Eu- ANCA S. Immunometric Enzyme Immunoassay for the Qualitative Screening of IgG Autoantibodies Anti PR3 and MPO For in vitro diagnostic use only.

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1 Eu- ANCA S Immunometric Enzyme Immunoassay for the Qualitative Screening of IgG Autoantibodies Anti PR3 and MPO For in vitro diagnostic use only. Intended Use Eu-ANCA S assay is a qualitative enzyme immunoassay (ELISA) intended to screen for the presence of IgG class autoantibodies against PR3 and MPO in human serum or plasma as an aid in the diagnosis of systemic vasculitides. Principle of the procedure A mixture of highly purified PR3 and MPO antigens is bound to microwells. Antibodies against this antigen, if present in diluted serum or plasma, bind to the respective antigen. Washing of the microwells removes unspecific serum and plasma components. Horseradish peroxidase (HRP) conjugated anti-human IgG, or IgM immunologically detect the bound patient antibodies forming a conjugate/antibody/antigen complex. Washing of the microwells removes unbound conjugate. An enzyme substrate in the presence of bound conjugate hydrolyzes to form a blue colour. The amount of colour is directly proportional to the concentration of IgG resp. IgM antibodies present in the original sample. The addition of an acid stops the reaction forming a yellow end-product. The intensity of this yellow colour is measured photometrically at 450 nm. Materials provided Package size 96 test. Qty.1 Divisible microplate consisting of 12 modules of 8 wells each, coated with mixture of highly purified PR3 and MPO. Ready to use. 3 vials, 1.5 ml Controls and calibrator in a serum/buffer matrix (PBS, NaN 3 <0.1% (w/w)). Positive control (1), negative control (2 ), cut-off calibrator (CO), anti ANCA, for the respective range see the insert enclosed. Ready to use. 1 vial, 20 ml Sample buffer (Tris, NaN 3 <0.1% (w/w)), yellow, concentrate (5x). 1 vial, 15 ml Enzyme conjugate solution (PBS, Proclin 300 <0.5% (v/v)), (light red) containing polyclonal rabbit anti-human IgG; labelled with horseradish peroxidase. Ready to use. 1 vial, 15 ml TMB substrate solution. Ready to use. 1 vial, 15 ml Stop solution (contains acid). Ready to use. 1 vial, 20 ml Wash solution (PBS, NaN 3 <0.1% (w/w)), concentrate (50x). Materials required but not provided Equipment - Microplate reader capable of endpoint measurements at 450nm - Vortex mixer - Pipettes for 10µl, 100µl and 1000µl - Timer - Data reduction software Preparation of reagents - Distilled or deionized water - Graduated cylinder for 100 and 1000ml - Plastic container for storage of the wash solution Performance criteria and limits of the procedure Precision (Reproducibility) Intra-Assay: 3 positive samples were tested 24 times each one, in a single run. For each sample, the coefficient of variation expressed as a percent (CV%) was calculated. Inter-Assay: 3 positive samples were tested 6 times each one, in a single run, the test was repeated for 8 times in different runs. For each sample, the coefficient of variation expressed as a percent (CV%) was calculated. Sample N Intra-Assay Mean CV [%] Sample No Inter-Assay Mean CV [%] A1 (MPO) A1 (MPO) A2 (PR3) A2 (PR3) B1 (MPO) B1 (MPO) B2 (PR3) B2 (PR3) C1 (MPO) C1 (MPO) C2 (PR3) C2 (PR3) Specificity The microplate is coated with a mixture of PR3 and MPO antigens, highly purified by affinity chromatography. The ANCA S test is specific only for autoantibodies directed to these antigens. No cross-reactivities have been observed. 1

