Mueller Hinton o brodo BD BBL Mueller Hinton II. Correggere la sospensione in modo da ottenere 0,1 unità di assorbanza a 625 nm. Questa sospensione conterrà circa 1 4 x 10 8 UFC/mL. b. Entro 15 min dalla correzione della torbidità dell inoculo, immergere un tampone sterile nella sospensione di brodo. Comprimere il tampone ruotandolo varie volte sulla parete interna della provetta, al di sopra del livello del liquido, per rimuovere dal tampone l inoculo in eccesso. c. Inoculare la superficie della piastra strisciando il tampone su di essa. Ripetere questa procedura altre due volte, ruotando ogni volta la piastra di 60 gradi. d. Coprire la piastra con l apposito coperchio e attendere almeno 3 min ma non più di 15 per consentire l assorbimento dell inoculo, prima di applicare i dischi per i test di sensibilità agli antibiotici BD BBL Sensi-Disc. e. Usando il dispensatore BD BBL Sensi-Disc da 6 od 8 posti per piastre da 100 mm e il sistema dispensatore BD BBL Sensi-Disc Designer da 12 posti per piastre da 150 mm, posizionare i dischi appropriati sulle rispettive colture. Posizionare al massimo quattro e nove dischi antibiotici su piastre singole rispettivamente da 100 mm e da 150 mm, inclusi non più di sei dei dischi seguenti: cefalosporine di terza generazione, aztreonam, imipenem o ciprofloxacina. f. Entro 15 min dall applicazione dei dischi, capovolgere le piastre e incubare a 35 ± 2 C in ambiente aerobico arricchito di anidride carbonica al 5%. 2. Esaminare le piastre dopo h e misurare i diametri delle zone complete di inibizione, arrotondando al millimetro. Assumere come endpoint l area che non evidenzia alcuna crescita visibile; ignorare la crescita debole di colonie minute rilevabili con difficoltà all estremità della zona di inibizione. Con trimetoprim e sulfonamidi, ignorare una crescita modesta (non oltre il 20% del piano di crescita) e misurare il margine più evidente per determinare il diametro della zona. 3. Risultati attesi a. Microrganismi per il test * Haemophilus influenzae ATCC * Haemophilus influenzae ATCC Haemophilus influenzae ATCC (per la verifica delle proprietà favorenti la crescita) b. Le dimensioni della zona devono rientrare nei limiti del controllo di qualità per i diametri di zona accettabili per H. influenzae, specificati dal Clinical and Laboratory Standards Institute. Tali limiti sono pubblicati nel documento CLSI M100-S17 (M2), incluso nel documento CLSI M2-A9, Performance Standards for Antimicrobial Disk Susceptibility Tests, 9th ed.; Approved Standard. 1 Vengono periodicamente pubblicate tabelle integrative, contenenti tabelle aggiornate dei dischi di antibiotici e dei criteri di interpretazione. Consultare le tabelle più recenti e seguire le raccomandazioni vigenti. Per maggiori informazioni, vedere il riquadro nel paragrafo RISULTATI nella sezione INFORMAZIONI SUL PRODOTTO. c. La crescita di H. influenzae ATCC deve essere moderata intensa. *Ceppo batterico raccomandato per il controllo di qualità a cura dell utente. CONTROLLO DI QUALITÀ SUPPLEMENTARE 1. Esaminare le piastre come descritto in Deterioramento del prodotto. 2. Eseguire un esame visivo delle piastre rappresentative per garantire che l eventuale presenza di difetti fisici non interferisca con l uso. 3. Determinare il ph mediante potenziometria a temperatura ambiente per verificare che rientri nel range specificato di 7,3 ± 0,1. 4. Verificare la stabilità delle piastre durante la procedura di inoculo. 