CRP (Ref. NPP45N) REAGENTI PER LA DETERMINAZIONE QUANTITATIVA DELLA CRP E DELLA CRP ULTRASENSIBILE NEL SIERO UMANO CON METODO NEFELOMETRICO

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1 CRP (Ref. NPP45N) REAGENTI PER LA DETERMINAZIONE QUANTITATIVA DELLA CRP E DELLA CRP ULTRASENSIBILE NEL SIERO UMANO CON METODO NEFELOMETRICO PER USO DIAGNOSTICO IN VITRO APPLICAZIONI CLINICHE La Proteina C Reattiva (CRP) è una delle proteine della fase acuta. L innalzamento dei valori di CRP nel siero si possono riscontrare in vari quadri clinici come malattie infiammatorie, febbri reumatoidi, stati febbrili, artrite reumatoide, ascessi addominali, peritoniti, tumori maligni, infarto del miocardio etc., pertanto, il dosaggio della CRP fornisce informazioni utili per la diagnosi, la terapia ed il controllo del decorso della malattia. L aumento della concentrazione della CRP avviene in maniera aspecifica, pertanto i risultati dovrebbero essere apprezzati con una completa anamnesi clinica. PRINCIPIO DEL METODO La CRP contenuta nel siero umano forma degli immunocomplessi, reagendo con gli anticorpi specifici adesi su particelle di polistirene. Sfruttando il fenomeno della diffrazione della luce che questi immunocomplessi provocano, si è in grado, per mezzo del nefelometro, di misurare l'intensità della luce diffratta, che risulta proporzionale alla concentrazione della CRP presente nel campione in esame. La valutazione avviene per confronto con un calibratore a concentrazione nota. REAGENTE CONTENUTO NELLA CONFEZIONE I reagenti devono essere conservati a 2-8 C. La data di scadenza è indicata sull etichetta e si riferisce al componente liofilo conservato chiuso a 2-8 C. R/L Reagente CRP: 3 flaconi (2.4 ml) contenente latex rivestito con antisiero anti-crp. Conservante: NaN 3 (<0.1%). Pronto per l'uso. Dopo l'impiego, conservare il reagente ermeticamente chiuso a 2-8 C per 4 settimane. Non congelare. R/S Reagente Supplementare CRP: 1 flacone (2.4 ml) di soluzione tamponata e catalizzatore. Conservante: NaN 3 (<0.1%). Pronto per l uso. Dopo l'impiego, conservare il reagente ermeticamente chiuso a 2-8 C per 4 settimane. Non congelare. 1

2 MATERIALE NECESSARIO MA NON FORNITO L'antisiero deve essere utilizzato con i seguenti reagenti: Calibratore Proteine S, (Ref. NCPP1) Controllo Proteine S/L, (Ref. NCPP2L) Controllo Proteine S/M, (Ref. NCPP2M) Controllo Proteine S/H, (Ref. NCPP2H) Controllo CRP Ultra-sensibile, (Ref. NCPP2US) Diluente, (Ref. NDPP1) Tampone di Reazione, (Ref. NDPP2) Nefelometro Delta (Ref ) Altro materiale di consumo e attrezzature sono descritte nel manuale d'uso del Nefelometro Delta. AVVERTENZE E PRECAUZIONI Per ottenere risultati corretti e riproducibili, è necessario osservare le seguenti norme: Non usare i reagenti dopo la data di scadenza. Evitare accuratamente contaminazioni tra campioni e reagenti; a tal fine è consigliabile usare pipette con puntali monouso per ogni campione e per ogni reattivo. Per evitare contaminazioni personali ed ambientali, è necessario osservare le seguenti norme di sicurezza: Utilizzare guanti monouso durante la manipolazione di materiale potenzialmente infetto e durante il dosaggio. Non fumare, mangiare, bere o applicare cosmetici durante l'esecuzione del dosaggio. Evitare la produzione di schizzi e la formazione di aerosol; in tal caso, ripulire accuratamente con ipoclorito di sodio ad una concentrazione del 3%. Il mezzo adoperato per la pulizia deve essere trattato come residuo potenzialmente infetto ed eliminato secondo le modalità sotto riportate. I reagenti per cui non si fornisce la scheda di sicurezza non contengono sostanze chimiche pericolose o se presenti, queste sono al di sotto dei limiti di concentrazione definiti nel D.Lgs.285/98 e nella direttiva CEE 91/155. Ai sensi del D.L. italiano n. 22 del , che fa riferimento alle direttive CEE (91/156/CEE, 91/689/CEE, 94/62/CEE) tutti i rifiuti provenienti da lavorazioni manuali e/o in automatico sono classificati rifiuti speciali pericolosi con codice di classificazione CER ; devono quindi essere eliminati affidandoli a ditte autorizzate al ritiro ed allo smaltimento. RACCOLTA E PREPARAZIONE DEI CAMPIONI Il dosaggio può essere effettuato su campioni di siero umano. I campioni di siero devono essere completamente coagulati e, dopo essere stati centrifugati, non devono contenere particelle o tracce di fibrina in sospensione; prima del dosaggio, accertarsi che i campioni siano perfettamente limpidi. Pertanto, campioni fortemente lipemici o campioni congelati, che dopo lo scongelamento si presentano torbidi, devono essere chiarificati mediante centrifugazione (10' a ca g). I campioni di siero possono essere conservati a 2-8 C per 8 giorni, per tempi più lunghi (1 anno) si consiglia di congelarli a -20 C. Evitare ripetuti congelamenti e scongelamenti. 2