2 Calibration The assay system is calibrated in relative arbitrary units. Storage and stability All reagents must be stored at 2-8 C. Keep microplate wells sealed in a dry bag with desiccants. Do not expose test reagents to heat, sun or strong light during storage and usage. Stability after first use Reagents are stable until the expiration date printed on the label when stored at 2-8 C. Diluted sample buffer and wash buffer are stable for at least 30 days when stored at 2-8 C. Stability during transportation An accelerate stability test proved that all reagents are stable after 96 hours at 37 C Sample collection Eu-ANCA S requires serum. It is important to preserve the integrity of the sample from its collection till the end of the test. Perform phlebotomy using a non-traumatic venupuncture technique. Allow blood to clot for at least minutes, until the clot starts to retract. Before centrifugation, remove the clot from the collection tube walls. It is not necessary to add preservatives to the serum to keep integrity of the serum sample. Samples should be stored at 2 8 C and assayed within 5 days after collection. If the test cannot be run within 5 days, serum sample should be frozen at -20 C (aliquots) up to 6 months. Avoid repeated freezing and thawing of serum. Do not use automatic-defrost-freezers, as samples might undergo to repeated freezing and thawing cycles which might denaturate antibodies and lead to wrong results. Contamination by hemolysis or lipemia is best avoided, but does not interfere with this assay. Testing of heat-inactivated sera is not recommended. Preparation of reagents Preparation of sample buffer Dilute the contents of each vial of the sample buffer concentrate (5X) with distilled or deionized water to a final volume of 100ml prior to use. Store refrigerated: stable at 2-8 C for at least 30 days after preparation. Preparation of wash solution Dilute the contents of each vial of the buffered wash solution concentrate (50X) with distilled or deionized water to a final volume of 1000ml prior to use. Store refrigerated: stable at 2-8 C for at lea st 30 days after preparation. Sample preparation Dilute all samples 1:100 with sample buffer before assay. Therefore combine 10µl of sample with 990µl of sample buffer in a polystyrene tube. Mix well. Calibrators and controls are ready to use and need not be diluted. Procedure 1. Prepare a sufficient number of microplate modules to accommodate calibrators, controls and prediluted patient samples. 2. Pipette 100 µl of calibrators, controls and prediluted patient samples in duplicate into the wells A CO P2 B CO P2 C C2 P.. D C2 P.. CO: Cut-off Calibrator E C1 P1, P2,,...: Patient Sample 1, 2,... F C1 C1: Positive Control G P1 C2: Negative Control H P1 3. Incubate for 30 minutes at room temperature (20-28 C). 4. Discard the contents of the microwells and wash 3 times with 300µl of wash solution. 5. Dispense 100µl of enzyme conjugate into each well. 6. Incubate for 15 minutes at room temperature (20-28 C). 7. Discard the contents of the microwells and wash 3 times with 300µl of wash solution. 8. Dispense 100µl of TMB substrate solution into each well. 9. Incubate for 15 minutes at room temperature (20-28 C). 10. Add 100µl of stop solution to each well of the modules and incubate for 5 minutes at room temperature (20-28 C). 11. Read the optical density at 450nm and calculate the results. Bi-chromatic measurement with a reference at nm is recommended. The developed colour is stable for at least 30 minutes. Read optical densities during this time. Automation This kit is suitable for use on open automated ELISA processors. The test procedure detailed above is appropriate for use with or without automation. 2

3 PROCEDURAL NOTES Do not use kit components beyond their expiration dates. Do not interchange kit components from different lots. All materials must be at room temperature (20-28 C ). Have all reagents and samples ready before start of the assay. Once started, the test must be performed without interruption to get the most reliable and consistent results. Perform the assay steps only in the order indicated. Always use fresh sample dilutions. Pipette all reagents and samples into the bottom of the wells. To avoid carryover contamination, change the tip between samples and different kit controls. It is important to wash microwells thoroughly and remove the last droplets of wash buffer to achieve best results. All incubation steps must be accurately timed. Control sera or pools