5. Incubare a 35 ± 2 C per 72 h le piastre rappresentative non inoculate ed esaminarle per verificare la contaminazione microbica. INFORMAZIONI SUL PRODOTTO IV V USO PREVISTO (HTM Agar) è un terreno agar destinato all uso in test di sensibilità agli antibiotici mediante disco-diffusione per Haemophilus spp. come descritto nella norma Approved Standard M2-A9, pubblicata dal Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI). 1 SOMMARIO E SPIEGAZIONE Nel 1966, Bauer, Kirby et al. svilupparono una procedura standardizzata per i test di sensibilità agli antibiotici di comuni batteri a crescita rapida utilizzando come terreno di test l agar BD BBL Mueller Hinton. 2-4 Questo terreno non è però soddisfacente per microrganismi esigenti come streptococchi, gonococchi ed Haemophilus spp. L Italiano

2 VI VII Il terreno in precedenza raccomandato per Haemophilus influenzae era l agar BD BBL Mueller Hinton supplementato con emoglobina all 1% e BD BBL IsoVitaleX Enrichment all 1% (agar cioccolato BD BBL Mueller Hinton). 5 Jorgensen et al. condussero studi approfonditi che portarono allo sviluppo di BD BBL Haemophilus Test Medium (HTM). 6,7 Questo terreno è un agar BD BBL Mueller Hinton o brodo supplementato con fattore X (emina o ematina), fattore V (nicotinamide-adenin dinucleotide, NAD) ed estratto di lievito. Un importante vantaggio dell agar BD BBL HTM rispetto all agar cioccolato BD BBL Mueller Hinton è la chiarezza ottica, che consente misurazioni dei diametri di zona dal fondo della piastra come nella procedura di test standard per microrganismi non esigenti su agar BD BBL Mueller Hinton. L agar BD BBL HTM contiene inoltre bassi livelli di timidina ed è pertanto adatto per testare trimetoprim/sulfometoxazolo. I criteri di interpretazione per i test di sensibilità agli antibiotici di Haemophilus sono illustrati nel documento CLSI M100-S17 (M2), 8 a sua volta incluso nel documento CLSI M2-A9, 1 a cui si rimanda per ulteriori dettagli. PRINCIPI DELLA PROCEDURA La procedura Bauer-Kirby si basa sulla diffusione in gel agar delle sostanze antibiotiche di cui sono impregnati i dischi di carta. A differenza delle prime metodiche che impiegavano dischi con concentrazioni di antibiotici basse e alte e la cui interpretazione si basava sulla presenza o assenza di zone di inibizione, questa metodica impiega dischi con una sola concentrazione di antibiotico e i diametri delle zone sono correlati alle concentrazioni minime inibenti (CMI). 1-3,9 La procedura del test prevede la distribuzione di una sospensione standardizzata del microrganismo su tutta la superficie del terreno. I dischi di carta impregnati di quantità specifiche di antibiotici o altri agenti antimicrobici vengono quindi posti sulla superficie del terreno, dopodiché la piastra viene incubata e si misurano le zone di inibizione intorno a ogni disco. Per decidere se la risposta del microrganismo all agente è sensibile, resistente o intermedia, i diametri delle zone così ottenuti vengono comparati con quelli riportati nel documento CLSI M100-S17 (M2). 8 È stato accertato che i test di sensibilità mediante disco-diffusione sono influenzati da svariati fattori quali il terreno, la profondità dell agar, la potenza del disco, la concentrazione dell inoculo, il ph e la produzione di β-lattamasi da parte dei microrganismi da testare. 1,5,9,10 REAGENTI Formula approssimata* per L di acqua purificata Estratto di carne bovina... 2,0 g Estratto di lievito...5,0 g Idrolizzato acido di caseina... 17,5 g Ematina... 15,0 mg Amido... 1,5 g Nicotinamide-adenin dinucleotide... 