3 PROCEDIMENTO OPERATIVO Tutte le fasi vengono eseguite automaticamente dallo strumento Attendere che i reagenti ed i campioni raggiungano la temperatura ambiente (15-25 C). Seguire il procedimento operativo descritto sul manuale d'uso del Nefelometro, che prevede l'allestimento di quanto segue: Curva di calibrazione: viene preparata automaticamente dallo strumento mediante diluizioni seriali del Calibratore Proteine S (Ref. NCPP1) con l'apposito diluente (Ref. NDPP1). Le diluizioni effettuate vengono quindi impiegate per la calibrazione, che rimane valida purché il dosaggio dei sieri di controllo rientri nei limiti attesi. La calibrazione deve essere necessariamente ripetuta ogni qualvolta si utilizzi un nuovo lotto di reagente. Campioni: prima del dosaggio, i sieri vengono diluiti automaticamente dallo strumento alla diluizione di 1:400 (secondo la metodica CRP) oppure 1:20 (secondo la metodica CRP-us) utilizzando l'apposito diluente (Ref. NDPP1). Qualora i valori dei campioni siano al di fuori dell'ambito di misura è opportuno ripetere il test, utilizzando una diluizione maggiore o minore. CONTROLLO DI QUALITÀ INTERNO Per ogni serie di campioni e ogni volta che si utilizza un nuovo flacone di reagente, è necessario effettuare un controllo di accuratezza e di precisione, utilizzando il Controllo per Proteine S/L (Ref. NCPP2L), S/M (Ref. NCPP2M) e S/H (Ref. NCPP2H) per la metodica CRP e il controllo CRP Ultra-sensibile (Ref. NCPP2US)per la metodica CRP-us. I controlli vengono trattati come i campioni in esame. Per i limiti attesi di tali controlli fare riferimento alla relativa tabella fornita a corredo della confezione dei controlli stessi. CALCOLO DEI RISULTATI La valutazione dei campioni viene eseguita in modo automatico, mediante elaborazione dei risultati con una funzione logit-log. VALORI NORMALI I valori di CRP sotto riportati sono soltanto indicativi. Si raccomanda a ciascun laboratorio di stabilire i propri intervalli di riferimento : Proteina CRP CRP Ultrasensibile siero < 5.0 mg/l < 0.3 mg/dl 3

