ZnT8 Ab. per analisi di routine Saggio immunoenzimatico per la determinazione quantitativa dello ZnT8 (Zinc Transporter 8) nel siero umano IVD

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1 ZnT8 Ab per analisi di routine Saggio immunoenzimatico per la determinazione quantitativa dello ZnT8 (Zinc Transporter 8) nel siero umano IVD LOT See external label Σ = 96 test REF DKO123 DTINAZIONE D USO Il kit ELISA Diametra ZnT8 è destinato all'uso da parte di sole persone professioniste per la determinazione quantitativa di autoanticorpi anti ZnT8 nel siero umano. Gli anticorpi contro gli antigeni delle cellule beta del pancreas sono importanti marcatori sierologici del Diabete Mellito di tipo 1. Gli antigeni riconosciuti da questi anticorpi includono l'insulina, l acido glutammico decarbossilasi (isoforma GAD65), l'antigene delle cellule insulari IA-2 o ICA-512 e il trasportatore di zinco 8 (ZnT8). Gli autoanticorpi anti ZnT8 sono diretti principalmente contro il dominio C-terminale di ZnT8 (residui ). Il polimorfismo genetico nella popolazione umana al codone dell amminoacido 325 porta all espressione di tre varianti proteiche: Arginina (R) 325, triptofano (W) 325 e molto raramente glutammina (Q) 325. Gli autoanticorpi anti ZnT8 possono essere specifici per la variante R 325 o W 325, o possono essere non specifici per il residuo 325. Sieri che reagiscono solamente con l'allele Q sono estremamente rari. Il kit ELISA Diametra ZnT8 è in grado di rilevare e quantificare, autoanticorpi specifici per R 325 o W 325, o per varianti non specifiche del residuo PRINCIPIO L SAGGIO Nel kit ELISA Diametra ZnT8, gli autoanticorpi anti ZnT8 presenti nel siero dei pazienti, nei calibratori e nei controlli interagiscono con lo ZnT8 adsorbito sui pozzetti della micropiastra. Dopo un incubazione di ore, l eccesso viene scartato lasciando gli autoanticorpi anti ZnT8 legati ai pozzetti della micropiastra coattati con ZnT8. Nel secondo step di incubazione viene aggiunta la Biotina; grazie all abilità degli autoanticorpi anti ZnT8 nel campione di agire bivalentemente (o polivalentemente), si forma un ponte tra lo ZnT8 immobilizzato sulla micropiastra e la Biotina. La Biotina non legata è successivamente rimossa da uno step di lavaggio, mentre la quantità di Biotina legata è determinata in un terzo step di incubazione attraverso l addizione della Streptapidina Perossidasi (SA-POD), che lega specificatamente la Biotina. L eccesso di SA-POD non legata è lavata via e l addizione successiva di 3,3,5,5 - tetramethylbenzidine (TMB) porta alla formazione di un colore blu. Questa reazione è fermata dall addizione della Stop Solution, che produce un cambiamento di colorazione verso il giallo. L assorbanza della soluzione gialla a 405 nm e 450 nm è quindi letta usando un lettore di piastre ELISA. Un alta assorbanza indica la presenza di autoanticorpi anti ZnT8 nel campione. La lettura a 405 nm permette la quantificazione ad alte assorbanze. I valori bassi (inferiori a 50 U/mL) dovrebbero essere letti a 450 nm. Il range di misurazione è AU/mL. 2. CONSERVAZIONE E PREPARAZIONE L CAMPIONE SIERICO I sieri dovrebbero essere analizzati immediatamente dopo la separazione dal resto del sangue o conservati, preferibilmente in aliquote, sotto i -20 C. 50 µl di campione sono sufficienti per un saggio (in duplicato). Evitare congelamenti e scongelamenti ripetuti o l aumento della temperatura di conservazione. Non usare campioni sierici lipemici o emolizzati. Può essere usato plasma in EDTA. Quando richiesto, portare i sieri a temperatura ambiente e agitare gentilmente per assicurare l omogeneità. Centrifugare i sieri prima del saggio (preferibilmente per 5 minuti a g in una micro centrifuga) per rimuovere eventuale materia particellare. Non ignorare questa centrifugazione se i sieri sono torbidi o contengono particolati. 