15,0 mg Agar... 17,0 g *Compensata e/o corretta per soddisfare i criteri di performance. Avvertenze e precauzioni Per uso diagnostico in vitro. Se si riscontra un umidità eccessiva, capovolgere il fondo su un coperchio e lasciare asciugare all aria per evitare la formazione di aderenze tra la parte superiore e inferiore della piastra durante l incubazione. Durante tutte le procedure, adottare techniche asettiche e seguire le precauzioni standard control i rischi microbiologici. Dopo l uso, le lastre preparate, i contenitori dei campioni e gli altri materiali contaminati devono essere sterilizzati in autoclave prima dello smaltimento. Istruzioni per la conservazione Al ricevimento, conservare le provette al buio a 2 8 C. Evitare congelamento e surriscaldamento. Aprire soltanto al momento dell uso. Ridurre al minimo l esposizione alla luce. Le piastre preparate, conservate nell involucro originario a 2 8 C sino al momento dell uso, possono essere inoculate fino alla data di scadenza e incubate per i tempi di incubazione raccomandati. Prima dell inoculo, attendere che il terreno si porti a temperatura ambiente. Deterioramento del prodotto Non usare le piastre se presentano tracce di contaminazione microbica, alterazione di colore, essiccamento o altri segni di deterioramento. VIII RACCOLTA E TRATTAMENTO DEI CAMPIONI Questo terreno non è destinato all uso diretto con campioni clinici o colture miste. Il test di sensibilità mediante disco-diffusione è destinato all uso con colture pure. Sono necessarie una colorazione di Gram e un identificazione presuntiva di Haemophilus. Per informazioni dettagliate sulle procedure di raccolta e trattamento dei campioni, consultare la documentazione appropriata. 11,12 IX PROCEDURA Materiale fornito Materiali necessari ma non forniti 1. Brodo per inoculo in provetta in aliquote di 5 ml, come per esempio brodo BD BBL Mueller Hinton, brodo BD BBL Mueller Hinton II o soluzione fisiologica allo 0,9% per la preparazione dell inoculo standard. 2. Standard McFarland 0,5 solfato di bario per la correzione dell inoculo (preparato dispensando 0,5 ml di 0,048 M BaCl 2 [1,175% peso/vol BaCl 2 2 H 2 O] a 99,5 ml di 0,18 M [0,36 N] H 2 SO 4 [1% vol/vol]). 3. Dispositivo fotometrico per correggere la torpidità della sospensione dell inoculo in modo da renderla equivalente allo standard McFarland 0,5. 4. In alternativa ai materiali suddetti (1 3), si può utilizzare il sistema di inoculo BD BBL Prompt (dispositivo di preparazione volumetrica dell inoculo). 13,14 5. Colture di controllo Haemophilus influenzae ATCC 49247, ATCC e ATCC Dischi di carta impregnati di quantità specifiche di agenti antimicrobici, come per esempio dischi per test di sensibilità BD BBL Sensi-Disc. L Italiano

3 X 7. Dispositivo di dispensazione dei dischi, come per esempio il dispensatore auto-applicatore da 12 posti BD BBL Sensi-Disc. 8. Dispositivo per la misurazione o l interpretazione dei diametri di zona con approssimazione al millimetro, come per esempio un calibro a cursore o un regolo. 1 In alternativa, a tale scopo si può utilizzare un set di interpretazione zone BD BBL Sensi-Disc (n. di catalogo ), costituito da calibri sagomati ed etichette di misurazione delle zone. 9. Un reagente o dispositivo per eseguire un test rapido delle β-lattamasi, come per esempio i dischi BD BBL Cefinase. 10. Un incubatore in grado di produrre un atmosfera contenente CO 2 al 5% o un altro dispositivo che produca aerobiosi arricchita di CO Terreni di coltura accessori, reagenti e apparecchiature di laboratorio necessarie. Procedura del test 1. Preparare una colorazione di Gram prima di iniziare i test di sensibilità per confermare la purezza delle colture e l identificazione tentativa di Haemophilus. 2. Usare alcune colonie ben isolate prelevate direttamente da una piastra di agar cioccolato incubata per una notte (preferibilmente h) come fonte di inoculo. 