should routinely be assayed as unknowns to check performance of the reagents and the assay. Do not re-use microplate wells. Quality Control This test is only valid if the optical density at 450 nm for positive control (1) and negative control (2) as well as for the calibrator cut-off control (CO) complies with the respective range indicated in the insert enclosed to each test kit! If any of these criteria is not fulfilled, the results are invalid and the test should be repeated. Qualitative interpretation of results Evaluation of the Eu-ANCA S test is easily carried out by direct comparison of the optical density of each patient sample with the optical density of the cut-off control. Patient samples exhibiting optical densities higher than the optical density of the cut-off control are considered to be positive. Negative: OD Patient Positive: OD Patient < OD Cut-Off Control OD Cut-Off Control Semi-quantitative interpretation of results For detailed quantification of the results, each patient-od value can be expressed by the "Index Value". The Index Value is calculated by dividing the patient-od by the cut-off-od. Index Value = OD OD Sample Cut Off EU-ANCA S Negative: < 1.0 Positive: 1.0 The calculation of Index Values is not influenced by variations of the sample-od and/or cut-off-od. Index Values are recommended for long term validations (i.e. internal quality control samples). Further differentiation and typing should be carried out by using the quantitative Anti-PR3 and Anti- MPO ELISA. Limitation of the procedure 1. Reproducibility of results depends upon an accurate pipetting technique, proper application of incubation times and temperatures, accurate washing steps and reagents preparation. 2. The results obtained by this test must be used as diagnostic support only. 3. A definite clinical diagnosis should not be based on the results of a single test, but should be made by the physician after all clinical and laboratory findings have been evaluated. Interfering Substances No interference has been observed with haemolytic (up to 1000mg/dL), lipemic (up to 3 g/dl triglycerides) or bilirubin (up to 40 mg/dl) containing sera. Nor have any interfering effects been observed with the use of anticoagulants. However for practical reasons it is recommended that grossly haemolysed or lipemic samples should be avoided. Precautions 1. Some kit components contain Proclin 300 as preservative. When disposing reagents containing Proclin 300, flush drains with copious amounts of water to dilute the components below active levels. 2. Some kit components (i.e. controls, sample buffer and buffered wash solution) contain Sodium Azide as preservative. Sodium Azide (NaN3) is highly toxic and reactive in pure form. At the product concentrations (0.09%), though not hazardous. Despite the classification as nonhazardous, we strongly recommend using prudent laboratory practices. 3. TMB-substrate has an irritant effect on skin and mucosa. In case of possible contact, wash eyes with an abundant volume of water and skin with soap and abundant water. Wash contaminates objects before reuse them. If inhalated, take the person at open air. 4. Avoid contact with stop solution. If it comes into contact with skin, wash thoroughly with water and seek medical attention. 5. All sera used in this kit were found to be not reactive for Hepatitis B surface antigen (HBsAg), for anti-hcv and anti- HIV I and II. However, this material should be handled as potentially infectious. 3