3. MATERIALI RICHI MA NON FORNI Pipette adatte alla dispensazione di volumi di 25 e 100 µl. Oggettistica di laboratorio per la misurazione dei volumi, la ricostituzione e la diluizione dei reagenti. Lettore di piastre ELISA adatto per il formato a 96 pozzetti e capace di misurazioni a 450 e 405 nm. Agitatore di piastre ELISA, capaci di 500 agitazioni/minuto (no agitatori orbitali). Copertura per piastre ELISA. 4. PREPARAZIONE I REAGENTI FORNI Conservare i reagenti non aperti a 2-8 C. 1. Microplate REF DCE002/ strip frazionabili con 8 pozzetti (96 in totale) in una cornice e sigillate in una busta di alluminio. Assicurarsi che le strip siano saldamente inserite nella cornice fornita. Dopo l uso rimettere le strip inutilizzate nella busta di alluminio originale con l essiccante e chiudere con nastro adesivo. Porre la busta di alluminio dentro una busta di plastica richiudibile e conservare a 2-8 C per un massimo di due settimane. 2. Calibrators (5 flaconi, 0.7 ml ciascuno, pronti all uso) CAL1-10 AU/mL REF DCE002/ CAL2-20 AU/mL REF DCE002/ CAL3-75 AU/mL REF DCE002/ CAL4-500 AU/mL REF DCE002/ CAL AU/mL REF DCE002/ (AU sono unità arbitrarie Diametra) 3. Positive Controls (2 flaconi, 0.7 ml ciascuno, pronti all uso) Vedere l etichetta per la concentrazione. REF DCE045/ e REF DCE045/

2 4. Negative Control (1 flacone, 0.7 ml, pronto all uso) REF DCE045/ ZnT8 Biotin (3 flaconi, liofilizzati) REF DCE019/ Ricostituire ogni flacone con 5,5 ml di ZnT8 Biotin buffer (reagente 6). Se si utilizza più di un flacone, unire i flaconi e agitare delicatamente prima dell uso. Conservare a 2-8 C per un massimo di 3 giorni dopo la ricostituzione. 6. ZnT8 Biotin buffer (2 flaconi, 15 ml ciascuno, colore rosso, pronto all uso) REF DCE047/ X Streptavidin Peroxidase (SA-POD) (1 flacone, 0.7 ml, concentrato) REF DCE041/ Diluire 1:20 con SA-POD diluent (reagent 8) prima dell uso. Per esempio, 0,5 ml (reagent 7) + 9,5 ml (reagent 8). Conservare a 2-8 C per un massimo di 16 settimane dopo la diluizione. 8. SA-POD diluent (1 flacone, 15 ml, pronto all uso) REF DCE048/ TMB Substrate (1 flacone, 15 ml, pronto all uso) REF DCE004/ X Conc. Wash Solution (1 vial, 125 ml) REF DCE054/ Diluire 10 volte con acqua deionizzata prima dell uso. Per esempio, 100 ml (reagent 10) ml di acqua deionizzata. Conservare a 2-8 C fino alla data di scadenza. 11. Stop Solution (1 flacone, 12 ml, pronto all uso) REF DCE005/ PROCEDURA L SAGGIO Portare tutti i reagenti a temperatura ambiente (22-28 C), eccetto lo ZnT8 Biotin e lo ZnT8 Biotin buffer. E raccomandato l utilizzo di una pipetta Eppendorf a ripetizione. Effettuare il saggio in duplicato per ogni Calibratore, Controllo, Siero e lasciare due pozzetti vuoti per il Bianco. Giorno 1 Reagente Calibratore CAL1-CAL5 Calibratore 25 µl Campione/ Controlli Controllo 25 µl Campione 25 µl Bianco Coprire la piastra, agitare per circa 5 secondi in un agitatore per piastre ed incubare overnight (per ore) a 2-8 C senza agitazione. Giorno 2 Utilizzare un washer per piastre ELISA per lavare 3 volte la piastra con Wash Solution diluita. Se non è disponibile un washer, eliminare il contenuto dei pozzetti rovesciando la micropiastra sopra un contenitore per rifiuti, lavare 3 volte manualmente e infine sbattere delicatamente la micropiastra su fogli di carta asciutti ed assorbenti. ZnT8 Biotin ricostituita fresca 100 µl 100 µl Coprire la piastra e incubare a 2-8 C per 1 ora senza agitazione. Utilizzare un washer per piastre ELISA per lavare 3 volte la piastra con Wash Solution diluita. Se non è disponibile un washer, eliminare il contenuto dei pozzetti rovesciando la micropiastra sopra un contenitore per rifiuti, lavare 3 volte manualmente e infine sbattere delicatamente la micropiastra su fogli di carta asciutti ed assorbenti. SA-POD diluita 100 µl 100 µl Coprire la micropiastra ed incubare a temperatura ambiente (22-28 C) per 20 minuti in un agitatore per piastre ELISA (500 shakes/min). Utilizzare un washer per piastre ELISA per lavare 3 volte la piastra con Wash Solution diluita. Se non è disponibile un washer, eliminare il contenuto dei pozzetti rovesciando la micropiastra sopra un contenitore per rifiuti, lavare 3 volte manualmente