4 CARATTERISTICHE METODOLOGICHE SPECIFICITA' Il reagente utilizzato risulta essere specifico per la determinazione della CRP umana. SENSIBILITA' La sensibilità della determinazione viene definita dal limite inferiore della curva di calibrazione e dipende quindi dalla concentrazione delle proteine nel calibratore. Gli ambiti di misura sono riportati nel manuale d'uso del Nefelometro Delta. PRECISIONE La precisione è stata valutata misurando la variabilità intra-saggio ed intersaggio. Intra-saggio Inter-saggio Proteina n repl. Valore medio [mg/l] CV % n repl. Valore medio [mg/l] CV % CRP CORRELAZIONE TRA METODI Campioni di siero sono stati esaminati con il reagente Radim CRP umana (y). Tali risultati sono stati messi a confronto con un sistema nefelometrico di riferimento (x). Le correlazioni dei risultati sono riportate nella tabella sottostante: Proteina Regressione lineare Coeff. di correlazione n sieri CRP Y = LIMITI DEL TEST La presenza di torbidità o di particelle può interferire nell'esecuzione del test. Si raccomanda, pertanto, di rimuovere mediante centrifugazione eventuali particelle dovute a sieri non completamente coagulati o a denaturazione proteica. Per motivazioni tecniche relative alla produzione e/o all'invecchiamento dei campioni, i risultati ottenuti con i sieri di controllo e con i sieri per il controllo di qualità inter-laboratori possono differire in funzione del metodo utilizzato. Può quindi rendersi necessario valutare i risultati ottenuti facendo riferimento a valori specifici per i diversi metodi utilizzati. 4

5 CRP (Ref. NPP45N) REAGENTS FOR THE QUANTITATIVE DETERMINATION OF CRP AND HIGH SENSITIVITY CRP IN HUMAN SERUM WITH NEPHELOMETRIC METHOD FOR IN VITRO DIAGNOSTIC USE ONLY CLINICAL APPLICATIONS C Reactive Protein (CRP) is one of the acute phase proteins. A rise in CRP levels in serum can be observed in various clinical situation as inflammatory diseases, rheumatoid fevers, febrile states, rheumatoid arthritis, abdominal abscesses, peritonitis, malignant tumours, myocardial infarction etc. therefore, the CRP assay provides useful information for diagnosis, therapy and for following the course of a disease. The increase in CRP concentrations occurs in a non specific manner, therefore the results must be evaluated with a complete clinical anamnesis. PRINCIPLE OF THE ASSAY CRP contained in human serum forms immunocomplexes by reacting with specific antibodies coated to polystyrene particles. By exploiting the light diffraction phenomenon which these immunocomplexes provoke, it is possible, by means of the nephelometer, to measure the intensity of the diffracted light, which is proportional to the concentration of the CRP present in the sample. The evaluation takes place by comparison with a calibrator of known concentration. REAGENTS CONTAINED IN THE KIT - Store the reagent at 2-8 C. - The expiry date is given on the label and it refers to the closed component stored at 2-8 C. R/L CRP Reagent: 3 vials (2.4 ml) of latex coated with specific antibodies to human CRP. Preservative: NaN3 (< 0.1 %). Ready for use. After each use store the reagent, sealed hermetically, at 2-8 C for 4 weeks. Do not freeze. R/S CRP Supplementary Reagent: 1 vial (2.4 ml) of buffered solution of detergents. Preservative: NaN3 (< 0.1 %). Ready for use. After each use store the reagent, sealed hermetically, at 2-8 C for 4 weeks. Do not freeze. 5

6 REQUIRED MATERIALS NOT SUPPLIED WITHIN THE KIT The antiserum must be used with the following reagents: Protein Calibrator S, (Ref. NCPP1) Protein Control S/L, (Ref. NCPP2L) Protein Control S/M, (Ref. NCPP2M) Protein Control S/H, (Ref. NCPP2H) CRP High Sensitivity Control, (Ref. NCPP2US) Diluent, (Ref.NDPP1) Reaction Buffer, (Ref.NDPP2) Diluent, (Ref. NDPP-50) Delta Nephelometer (Ref ) Other laboratory consumables and equipment are described in the Delta Nephelometer users manual. WARNINGS AND PRECAUTIONS In order to obtain correct and reproducible results, it is necessary to observe the following guidelines: Do not use the reagents after their expiry date. Carefully avoid cross-contamination between samples and reagents; to this purpose it is advisable to use pipettes with disposable tips for each sample and for each reaction. In order to avoid personal and environmental contamination, it is necessary to observe the following safety instructions: Use disposable gloves during the manipulation of potentially infected materials and during the assay Do not smoke, eat, drink or apply cosmetics whilst carrying out the assay. Avoid creating splashes and the formation of aerosols; in such a case, carefully clean with 3% sodium hypochlorite. The means used for cleaning must be treated as potentially infected residue and disposed accordingly to the instructions reported below. The reagents for which safety data sheets are not supplied do not contain dangerous chemical substances or, if present, these are below the concentration limits defined in the Legislative Decree 285/98 and in the EU directive 91/155. Under the Italian legislative decree N 22 of , which makes reference to the EU directives (91/156/CEE, 91/689/CEE, 94/62/CEE) all wastes originating from manual and-or automatic processing are classified as special dangerous wastes with classification code CER ; they must therefore be eliminated by entrusting them to companies authorised for their collection and disposal. SAMPLES COLLECTION AND PREPARATION Assay can be performed on samples of human serum. Serum samples must be completely coagulated and, after centrifugation, must not contain particles or traces of fibrin in suspension; prior to assay, make sure that the samples are perfectly clear. Therefore, heavily lipemic or frozen samples, which show turbidity following thawing, must be clarified by centrifugation (10' at approx g). The serum samples can be stored at 2-8 C for 8 days, for longer periods of time (1 year) it is advised to freeze them at -20 C. Avoid repeated freezing and thawing. 6