3. Per la rilevazione rapida di ceppi resistenti a penicillina, ampicillina o amoxicillina, usare un test rapido delle β-lattamasi. 4. Preparare una sospensione del microrganismo da testare in brodo BD BBL Mueller Hinton, brodo BD BBL Mueller Hinton II o soluzione fisiologica allo 0,9%. Con l ausilio di un dispositivo fotometrico, correggere questa sospensione per portarne la torbidità allo standard McFarland 0,5. Questa sospensione conterrà circa 1 4 x 10 8 UFC/mL. Prestare attenzione durante la preparazione della sospensione perché concentrazioni di inoculo superiori possono determinare risultati falsamente resistenti con alcuni antibiotici β-lattamici, soprattutto quando si testano ceppi di H. influenzae produttori di β-lattamasi. 1 A intervalli regolari, eseguire diluizioni e conte da piastra delle sospensioni di inoculo per confermare che la metodica di correzione adottata produca un inoculo contenente circa 1 4 x 10 8 UFC/mL. 5. Ai fini dei test di routine, sono risultate accettabili metodiche che impiegano dispositivi che consentono la standardizzazione diretta degli inoculi senza correzione della torbidità, come per esempio il sistema di inoculo BD BBL Prompt, 13 risultato soddisfacente per i test di H. influenzae Entro 15 min dalla correzione della torbidità dell inoculo, immergere un tampone di cotone sterile nell inoculo correttamente diluito ed eliminare il liquido in eccesso facendo ruotare il tampone e premendolo varie volte sulla parte superiore della parete interna della provetta. 7. Inoculare tre volte l intera superficie di una piastra agar, girando ogni volta la piastra di 60 per ottenere un inoculo uniforme. Al termine, strisciare con un tampone il delimitare dell agar. 8. Si può lasciare il coperchio socchiuso per 3 5 min, ma non più di 15 min, per permettere l assorbimento di eventuale umidità superficiale, prima di applicare i dischi impregnati di antibiotico. 9. Applicare i dischi con l ausilio di un dispensatore di dischi di antibiotici, adottando tecniche asettiche. Le zone di inibizione prodotte dalla maggior parte degli antibiotici in caso di test di Haemophilus sono più ampie di quelle generate durante i test di altri microrganismi. Di conseguenza, posizionare al massimo quattro e nove dischi antibiotici su piastre singole rispettivamente da 100 mm e da 150 mm, inclusi non più di sei dei dischi seguenti: cefalosporine di terza generazione (es. cefotaxime, ceftazidime, ceftriaxone, ceftizoxime), aztreonam, imipenem o ciprofloxacina. Una volta posizionati i dischi sull agar, comprimerli con un ago o pinze sterili in modo da realizzare un contatto completato con la superficie del terreno. Questa operazione non è necessaria se i dischi vengono depositati usando un dispensatore autoapplicatore da 12 posti BD BBL Sensi-Disc (gli applicatori non scendono dai fori senza cartucce). 10. Entro 15 min dall applicazione dei dischi, capovolgere le piastre e incubare per h a 35 C in ambiente aerobico arricchito di anidride carbonica al 5%. 11. Strisciare una piastra di BD BBL HTM Agar con H. influenzae ATCC e incubare insieme alle piastre dei test di sensibilità per determinare se il terreno supporta una crescita adeguata. Controllo di qualità a cura dell utente Includere colture di controllo ogni volta che si esegue un test di sensibilità oppure una volta alla settimana nel caso in cui si possano documentare performance soddisfacenti in conformità alle norme CLSI. 1 I diametri di zona corretti sono riportati nel documento M100-S17 (M2). 