4 6. If the outer package is damaged, please check carefully that all items listed in the section Supplied materials are present and unbroken. Check specially that vacuum is still present in the polyethylene bag containing the microtitre wells. In case of either liquid leakage from vials or lack of vacuum in the bag, the kit cannot be used. 7. Dispose of materials containing human serum or previously in contact with it and residual reagents as dangerous special waste. Dispose of according to local laws. 8. Wear disposable gloves while handling specimens or kit reagents and wash hands thoroughly afterwards. 9. Do not pipette by mouth. 10. Do not eat, drink, smoke or apply makeup in areas where specimens or kit reagents are handled. 11. Avoid contact between the buffered peroxide solution and easily oxidized materials; extreme temperature may initiate spontaneous combustion. Observe the guidelines for performing quality control in medical laboratories by assaying controls and/or pooled sera. During handling of all kit reagents, controls and serum samples observe the existing legal regulations. Bibliography 1. Jennette, J. C. and Falk, R. J. Antineutrophil Cytoplasmic Autoantibodies and Associated Diseases: A Review. Am. J. Kidney Dis. 1990, Vol. XV, No. 6: Gross, W. L. et al. Antineutrophil Cytoplasmic Autoantibody-Associated Diseases: A Rheumatologist s Perspective. Am. J. Kidney Dis. 1991, Vol. XVIII, No. 2: Wieslander, J. How are Antineutrophil Cytoplasmic Autoantibodies Detected? Am. J. Kidney Dis. 1991, Vol. XVIII, No. 2: Lesavre, P. Antineutrophil cytoplasmic antibodies antigen specificity. Am. J. Kidney Dis. 1991, Vol. XVIII, No. 2: Gross, W. L. et al. Immunodiagnostische und immunopathogenetische Bedeutung von Anti- Neutrophilen-Cytoplasma-Antikörpern. Dtsch. Med. Wochenschr. 1993, Vol. 118: Hagen, E. C. et al. Antineutrophil cytoplasmic autoantibodies: a review of the antigens involved the assays, and the clinical and possible pathogenic consequences. Blood 1993, Vol. 81:

5 Eu-ANCA S Test Immunometrico per la Determinazione Qualitativa degli Autoanticorpi IgG Anti-PR3 e anti-mpo. Solo per uso diagnostico in vitro. Campo di applicazione Eu-ANCA S è un test immunoenzimatico su fase solida (ELISA) per la determinazione qualitativa degli autoanticorpi di classe IgG anti PR3 e MPO nel siero umano e plasma. Il test è inteso per uso diagnostico in vitro solo come ausilio nella diagnosi di vasculite sistemica. Principio del metodo Una miscela di antigeni PR3 e MPO altamente purificati vengono legate alla micropiastra. Gli anticorpi diretti contro questi antigeni, se presenti nel siero o plasma diluiti, si legheranno all'antigene corrispondente.gli anticorpi non specifici vengono allontanati mediante lavaggio. Aggiungendo quindi anticorpi anti-igg, IgA, IgM umane marcati con perossidasi di rafano (HRP) si rileva il legame tra gli anticorpi del paziente e l antigene adeso alla micropiastra formando un complesso coniugato/anticorpo/antigene. Il coniugato in eccesso viene allontanato per lavaggio. In seguito all aggiunta di una soluzione substrato, si sviluppa una colorazione blu, la cui intensità è proporzionale alla concentrazione degli anticorpi IgG rispetto IgM rilevati. Dopo l aggiunta della soluzione d arresto, il colore vira dal blu al giallo. Il valore di Densità Ottica (D.O.) si misura con apposito lettore per micropiastre a 450nm. MATERIALI FORNITI Confezione 96 determinazioni. Qtà 1 Micropiastra a pozzetti separabili costituita da 12 strip da 8 pozzetti, ciascuno, sensibilizzata con una miscela di MPO e PR3 altamente purificati. Pronta all'uso. 2 fiale da 1.5 ml Controlli e calibratore in matrice serica tamponata (PBS, BSA, Sodio Azide< 0,1% p/p). Controllo positivo (1), controllo negativo (2), cut-off calibratore (CO) anti ANCA, i rispettivi intervalli di riferimento sono riportati nell inserto allegato. Reagenti pronti all'uso. 1 flacone da 20 ml Diluente campione (TRIS, NaN3 < 0,1% p/p), giallo, concentrato (5X). 