7 OPERATIONAL PROCEDURE All the steps are automatically executed by the instrument Please wait until the reagents and the samples reach room temperature (15-25 C). Follow the operational procedure described in the Delta Nephelometer users manual, which provides for the preparation of the following data: Calibration curve: it is automatically prepared by the instrument through serial dilutions of the Protein Calibrator S (Ref. NCPP1) with suitable Diluent (Ref. NDPP1). The dilutions carried out are therefore used for the calibration, which remains valid providing the assay of the control sera enters within the expected limits. The calibration must necessarily be repeated whenever a new batch of reagent is used. Samples: prior to assay, the sera are automatically diluted by the instrument at a dilution of 1:400 (according to CRP protocol) or 1:20 (according to CRP-us protocol) using the suitable Diluent (Ref. NDPP1). Whenever the sample values are outwith the measurement range it is appropriate to repeat the test, using a greater or lesser dilution. INTERNAL QUALITY CONTROL For each series of samples and every time a new vial of reagent is used, it is necessary to perform an accuracy and precision check, S/L (Ref. NCPP2L), S/M (Ref. NCPP2M), S/H (Ref. NCPP2H) Protein Controls, for CRP protocol and CRP High Sensitivity Control (Ref. NCPP2US), for CRP-us protocol. The controls are treated as samples under test. For the limits expected by such controls please refer to the relevant table supplied with the packaged controls. CALCULATION OF RESULTS The evaluation of the samples is carried out automatically, through the elaboration of the results with a logit-log calibration grid. NORMAL VALUES The CRP values reported below are only indicative. It is recommended that each laboratory establishes their own reference range: Protein CRP High Sensitivity CRP serum < 5.0 mg/l < 0.3 mg/dl METHODOLOGICAL FEATURES SPECIFICITY The reagent used is specific for the determination of human CRP. SENSITIVITY The sensitivity of the determination is defined by the lower limit of the calibration curve and therefore depends on the protein concentration of the calibrator. The measurement ranges are reported in the Delta Nephelometer users manual. 7

8 PRECISION Precision has been evaluated by measuring the intra-assay and inter-assay variability. Intra-assay Inter-assay Protein n repl. Mean value [mg/l] CV % n repl. Mean value [mg/l] CV % CRP METHOD COMPARISON Serum samples have been examined with the Radim human CRP reagent (y). Such results have been compared with a nephelometric reference system (x). The correlations of the results are reported in the table below: Protein Linear regression Correlation coeff. n serum samples CRP Y = TEST LIMITS The presence of turbidity or particulates can interfere with the execution of the test. It is recommended, therefore, to remove possible particulates due to incompletely coagulated sera or protein denaturation by centrifugation. For technical reasons relating to the production and/or sample ageing, the results obtained with the control sera and with inter-laboratory quality control sera can differ as a function of the method used. It can therefore be necessary to evaluate the results obtained by referring to specific values for the different methods used. M316N - Rev.2 Maggio 2007 RADIM SpA - Via del Mare, Pomezia (Roma) Italia Tel.: 0039/06/ Fax: 0039/06/ ; National Order Entry: 0039/06/ ; Export Dept.: 0039/06/ ; Customer Care: 0039/06/ ; 8