e infine sbattere delicatamente la micropiastra su fogli di carta asciutti ed assorbenti. Se è stato effettuato il lavaggio in manuale, lavare la piastra un altra volta con acqua deionizzata per rimuovere ogni residuo di schiuma. TMB Substrate 100 µl 100 µl 100 µl Incubare al buio a temperatura ambiente (22-28 C) per 20 minuti senza agitazione. Stop Solution 100 µl 100 µl 100 µl Agitare la piastra per circa 5 secondi in un agitatore per micropiastre. Assicurarsi che il tempo di incubazione del TMB Substrato sia lo stesso per tutti i pozzetti. Entro 5 minuti leggere l assorbanza a 405 nm, poi a 450 nm, usando un lettore di piastre ELISA; effettuare il Bianco contro i pozzetti contenenti solo il TMB e la Stop Solution.

3 6. ANALISI I RISULTATI La curva di calibrazione può essere determinata plottando la concentrazione dei calibratori sull asse delle x (scala logaritmica) contro l assorbanza dei Calibratori sull asse delle y (scala lineare). La concentrazione di autoanticorpi anti ZnT8 nei sieri può essere quindi estrapolata dalla curva di calibrazione. Possono essere utilizzati anche altri sistemi di analisi dei dati. Il Controllo Negativo ha una concentrazione di 0 AU/mL, ma gli può essere assegnato il valore di 1 AU/mL per facilitare l analisi dei dati al computer. I campioni con concentrazioni elevate di ZnT8 possono essere diluiti con il Controllo Negativo (reagente 4); per esempio, 15 µl di campione µl di Controllo Negativo per ottenre una diluizione 1:10. Ulteriori diluizioni (ad es. 1:100) possono essere preparate dalla diluizione 1:10 come appropriato. Alcuni sieri non si diluiscono in maniera lineare. RISULTATI TIPICI (solamente come esempio, non utilizzare per il cacolo di risultati reali) Calibratori Assorbanza 405 nm 450 nm AU/mL CAL CAL CAL CAL CAL Controllo NEG Controllo POS Controllo POS Le letture di assorbanza a 405 nm possono essere convertite in valori di assorbanza a 450 nm moltiplicando per un fattore di conversione appropriato (3,4 nel caso del kit Diametra). 9. CONSIRAZIONI DI SICUREZZA Il kit è destinato ad utilizzo in vitro da parte di personale esperto. Seguire attentamente le istruzioni. Osservare le date di scadenza riportate sulle etichette e la stabilità specificata per i reagenti ricostituiti. Riferirsi alla MSDS per informazioni maggiormente dettagliate sulla sicurezza. Tutti i reattivi di origine umana usati nella preparazione dei reagenti del kit sono stati testati e sono risultati negativi per la presenza di anticorpi anti-hiv 1&2, per HbsAg e per anticorpi anti-hcv, ma, ciò nonostante, devono essere manipolati come potenzialmente infetti. Lavare le mani abbondantemente se è avvenuta una contaminazione e prima di lasciare il laboratorio. Sterilizzare tutti i rifiuti potenzialmente contaminati, inclusi i campioni sierici, prima dello smaltimento. I materiali di origine animale usati nella preparazione dei reagenti sono stati certificati come sani, ma dovrebbero essere trattai come potenzialmente infettivi. Alcuni reagenti contengono piccole quantità di sodio azide come preservante. In riferimento a tutti i componenti del kit, evitare l ingestione, l inalazione o il contatto con la pelle, gli occhi e i vestiti. Evitare la formazione di azidi metalliche nei tubi di scarico lavando sempre copiosamente con acqua abbondante. 10. BIBLIOGRAFIA J. M. Wenzlau et al., The cation efflux transporter ZnT8 (Slc30A8) is a major autoantigen in human type I diabetes. PNAS : P. Achenbach et al., Autoantibodies to zinc transporter 8 and SLc30A8 genotype stratify type 1 diabetes risk. Diabetologia : Fabbricato sotto licenza in Europa con brevetto n ; in attesa di brevetto per altri paesi. Ed. 04/2011 DCM123-0 DiaMetra S.r.l. Headquater: Via Garibaldi, SEGRATE (MI) Italy Tel Fax Manufactory: Via Giustozzi 35 Z.I. Paciana FOLIGNO (PG) Italy Tel Fax info@diametra.com 7. CUT-OFF L SAGGIO Cut-off Negativo Positivo AU/mL < 15 AU/mL 15 AU/mL 8. SPECIFICA E SENSIBILA CLINICHE In uno studio del 2010 il kit Diametra ZnT8 ELISA ha mostrato una specificità del 99% (n=90) ed una sensibilità del 68% (n=50). I dati presenti in queste Istruzioni per l Uso devono essere usati solo come una guida. E raccomandato che ogni laboratorio includa il suo proprio pannello di campioni nel saggio. Ogni laboratorio dovrebbe stabilire i propri range di riferimento normali e patologici per gli autoanticorpi anti- ZnT8.