1 flacone da 15 ml Coniugato (PBS, Proclin 300 < 0.5 % v/v), (rosa) contenente anticorpi policlonali di coniglio anti-igg umane. coniugati con perossidasi di rafano. Reagente pronto all'uso. 1 flacone da 15 ml TMB Substrato. Reagente pronto all'uso. 1 flacone da 15 ml Soluzione Stoppante (contiene acido). Reagente pronto all'uso. 1 flacone da 20 ml Tampone di lavaggio (PBS, NaN3 < 0,1% p/p), concentrato (50X) MATERIALE RICHIESTO MA NON FORNITO Strumentazione - Lettore di micropiastra con filtro a 450nm - Vortex - Pipette per 10µl, 100µl e 1000µl - Timer - Software per l elaborazione dei dati Preparazione dei reagenti - Acqua distillata o deionizziata - Cilindri graduati da 100 e 1000ml - Contenitore di plastica per la soluzione di lavaggio Criteri di prestazione e limiti del metodo Precisione (Riproducibilità) Intra-Assay: sono stati utilizzati 3 campioni specifici per MPO e PR3, sono stati ripetuti 24 volte in un unica seduta. Per ciascun campione sono stati calcolati i coefficienti di variazione percentuali. Inter-Assay: sono stati utilizzati 3 campioni con differenti titoli di MPO e PR3, sono stati testati in 6 sedute diverse, ripetuti per 8 volte in ciascuna seduta. Per ciascun campione sono stati calcolati i coefficienti di variazione percentuali. Intra-Assay Campioni N Media Inter-Assay CV [%] campioni N Media A1 (MPO) A1 (MPO) A2 (PR3) A2 (PR3) B1 (MPO) B1 (MPO) B2 (PR3) B2 (PR3) C1 (MPO) C1 (MPO) C2 (PR3) C2 (PR3) CV %] 5

6 Specificità La micropiastra è rivestita con una miscela altamente purificata di antigeni PR3 e MPO con affinità cromatografica.il kit Eu-ANCA S è specifico solo per gli anticorpi anti PR3 e MPO. Non è stata osservata nessuna cross-reattività. Calibrazione I kit è calibrato in unità arbitrarie. Conservazione e stabilità Tutti i reagenti devono essere conservati a 2-8 C. Mantenere la micropiastra sigillata in una busta a tenuta di umidità, con essiccante. Non esporre i reagenti al calore, sole o luce durante la conservazione e l'utilizzo. Stabilità dopo apertura I reagenti sono stabili fino alla scadenza riportata sulla confezione se conservati a 2-8 C Il diluente del campione e la soluzione di lavaggio diluiti sono stabili almeno 30 gg, se conservati a 2-8 C Stabilità durante il trasporto Studi accelerate dimostrano che tutti i reagenti sono stabili 96 ore a 37 C. Raccolta campioni Eu-ANCA S richiede l utilizzo di siero. È importante conservare l integrità del campione dal momento del prelievo fino all esecuzione del test. Eseguire il prelievo usando una tecnica non traumatica. Lasciare coagulare il sangue per almeno minuti in modo da facilitare la retrazione del coagulo. Prima di centrifugare staccare il coagulo dalle pareti della provetta. Non è necessario aggiungere conservanti al campione di siero per mantenerne l integrità. I campioni devono essere conservati a 2-8 C ed analizzati entro 5 giorni dal p relievo. Se l analisi non può essere eseguita entro 5 giorni, congelare il campione di siero (aliquota) a -20 C fino a 6 mesi. Evitare di congelare e scongelare più volte. Non usare frigoriferi a scongelamento automatico, poiché i campioni potrebbero essere sottoposti a cicli di congelamento-scongelamento che possono denaturare gli anticorpi e causare risultati inesatti. E meglio evitare contaminazioni da emolisi o lipemia, anche se l eventuale contaminazione non interferisce con questa analisi. E sconsigliato utilizzare sieri inattivati termicamente. Preparazione dei reagenti Preparazione del Diluente campioni Prima dell'uso, diluire il contenuto di ciascun flacone di Diluente campioni concentrato 5X con acqua distillata o deionizzata fino a un volume finale di 100ml. In frigorifero a 2-8 C la stabilità è di almeno 30gg dalla data di preparazione. Preparazione del Tampone di Lavaggio Prima dell'uso, diluire il contenuto di ciascun flacone di tampone di lavaggio concentrato 50X con acqua distillata o deionizzata fino a un volume finale di 1000ml. In frigorifero a 2-8 C la stabili tà è di almeno 30gg dalla data di preparazione. Preparazione dei campioni Diluire tutti i campioni 1:100 con il Diluente campioni. Dispensare 10µl di campione in 990µl di Diluente campioni in una provetta di plastica. Miscelare bene. Calibratore e controlli sono pronti per l'uso e non necessitano di diluizione. Procedura 1. Prelevare il numero di strip necessario per l'analisi in funzione del numero di campioni, controlli e calibratori 2. Dispensare nei rispettivi pozzetti 100µl di calibratore, controlli e campioni prediluiti in duplicato A CO P2 B CO P2 C C2 P... CO: Cut-off Calibratore D C2 P.. P1, P2,.. Campioni 1, 2,... E C1 C1: Controllo Positivo F C1 C2: Controllo Negativo G P1 H P1 3. Incubare per 30 minuti a temperatura ambiente (20-28 C). 