8 RISULTATI 1. Esaminare le piastre dopo h di incubazione. Si deve ottenere un piano di crescita confluente. La sola crescita di colonie isolate indica che l inoculo è troppo leggero; in tal caso, il test deve essere ripetuto. 2. Con l ausilio di calibri, un regolo o una sagoma appositamente predisposti, misurare il diametro delle zone di inibizione completa (valutata a occhio nudo), incluso il diametro del disco, approssimando al millimetro. Tenere il dispositivo di misurazione sul retro della piastra, a sua volta posta su un fondo nero non riflettente e illuminata dall alto. Assumere come endpoint l area che non evidenzia alcuna crescita visibile ad occhio nudo. Ignorare la crescita debole di colonie minute rilevabili con difficoltà all estremità della zona di inibizione evidente. Con trimetoprim e sulfonamidi, gli antagonisti nel terreno possono consentire qualche modesta crescita; di conseguenza, ignorare tale crescita (non oltre il 20% del piano di crescita) e misurare il margine più evidente per determinare il diametro della zona. 3. Per l interpretazione dei risultati ottenuti con isolati clinici di Haemophilus, consultare il documento CLSI M100-S17 (M2). 8 A seconda dei diametri di zona ottenuti, i risultati possono essere referti come resistenti, intermedi o sensibili. NOTA: Vengono periodicamente pubblicate tabelle integrative del documento CLSI M2-A9, contenenti tabelle aggiornate dei dischi di antibiotici e dei criteri di interpretazione. Consultare le tabelle più recenti e seguire le raccomandazioni vigenti. Per informazioni sulle pubblicazioni correnti, rivolgersi al rappresentante locale di BD. Il documento completo e i supplementi possono essere richiesti al Clinical and Laboratory Standards Institute, 940 West Valley Road, Suite 1400, Wayne, PA USA. Telefono: L Italiano

4 I microrganismi con test positivo per la produzione di β-lattamasi devono essere considerati ampicillino-resistenti indipendentemente dai diametri di zona ottenuti. Notare che sono stati descritti ceppi ampicillino-resistenti di H. influenzae privi di attività β-lattamasica. 15 Se il diametro di zona indica resistenza ad ampicillina, l isolato deve pertanto essere refertato come resistente a tale antibiotico, anche in caso di test negativo per le β-lattamasi. XI XII LIMITAZIONI DELLA PROCEDURA Con alcune combinazioni di microrganismi-antibiotici, la zona di inibizione può presentare un bordo non chiaramente demarcato e dare luogo a interpretazioni errate. Una concentrazione di inoculo inappropriata può produrre risultati inesatti. Un inoculo troppo intenso può determinare zone di inibizione eccessivamente limitate, mentre un inoculo troppo leggero può generare zone di dimensioni eccessive e difficili da misurare. Posizionare al massimo quattro e nove dischi antibiotici su piastre singole rispettivamente da 100 mm e da 150 mm, inclusi non più di sei dei dischi seguenti: cefalosporine di terza generazione (es. cefotaxime, ceftazidime, ceftriaxone, ceftizoxime), aztreonam, imipenem o ciprofloxacina. Una conservazione inappropriata dei dischi di antibiotici può provocare una perdita di potenza e risultati falsamente resistenti. La sensibilità in vitro di un microrganismo a un antibiotico specifico non indica necessariamente l efficacia di tale agente in vivo. Per una guida all interpretazione dei risultati, consultare la documentazione appropriata. 5,10 PERFORMANCE A. Studio di riproducibilità 16 Sono stati valutati tre lotti di produzione di BD BBL HTM Agar, usando la procedura di test di sensibilità con dischi di antibiotici (M2- A4) al momento raccomandata da NCCLS. 