4 ZnT8 Ab for routine analysis Enzyme immunoassay for the quantitative determination of Zinc Transporter 8 (ZnT8) autoantibodies in human serum IVD LOT See external label Σ = 96 test REF DKO123 INTEND USE Diametra ZnT8 autoantibody (ZnT8 Ab) ELISA kit is intended for use by professional persons only, for the quantitative determination of ZnT8 autoantibodies in human serum. Autoantibodies to pancreatic beta cell antigens are important serological markers of type 1 diabetes mellitus (type 1 DM). The antigens recognised by these antibodies include insulin, glutamic acid decarboxylase (GAD 65 kda isoform), the islet cell antigen IA-2 or ICA-512 and zinc transporter 8 (ZnT8). ZnT8 autoantibodies are directed principally to the C terminal domain of ZnT8 (residues ). Human population gene polymorphism at the codon for the 325 th amino acid results in the expression of three protein variants: Arginine (R) 325, Tryptophan (W) 325 and very rarely Glutamine (Q) 325. ZnT8 autoantibodies may be specific to the R 325 or W 325 variant, or may be residue 325 non-specific. Sera that react with the Q allele only are extremely rare. DIAMETRA s ZnT8 autoantibody ELISA is capable of detecting, and quantifying, autoantibodies specific to R 325 or to W 325, or to residue 325 non-specific variants. 1. ASSAY PRINCIPLE In DIAMETRA s ZnT8 Ab ELISA, ZnT8 autoantibodies in test patients sera, calibrators and controls are allowed to interact with ZnT8 coated onto ELISA plate wells. After a hour incubation, the samples are discarded leaving ZnT8 autoantibodies bound to the ZnT8 coated wells. ZnT8 Biotin is added in a 2nd incubation step where, through the ability of ZnT8 autoantibodies in the samples to act bivalently (or polyvalently), a bridge is formed between ZnT8 immobilised on the plate and ZnT8 Biotin. Unbound ZnT8 Biotin is then removed in a wash step and the amount of bound ZnT8 Biotin determined (in a 3rd incubation step) by addition of Streptavidin Peroxidase (SA-POD), which binds specifically to Biotin. Excess, unbound SA-POD is then washed away and addition of 3,3,5,5 tetramethylbenzidine (TMB) results in formation of a blue colour. This reaction is stopped by addition of stop solution causing the well contents to turn yellow. The absorbance of the yellow reaction mixture at 405 nm and 450 nm is then read using an ELISA plate reader. A higher absorbance indicates the presence of ZnT8 autoantibody in the test sample. Reading at 405 nm allows quantitation of high absorbances. Low values (less than 50 units per ml) should be read off the 450 nm calibration curve. The measuring range is AU/mL. 2. STORAGE AND PREPARATION OF TT SERUM SAMPLE Sera to be analysed should be assayed soon after separation or stored, preferably in aliquots, at or below 20 C. 50 µl is sufficient for one assay (duplicate 25 µl determinations). Repeated freeze thawing or increases in storage temperature should be avoided. Do not use lipaemic or haemolysed serum samples. EDTA plasma may be used in the assay. When required, bring test sera to room temperature and mix gently to ensure homogeneity. Centrifuge sera prior to assay (preferably for 5 min at 10-15,000g in a microfuge) to remove particulate matter. Please do not omit this centrifugation step if sera are cloudy or contain particulates. 3. MATERIALS REQUIRED AND NOT SUPPLIED Pipettes capable of dispensing 25 µl and 100 µl. Means of measuring out various volumes to reconstitute or dilute reagents. Pure water. ELISA Plate reader suitable for 96 well formats and capable of measuring at 450 nm and 405 nm. ELISA Plate shaker, capable of 500 shakes/min (not an orbital shaker). ELISA Plate cover. 