4. Svuotare i pozzetti e lavare 3 volte con 300µl di soluzione di lavaggio. 5. Dispensare 100µl di coniugato in ciascun pozzetto. 6. Incubare per 15 minuti a temperatura ambiente (20-28 C). 7. Svuotare i pozzetti e lavare 3 volte con 300µl di soluzione di lavaggio. 8. Dispensare 100µl di TMB in ciascun pozzetto. 9. Incubare per 15 minuti a temperatura ambiente (20-28 C). 10. Dispensare 100µl di Soluzione Stoppante a ciascun pozzetto e incubare per 5 minuti a temperatura ambiente. 11. Leggere le Densità Ottiche a 450nm e calcolare il risultato. E' raccomandata una lettura in bi-cromatismo con una lunghezza d'onda di riferimento a nm. Il colore è stabile per almeno 30 minuti. Leggere la Densità Ottica in questo periodo di tempo. 6

7 Automazione Questo kit è adatto per l'uso su processori automatici ELISA aperti. La procedura di cui sopra è appropriata per l'uso con o senza automazione. Note procedurali Non utilizzare i componenti dopo la data di scadenza. Non intercambiare componenti di lotto diverso. Tutto il materiale deve essere a temperatura ambiente (20-28 C) prima di eseguire il test. Preparare tutti i reagenti e i campioni prima dell'inizio del test. Una volta avviato, il test deve essere eseguito senza interruzione per ottenere i risultati più affidabili e coerenti. Eseguire il test solo nell ordine indicato. Utilizzare sempre diluizioni dei campioni fresche. Pipettare tutti i reagenti e i campioni sul fondo del pozzetto. Per evitare fenomeni di trascinamento, cambiare puntale ad ogni campione e controllo. E importante lavare accuratamente la piastra e rimuovere i residui di soluzione di lavaggio per ottenere i migliori risultati. Tutti i tempi di incubazione devono essere accuratamente rispettati. Sieri di controllo o un pool di sieri dovrebbero essere testati come campioni sconosciuti per verificare le performance dei reattivi e del test. Non riutilizzare la micropiastra. Controllo di qualità Il test è valido solo se la D.O. a 450nm per il controllo positivo (1), il controllo negativo (2) e il cut-off calibratore (CO) ricadono negli intervalli di riferimento indicati nell inserto allegato a ciascun kit. Se tutti questi criteri non sono rispettati, i risultati devono essere considerati non validi e il test deve essere ripetuto. Interpretazione qualitativa La valutazione qualitativa dell Eu-ANCA S è il risultato della comparazione della densità ottica del paziente e la densità ottica del cut-off : i pazienti con densità ottiche superiori al cut-off sono da considerare positivi. Negativo: OD Patiente < OD Controllo di Cut-Off Positivo: OD Patiente OD Controllo di Cut-Off Interpretazione semi-quantitativa Per una quantificazione del risultato, ogni OD del paziente puo essere espresso in INDEX Value : questo indice è calcolato dal rapport fra OD del paziente con OD del cut-off. Index Value = OD OD campione Cut Off EU-ANCA S Negativo: < 1.0 Positivo: 1.0 Il calcolo dell Index Value non risente di fattori in grado di influenzare le D.O. del campione e del Cut-Off calibratore all interno di una seduta. L Index Value è particolarmente utile per validazioni a lungo termine (p.e. per i controlli di qualità interni). Limiti della procedura 1. La riproducibilità dei risultati dipende da una tecnica accurata di dispensazione, dalla scrupolosa osservazione dei periodi e delle temperature di incubazione, dall esecuzione di lavaggi accurati ed un accurata preparazione dei reagenti. 2. I valori ottenuti con questo test devono essere interpretati solo come supporto diagnostico. 