17 Nello studio, sono stati complessivamente usati 12 antibiotici (amoxicillina/clavulanato, ampicillina, ampicillina/sulbactam, cefaclor, cefonicid, ceftriaxone, cefuroxime, cloramfenicolo, ciprofloxacina, rifampicina, tetraciclina, trimetoprim/sulfometoxazolo) e 14 ceppi di H. influenzae. Sette dei 14 ceppi erano American Type Culture Collection (ATCC), mentre i sette restanti erano colture stock, comprendenti sei isolati clinici e una coltura per controllo di qualità industriale. I diametri di zona ottenuti con ciascuno dei tre lotti di terreno sono stati comparati con i criteri di interpretazione (Tabella 2A) nel documento M2-A4. 17 In soli sei casi le zone ottenute con un lotto hanno prodotto una categoria di interpretazione diversa rispetto agli altri due lotti. Delle sei discrepanze, quattro sono state riscontrate con tetraciclina, una con cefaclor e una con cefuroxime. Nel caso della tetraciclina, il risultato ha dato luogo a una categoria di interpretazione definibile sensibile o intermedia (errore secondario). Con cefaclor e cefuroxime, la differenza di 1 mm riscontrata ha dato luogo a una categoria definibile intermedia o resistente, anch essa considerabile errore secondario. In questo studio, cinque ceppi di H. influenzae hanno prodotto β-lattamasi. Con ciascuno di tali ceppi, ogni lotto di HTM ha prodotto diametri di zona con ampicillina interpretati come resistenti. Due dei cinque ceppi hanno anche prodotto cloramfenicolo acetiltransferasi (CAT). Le zone di cloramfenicolo ottenute con questi due ceppi sono risultate congruenti con la resistenza al cloramfenicolo. 18,19 B. Comparazione con agar cioccolato BD BBL Mueller Hinton 16 La procedura su disco NCCLS è stata eseguita con 213 isolati clinici di H. influenzae su BD BBL HTM Agar e agar cioccolato Mueller Hinton. 17,20 Ampicillina, ampicillina-sulbactam, amoxicillina-clavulanato e cloramfenicolo sono stati gli antibiotici testati, essendo questi i soli antibiotici per i quali erano stati definiti i criteri di interpretazione dei diametri di zona con agar BD BBL cioccolato BD BBL Mueller Hinton. 21,22 Sono stati ottenuti i seguenti risultati. S I R BD BBL Mueller Hinton Agar cioccolato S I R Concordanza : 99,6% S = Sensibile I = Intermedio R= Resistente Con ampicillina sono stati riscontrati due errori rilevanti e un errore secondario. In entrambi gli errori rilevanti, BD BBL HTM ha prodotto un risultato resistente, mentre l agar cioccolato BD BBL Mueller Hinton da dato un risultato resistente. Questi isolati sono risultati entrambi β-lattamasi positivi. Il risultato resistente è stato quindi considerato corretto. L unico errore secondario è stato riscontrato con un isolato che ha prodotto un risultato intermedio su BD BBL HTM Agar e un risultato sensibile su agar cioccolato BD BBL Mueller Hinton. L Italiano

5 XIII DISPONIBILITÀ N. di cat. Descrizione , confezione da 8 piastre (150 x 15 mm) XIV BIBLIOGRAFIA 1. Clinical and Laboratory Standards Institute Approved standard: M2-A9. Performance standards for antimicrobial disk susceptibility tests, 9th ed. CLSI, Wayne, Pa. 2. Bauer, A.W., W.M.M. Kirby, J.C. Sherris, and M. Turck Antibiotic susceptibility testing by a standardized single disk method. Am. J. Clin. Pathol. 45: Ryan, K.J., F.D. Schoenknecht, and W.M.M. Kirby Disc sensitivity testing. Hospital Practice 5: Barry, A.L., F. Garcia, and L.D. Thrupp An improved single disk method for testing the antibiotic susceptibility of rapidly growing pathogens. Am. J. Clin. Pathol. 53: Thornsberry, C., T.L. Gavan, E.H. Gerlach Cumitech 6, New developments in antimicrobial agent susceptibility testing. Coordinating ed., J.C. Sherris. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 6. Jorgensen, J.H., J.S. Redding, L.A. Maher, and A.W. Howell Improved medium for antimicrobial susceptibility testing of Haemophilus influenzae. J. Clin. Microbiol. 25: Jorgensen, J.H., A.W. Howell, and L.A. Maher Antimicrobial susceptibility testing of less commonly isolated Haemophilus species using Haemophilus test medium. J. Clin. Microbiol. 28: Clinical and Laboratory Standards Institute CLSI disk diffusion supplemental tables, M100-S17 (M2). CLSI, Wayne, Pa. 9. Ericsson, H.M., and J.C. Sherris Antibiotic sensitivity testing. Report of an international collaborative study. Acta. Pathol. Microbiol. Scand. Suppl. 217: Jorgensen, J.H., J.D. Turnidge, and J.A. Washington Antibacterial susceptibility tests: dilution and disk diffusion methods, p In P.R. Murray, E.J. Baron, M.A. Pfaller, F.C. Tenover, and R.H. Yolken (ed.), Manual of clinical microbiology, 7th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 11. Isenberg, H.D., FD. Schoenknecht, and A. von Graevenitz Cumitech 9, Collection and processing of bacteriological specimens. Coordinating ed.,s.j. Rubin. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 12. Miller, J.M., and H.T. Holmes Specimen collection, transport, and storage, p In P.R. Murray, E.J. Baron, M.A. Pfaller, F.C. Tenover, and R.H. Yolken (ed.), Manual of clinical microbiology, 7th ed. Americn Society for Microbiology, Washington, D.C. 13. Baker, C.N., C. Thornsberry, and R.W. Hawkinson Inoculum standardization in antimicrobial susceptibility testing: evaluation of overnight agar cultures and the rapid inoculum standardization system. J. Clin. Microbiol. 17: Marsik, F., G. Evans, J. Fowler, and L. Thompson Comparison of the BBL Prompt system, Abbott A-Just, and visual method for the preparation of Haemophilus influenzae inoculum for the Bauer-Kirby procedure, abstr. C-67, p Abstr. 89th Annu. Meet. Am. Soc. Microbiol Doern, G.V., J.H. Jorgensen, C. Thornsberry, D.A. Preston, T.A. Tubert, J.S. Redding, and L.A. Maher A national collaborative study of the prevalence of antimicrobial resistance among clinical isolates of Haemophilus influenzae. Antimicrob. Agents Chemother. 32: Data on File, BD Diagnostic Systems, Sparks MD National Committee for Clinical Laboratory Standards Approved standard: M2-A4. Performance standards for antimicrobial disk susceptibility tests, 4th ed. NCCLS, Villanova, Pa. 18. Azemun, P., T. Stull, M. Roberts, and A.L. Smith Rapid detection of chloramphenicol resistance in Haemophilus influenzae. Antimicrob. Agents Chemother. 20: Doern, G.V., G.S. Daum, and T.A. Tubert In vitro chloramphenicol susceptibility testing of Haemophilus influenzae: disk diffusion procedures and assays for chloramphenicol acetyltransferase. J. Clin. Microbiol. 25: National Committee for Clinical Laboratory Standards Approved standard: M2-A3. Performance standards for antimicrobial disk susceptibility tests, 3rd ed. NCCLS, Villanova, Pa. 21. National Committee for Clinical Laboratory Standards Second Informational Supplement: M100-S2. Performance standards for antimicrobial susceptibility testing. NCCLS, Villanova, Pa. 22. Doern, G.V. and R.N. Jones Antimicrobial susceptibility testing of Haemophilus influenzae, Branhamella catarrhalis, and Neisseria gonorrhoeae. Antimicrob. Agents Chemother. 32: Assistenza e supporto tecnico: rivolgersi al rappresentante locale BD o visitare il sito Becton, Dickinson and Company 7 Loveton Circle Sparks, MD USA Benex Limited Pottery Road, Dun Laoghaire Co. Dublin, Ireland ATCC is a trademark of the American Type Culture Collection. Prompt is a trademark of 3M BD. BD, the BD Logo and all other trademarks are property of Becton, Dickinson and Company. L Italiano