4. PREPARATION OF THE REAGENTS SUPPLIED Store unopened kit and reagents at 2-8 C. 1. Microplate REF DCE002/ breakapart strips of 8 wells (96 in total) in a frame and sealed in a foil bag. Ensure stripwells are firmly fitted into frame provided. After opening return any unused wells to the original foil packet with desiccant provided and seal with adhesive tape. Place foil bag in the self-seal plastic bag and store at 2-8 C for up to 2 weeks. 2. Calibrators (5 vials, 0.7 ml each, ready to use) CAL1-10 AU/mL REF DCE002/ CAL2-20 AU/mL REF DCE002/ CAL3-75 AU/mL REF DCE002/ CAL4-500 AU/mL REF DCE002/ CAL AU/mL REF DCE002/ (AU are Diametra arbitrary units) 3. Positive Controls (2 vials, 0.7 ml, ready to use) See label for concentration range REF DCE045/ and REF DCE045/ Negative Control (1 vial, 0.7 ml each, ready to use) REF DCE045/ ZnT8 Biotin (3 vials, lyophilised) REF DCE019/ Reconstitute each vial with 5.5 ml ZnT8 Biotin reconstitution buffer (reagent 6). When more than one vial

5 is used, pool the vials and mix gently before use. Store at 2-8 C for up to 3 days after reconstitution. 6. ZnT8 Biotin buffer (2 vial, 15 ml each, red coloured, ready to use) REF DCE047/ X Streptavidin Peroxidase (SA-POD) (1 vial, 0.7 ml, concentrated) REF DCE041/ Dilute 1 in 20 with Diluent for SA-POD (reagent 8) before use. For example, 0.5 ml (reagent 7) ml (reagent 8). Store at 2-8 C for up to 16 weeks after dilution. 8. SA-POD diluent (1 vial, 15 ml, ready to use) REF DCE048/ TMB Substrate (1 vial, 15 ml, ready to use) REF DCE004/ X Conc. Wash Solution (1 vial, 125 ml) REF DCE054/ Dilute 10X with pure water before use. For example, 100 ml (reagent 10) ml pure water. Store at 2-8 C for up to kit expiry date. 11. Stop Solution (1 vial, 12 ml, ready to use) REF DCE005/ ASSAY PROCEDURE Allow all reagents to reach room temperature (22-28 C) on day of use, except ZnT8 Biotin and ZnT8 Biotin reconstitution buffer. A repeating Eppendorf type pipette is recommended. Perform the assay in duplicate, for every Calibrator, Control, Sample Serum and leave two wells empty for Blanks. Day 1 Reagent Calibratore CAL1-CAL5 Calibrator 25 µl Sample/ Controls Control 25 µl Sample 25 µl Blanks Cover the frame, shake for approximately 5 seconds on a plate shaker and incubate overnight, for hours, at 2-8 C without shaking. Day 2 Use an ELISA plate washer to aspirate and wash the wells three times with diluted Wash Solution. If a plate washer is not available, discard the well contents by briskly inverting the frame of stripwells over a suitable receptacle, wash three times manually and finally tap the inverted wells gently on a clean dry absorbent surface. Cold Reconstituted ZnT8 Biotin 100 µl 100 µl Cover the plate, and incubate at 2-8 C for 1 hour without shaking. Use an ELISA plate washer to aspirate and wash the wells three times with diluted Wash Solution. If a plate washer is not available, discard the well contents by briskly inverting the frame of stripwells over a suitable receptacle, wash three times manually and finally tap the inverted wells gently on a clean dry absorbent surface. Cover the plate and incubate at room temperature (22-28 C) for 20 minutes on an ELISA plate shaker (500 shakes per min). Use an ELISA plate washer to aspirate and wash the wells three times with diluted Wash Solution. If a plate washer is not available, discard the well contents by briskly inverting the frame of stripwells over a suitable receptacle, wash three times manually and finally tap the inverted wells gently on a clean dry absorbent surface. If manual washing is being carried out use one additional wash step with pure water (to remove any foam) before finally tapping the inverted wells dry. TMB Substrate 100 µl 100 µl 100 µl Incubate in the dark at room temperature (22-28 C) for 20 minutes without shaking. Stop Solution 100 µl 100 µl 100 µl Shake the plate for approximately 5 seconds on a plate shaker. Ensure substrate incubations are the same for each well. Within 5 minutes, read