3. EU-ANCA S è un aiuto diagnostico. La diagnosi clinica definitiva non dovrebbe essere basata sui risultati di un singolo test, ma deve essere fatta dal medico dopo la valutazione di tutti i risultati clinici e di laboratorio. Sostanze Interferenti Non è stata osservata interferenza in sieri emolizzati (fino a 1000mg/dL), lipemici (fino a 3 g/dl di trigliceridi) o contenenti bilirubina (fino a 40 mg/dl). Né sono stati osservate interferenze con l'uso di anticoagulanti. Tuttavia, per motivi pratici, si raccomanda di evitare campioni emolizzati o lipemici. Precauzioni 1. Alcuni componenti contengono Proclin 300 come conservante. Quando si eliminano i reagenti contenenti Proclin 300, pulire le tubature con abbondante acqua per diluire i componenti di sotto dei livelli di attività. 2. Alcuni componenti (per esempio controlli, diluente del campione e la soluzione di lavaggio) contengono Sodio Azide come conservante. La Sodio Azide (NaN3) concentrate è altamente tossica e reattiva. Alla concentrazione d uso (0.09%), non è pericolosa. Nonostante la classificazione come non pericolosa, si consiglia di utilizzare pratiche di laboratorio prudenti. 3. La soluzione substrato-tmb è irritante per la pelle e le mucose. In caso di contatto, risciacquare gli occhi con abbondante acqua e lavare la cute con sapone e abbondante acqua. Lavare i vestiti contaminati prima di riusarli. In caso di inalazione, trasportare il soggetto all aria aperta. 4. Evitare contatto con la soluzione di stop. In caso di contatto con la pelle, lavare accuratamente con acqua e richiedere l'intervento medico. 5. I sieri usati per i controlli di questo kit sono risultati negativi all analisi per l antigene di superficie del virus dell epatite B (HBsAg) e per gli anticorpi anti-hcv ed anti-hiv I e II. Tuttavia è consigliabile manipolarli come se si trattasse di materiale potenzialmente infetto. 6. In caso di danneggiamento dell imballo esterno, accertarsi che siano presenti ed integri tutti i componenti elencati nella sezione Materiali forniti. Verificare in particolare la presenza del vuoto nel sacchetto di polietilene contenente i pozzetti. In presenza di perdita di liquido dai flaconi o di assenza di vuoto nel sacchetto, il kit non deve essere utilizzato. 7

8 7. Smaltire i materiali contenenti siero umano o precedentemente in contatto con esso e reagenti residui come rifiuti speciali pericolosi. Smaltire in conformità alle leggi locali. 8. Indossare guanti monouso durante la manipolazione dei campioni e dei reagenti del kit e lavarsi bene le mani dopo l utilizzo. 9. Non pipettare a bocca. 10. Non mangiare, bere, fumare o applicare cosmetici nelle aree in cui i campioni o i reagenti vengono gestiti. 11. Evitare il contatto tra la soluzione di perossidasi e materiali facilmente ossidabili; temperature estreme possono avviare una combustione spontanea. Osservare le linee guida per il controllo di qualità nei laboratori clinici testando controlli e / o pool di sieri. Durante la movimentazione di tutti i reagenti, controlli e campioni di siero osservare le norme giuridiche esistenti. Bibliografia 7. Jennette, J. C. and Falk, R. J. Antineutrophil Cytoplasmic Autoantibodies and Associated Diseases: A Review. Am. J. Kidney Dis. 1990, Vol. XV, No. 6: Gross, W. L. et al. Antineutrophil Cytoplasmic Autoantibody-Associated Diseases: A Rheumatologist s Perspective. Am. J. Kidney Dis. 1991, Vol. XVIII, No. 2: Wieslander, J. How are Antineutrophil Cytoplasmic Autoantibodies Detected? Am. J. Kidney Dis. 1991, Vol. XVIII, No. 2: Lesavre, P. Antineutrophil cytoplasmic antibodies antigen specificity. Am. J. Kidney Dis. 1991, Vol. XVIII, No. 2: Gross, W. L. et al. Immunodiagnostische und immunopathogenetische Bedeutung von Anti- Neutrophilen-Cytoplasma-Antikörpern. Dtsch. Med. Wochenschr. 1993, Vol. 118: Hagen, E. C. et al. Antineutrophil cytoplasmic autoantibodies: a review of the antigens involved the assays, and the clinical and possible pathogenic consequences. Blood 1993, Vol. 81: PLATE Microplate Micropiastra DIL X 5X Diluent Diluente CAL X Calibrator Calibratore SUBS TMB Substrate Substrato CONTROL X Control Controllo STOP Stop Stoppante WASH X 50X Washing solution Soluzione di lavaggio CONJ X Conjugate Coniugato Eu-ANCA S 96 tests, codice 7648 IVD Data di preparazione: Eurospital SpA Trieste, via Flavia 122 Tel Fax info@eurospital.com 8