the absorbance of each well at 405 nm, then at 450 nm, using an ELISA plate reader, blanked against the wells containing 100 µl of TMB Substrate and 100 µl Stop Solution only. 6. RULT ANALYSIS A calibration curve can be established by plotting calibrator concentration on the x-axis (log scale) against the absorbance of the calibrators on the y-axis (linear scale). The ZnT8 autoantibody concentrations in patient sera can then be read off the calibration curve. Other data reduction systems can be used. The negative control has a concentration of 0 AU/mL, but can be assigned a value of 1 AU/mL to facilitate computer processing of data. Samples with high ZnT8 Ab concentrations can be diluted in kit negative control (reagent 4). For example, 15 µl of sample plus 135 µl of negative control to give a 10x dilution. Other dilutions (e.g. 100x) can be prepared from a 10x dilution or otherwise as appropriate. Some sera will not dilute in a linear way. TYPICAL RULTS (example only, not for calculation of actual results) Calibrator Absorbance 405 nm 450 nm AU/mL CAL CAL CAL CAL CAL NEG Control POS Control POS Control Absorbance readings at 405 nm can be converted to 450 nm absorbance values by multiplying by the appropriate factor (3.4 in the case of equipment used at Diametra). Diluted SA-POD 100 µl 100 µl

6 Ed. 04/2011 DCM123-0 DiaMetra S.r.l. Headquater: Via Garibaldi, SEGRATE (MI) Italy Tel Fax Manufactory: Via Giustozzi 35 Z.I. Paciana FOLIGNO (PG) Italy Tel Fax ASSAY CUT OFF Cut off Negative Positive AU/mL < 15 AU/mL 15 AU/mL 8. CLINICAL SPECIFICY AND SENSIVY In the DASP 2010 study the Diametra ZnT8 Ab ELISA kit achieved 99% (n=90) specificity and 68% (n=50) sensitivity. The data quoted in these instructions should be used for guidance only. It is recommended that each laboratory include its own panel of control samples in the assay. Each laboratory should establish its own normal and pathological reference ranges for ZnT8 autoantibody levels. 9. SAFETY CONSIRATION This kit is intended for in vitro use by professional persons only. Follow the instructions carefully. Observe expiry dates stated on the labels and the specified stability for reconstituted reagents. Refer to Materials Safety Data Sheet for more detailed safety information. Material of human origin used in the preparation of the kit has been tested and found non reactive for HIV1 and 2 and HCV antibodies and HBsAg but should, none-the-less, be handled as potentially infectious. Wash hands thoroughly if contamination has occurred and before leaving the laboratory. Sterilise all potentially contaminated waste, including test specimens before disposal. Material of animal origin used in the preparation of the kit has been obtained from animals certified as healthy but should be handled as potentially infectious. Some components contain small quantities of sodium azide as preservative. As with all kit components, avoid ingestion, inhalation, injection or contact with skin, eyes and clothing. Avoid formation of heavy metal azides in the drainage system by flushing any kit component away with copious amounts of water. 10. REFERENC J. M. Wenzlau et al., The cation efflux transporter ZnT8 (Slc30A8) is a major autoantigen in human type I diabetes. PNAS : P. Achenbach et al., Autoantibodies to zinc transporter 8 and SLc30A8 genotype stratify type 1 diabetes risk. Diabetologia : Manufactured under licence to European patent and patents pending in other countries

7 DIA.METRA SRL Mod. PIS PACKAGING INFORMATION SHEET Spiegazione dei simboli Explanation of symbols Explication des symboles Significado de los simbolos Verwendete Symbole Explicaçao dos simbolos In vitro Diagnostikum Producto sanitario para diagnóstico In vitro Dispositif medical de diagnostic in vitro In vitro Diagnostic Medical Device Dispositivo medico-diagnostico in vitro Dispositivos medicos de diagnostico in vitro Hergestellt von Elaborado por Fabriqué par Manufacturer Produttore Produzido por REF Bestellnummer Nûmero de catálogo Réferéncès du catalogue Catalogue number Numero di Catalogo Número do catálogo yyyy-mm Herstellungs datum Fecha de fabricacion Date de fabrication Date of manufacture Data di produzione Data de produção yyyy-mm-dd Verwendbar bis Establa hasta (usar antes de último día del mes) Utiliser avant (dernier jour du mois indiqué) Use by (last day of the month) Utilizzare prima del (ultimo giorno del mese) Utilizar (antes ultimo dia do mês) Biogefährdung Riesco biológico Risque biologique Biological risk Rischio biologico Risco biológico Gebrauchsanweisung beachten Consultar las instrucciones Consulter le mode d emploi Consult instructions for use Consultare le istruzioni per l uso Consultar instruções para uso Chargenbezeichnung Codigo de lote Numero de lot Batch code Codice del lotto Codigo do lote Σ = xx Ausreichend für n Tests Contenido suficiente para n tests Contenu suffisant pour n tests Contains sufficient for n tests Contenuto sufficiente per n saggi Contém o suficiente para n testes Cont. Inhalt Contenido del estuche Contenu du coffret Contents of kit Contenuto del kit Conteúdo do kit Min Max Temperaturbereich Límitaciôn de temperatura Limites de température de conservation Temperature limitation Limiti di temperatura Temperaturas limites de conservação

8 DIA.METRA SRL Mod. PIS PACKAGING INFORMATION SHEET SUGGERIMENTI PER LA RISOLUZIONE I PROBLEMI/TROUBLHOOTING ERRORE CAUSE POSSIBILI/ SUGGERIMENTI Nessuna reazione colorimetrica del saggio - mancata dispensazione del coniugato - contaminazione del coniugato e/o del Substrato - errori nell esecuzione del saggio (es. Dispensazione accidentale dei reagenti in sequenza errata o provenienti da flaconi sbagliati, etc.) Reazione troppo blanda (OD troppo basse) - coniugato non idoneo (es. non proveniente dal kit originale) - tempo di incubazione troppo breve, temperatura di incubazione troppa bassa Reazione troppo intensa (OD troppo alte) - coniugato non idoneo (es. non proveniente dal kit originale) - tempo di incubazione troppo lungo, temperatura di incubazione troppa alta - qualità scadente dell acqua usata per la soluzione di lavaggio (basso grado di deionizzazione) - lavaggi insufficienti (coniugato non completamente rimosso) Valori inspiegabilmente fuori scala - contaminazione di pipette, puntali o contenitori- lavaggi insufficienti (coniugato non completamente rimosso) CV% intra-assy elevato - reagenti e/o strip non portate a temperature ambiente prima dell uso - il lavatore per micropiastre non lava correttamente (suggerimento: pulire la testa del lavatore) CV% intersaggio elevato - condizioni di incubazione non costanti (tempo o temperatura) - controlli e campioni non dispensati allo stesso tempo (con gli stessi intervalli) (controllare la sequenza di dispensazione) - variabilità intrinseca degli operatori ERROR POSSIBLE CAUS / SUGGTIONS No colorimetric reaction - no conjugate pipetted reaction after addition - contamination of conjugates and/or of substrate - errors in performing the assay procedure (e.g. accidental pipetting of reagents in a wrong sequence or from the wrong vial, etc.) Too low reaction (too low ODs) - incorrect conjugate (e.g. not from original kit) - incubation time too short, incubation temperature too low Too high reaction (too high ODs) - incorrect conjugate (e.g. not from original kit) - incubation time too long, incubation temperature too high - water quality for wash buffer insufficient (low grade of deionization) - insufficient washing (conjugates not properly removed) Unexplainable outliers - contamination of pipettes, tips or containers insufficient washing (conjugates not properly removed) too high within-run - reagents and/or strips not pre-warmed to CV% Room Temperature prior to use - plate washer is not washing correctly (suggestion: clean washer head) too high between-run - incubation conditions not constant (time, CV % temperature) - controls and samples not dispensed at the same time (with the same intervals) (check pipetting order) - person-related variation